是整體甲基化進(jìn)程所必須的[2]。FTO是ALKB家族的成員，作為個(gè)被發(fā)現(xiàn)的去甲基酶，可影響剪切因子SRSF2的RNA結(jié)合能力，進(jìn)而調(diào)控pre-mRNA的剪切加工過程[3]。目前已發(fā)現(xiàn)FTO調(diào)節(jié)異常與肥胖、大腦畸形和生長(zhǎng)遲緩相關(guān)，揭示m6A可能對(duì)這些疾病具有重要的調(diào)節(jié)功能[4-6]。ALKBH5是ALKB家族中被發(fā)現(xiàn)具有去甲基作用的另一個(gè)成員，以RNaseA敏感的方式與核小斑共定位，它可直接催化m6A-甲基化腺苷去除甲基而不同于FTO的氧化去甲基化[7].此外，ALKBH5和它的去甲基化活性影響新生mRNA合的成和剪切效率[7]，且ALKBH5敲除雄性小鼠表現(xiàn)出精子發(fā)生異常，這可能是精子發(fā)生相關(guān)基因表達(dá)改變的結(jié)果[7]。m6AmRNA修飾執(zhí)行其功能主要通過兩個(gè)途徑：精細(xì)調(diào)控甲基化轉(zhuǎn)錄本的結(jié)構(gòu)，以阻止或誘使蛋白-RNA相互作用；或被直接由m6A結(jié)合蛋白識(shí)別，誘發(fā)續(xù)反應(yīng)。目前一類含有YTH功能結(jié)構(gòu)域的蛋白被鑒定為m6A修飾的結(jié)合蛋白。其中YTHDF1,YTHDF2,YTHDF3，YTHDC1和YTHDC2己被證實(shí)是ｍ６Ａ的結(jié)合蛋白.YTHDF1主要影響ｍ６Ａ修飾基因的翻譯，YTHDF2主要影響ｍ６Ａ修飾基因的降解，而YTHDC1結(jié)合ｍ６Ａ修飾的基因影響其剪接。HNRNPC是一種豐富的核RNA結(jié)合蛋白，參與pre-mRNA的加工[8]。細(xì)胞污染的處理的技術(shù)。云南實(shí)驗(yàn)科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室

且研究表明HNRNPC通過m6A與RNA結(jié)合調(diào)控目標(biāo)轉(zhuǎn)錄本的豐度和選擇性剪切[9].圖1m6A修飾的酶系統(tǒng)[10]m6A生物學(xué)功能越來越多的證據(jù)表明m6A修飾在哺乳動(dòng)物中發(fā)揮重要的生物功能。例如，在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控RNA的穩(wěn)定性[11]、定位[12]、運(yùn)輸、剪切[13]和翻譯[14]。ClaudioR.等發(fā)現(xiàn)依賴METTL3的pri-miRNA甲基化，會(huì)促進(jìn)DGCR8識(shí)別和加工，從而促進(jìn)microRNA的成熟[15]。此外，m6A識(shí)別蛋白HNRNPA2B1促進(jìn)pri-miRNA加工成pre-miRNA[16]。另外，環(huán)狀RNA上m6A的修飾能促進(jìn)環(huán)狀RNA的翻譯[17]。m6A修飾在基因表達(dá)調(diào)控中起著重要的作用，其調(diào)控機(jī)制的異常可能與人類疾病或相關(guān)。目前發(fā)現(xiàn)m6A可能會(huì)影響精子發(fā)育（ALKBH5，METTL3，Ythdc2）、發(fā)育（METTL3、FTO、ALKBH5）、免疫（METTL3）、UV誘導(dǎo)的DNA損傷反應(yīng)（METTL3，F(xiàn)TO）、生成（YTHDF2）或轉(zhuǎn)移（METTL14）、干細(xì)胞更新（METTL14）、脂肪分化（FTO）、生物節(jié)律、細(xì)胞發(fā)育分化、細(xì)胞分裂及其它的一些生命過程。例如，ALKBH5敲除的雄性小鼠增加了mRNA中的m(6)A修飾，其特點(diǎn)是凋亡影響減數(shù)分裂中期的精子細(xì)胞，引起生育能力受損[7]。METTL3和METTL14增加弱精癥精子的m6A水平[18]，在生殖細(xì)胞中，METTL3的敲除嚴(yán)重抑制精子分化和減數(shù)分裂的發(fā)生。云南裸鼠科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)生物分子學(xué)的研究范圍非常廣，包括蛋白質(zhì)、核酸、糖類、脂質(zhì)等生物分子的結(jié)構(gòu)、功能和相互作用等方面。

用伊紅乙醇液對(duì)比染色1~3min。（4）將切片放入95%乙醇中洗去多余的紅色，然后放入無水乙醇中3~5min，吸干后將切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3~5min。3、觀察在鏡下可見卵巢呈扁橢圓形，表面為單層扁平上皮細(xì)胞或單層立方上皮，卵巢實(shí)質(zhì)分為皮質(zhì)和髓質(zhì)?？梢娚掀ぃ悸雅莺蜕L(zhǎng)卵泡。卵巢組織中各發(fā)育階段卵泡及卵巢基質(zhì)的形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰可見,細(xì)胞核呈藍(lán)紫色,細(xì)胞質(zhì)及間質(zhì)成分呈淺紅色,卵泡中卵母細(xì)胞、卵泡細(xì)胞、透明帶均清晰可見。注意事項(xiàng)1.取材注意事項(xiàng)（1）取材動(dòng)作要迅速，不宜作太久的拖延以免組織細(xì)胞的成分、結(jié)構(gòu)等發(fā)生變化。（2）切片材料應(yīng)根據(jù)需要觀察的部位進(jìn)行選擇，盡可能不要損傷所需要的部分。（3）切取的組織塊不宜太大，以利于固定劑穿透，通常以5mmx5mmx2mm或10mmx10mmx2mm為宜。2.固定注意事項(xiàng)（1）一般固定液，都以新配為好，配好后應(yīng)貯存在陰涼處，不宜放在日光下，以免引起化學(xué)變化，失去固定作用。（2）有些混合固定液的成份之間會(huì)發(fā)生氧化還原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早，固定時(shí)就沒有作用了。（3）固定材料時(shí)，固定液必須充足，一般為材料塊的20~30倍，有些水分多的材料，中間應(yīng)更換1~2次新液。（4）材料固定完畢后。

轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果及TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析）圖5RNA-Seq和m6A-seq聯(lián)合鑒定SOCS2是介導(dǎo)的m6A修飾的下游靶基因PLoSOne2015,在許多不同種類的RNA中，都已觀察到N6-腺苷(m6A)的甲基化，但其在microRNAs中還沒有被研究。研究者在FTO1C1,FTO2D4和FTO3C3細(xì)胞系中，通過敲除m6A甲基轉(zhuǎn)移酶FTO篩選到表達(dá)差異的microRNA,說明miRNA受m6A甲基化的調(diào)控。進(jìn)一步通過MeRIP-Seq發(fā)現(xiàn)相當(dāng)一部分的microRNA具有m6A修飾。通過motif分析，他們發(fā)現(xiàn)了區(qū)分甲基化和非甲基化microRNA的一致序列。該文章所述的表觀遺傳修飾在基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的復(fù)雜性上增加了一個(gè)新的層次。圖FTO敲除對(duì)甲基化的miRNAs的穩(wěn)定狀態(tài)的影響。參考文獻(xiàn)Y,DominissiniD,RechaviG,HeC:Geneexpressionregulationmediatedthroughreversiblem(6)(5):(1):(12):(6):(1):(1):(uridine)(41):(6)(7540):(1):(7481):(4):(6)A-LAIC-seqrevealsthecensusandcomplexityofthem(6)(8):UTRm(6)(4):(7544):(6)(6):(5):(7667):(2):"">panstyle="color:#f5c81c;">xiainducesthebreastcancerstemcellphenotypebyHIF-dependentandALKBH5-mediatedm(6)(14):"">panstyle="color:#f5c81c;">(40):(6)(3):(1):(1):(4):(11):。免疫系統(tǒng)，人體的免疫系統(tǒng)由免疫細(xì)胞、免疫分子構(gòu)成。

把膜先用TBST泡洗兩遍再用5%脫脂奶粉或者BSA室溫封閉1-2小時(shí)。注意一定要讓蛋白面充分接觸封閉液。2、孵一抗脫脂奶粉封閉的話，要用TBST泡洗三遍再轉(zhuǎn)移至一抗溶液中，BSA封閉的可以直接轉(zhuǎn)移至一抗中。如果膜的寬(膜是一個(gè)長(zhǎng)方形，這里的寬與長(zhǎng)相對(duì)應(yīng))不大于8毫米，我習(xí)慣置于15毫升離心管中孵育，兩條膜"背對(duì)背"式放置于一個(gè)管子里(3毫升液體即可)。如果大于8毫米，就用普通的5格的一抗孵育盒(4毫升即可)。4度過夜，一般是12-18個(gè)小時(shí)，注意放置水平，用搖床。內(nèi)參等蛋白豐度很高的如果孵久了可能出現(xiàn)條帶連在一起的情況，這時(shí)可以縮短孵育時(shí)間或者降低一抗的濃度。六、孵二抗顯影1、孵二抗室溫一個(gè)小時(shí)足矣。這步要注意的是建議用5%BSA或者脫脂奶粉稀釋二抗，這樣背景會(huì)干凈許多。也要注意膜的蛋白面要充分接觸二抗溶液，我們一般一條膜一個(gè)槽地孵。2、顯影這一步有個(gè)細(xì)節(jié)可能有些同學(xué)沒注意到，就是ECL發(fā)光液要與HRP反應(yīng)一分鐘后顯影效果才會(huì)更好，還有要注意的是顯影液要均勻覆蓋，一般第二次顯影(加新的顯影液)比一次好看。常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型按產(chǎn)生原因分為以下5類：自發(fā)性動(dòng)物模型、誘發(fā)型模型、遺傳工程模型、醫(yī)學(xué)模型陰性模型。海南大鼠科研技術(shù)服務(wù)外包

細(xì)胞的功能也是細(xì)胞生物學(xué)的研究重點(diǎn)之一。云南實(shí)驗(yàn)科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室

常見的有理染色、WesternBlot、PCR等），實(shí)驗(yàn)儀器是否需要預(yù)約使用。如果需要外送公司檢測(cè)，需要提前聯(lián)系好商家，以及了解清楚樣本如何獲取，如何運(yùn)輸。飼養(yǎng)動(dòng)物及干預(yù)動(dòng)物購(gòu)買后需要將時(shí)間節(jié)點(diǎn)提前規(guī)劃好，比如，周需要做什么？測(cè)量體重？觀察飲食？測(cè)量需要的指標(biāo)？中間有無特殊操作？比如灌胃、測(cè)量體重、做CT檢測(cè)、取血？……第幾周取材？取材需要哪些？預(yù)實(shí)驗(yàn)方案就要提前設(shè)計(jì)清楚以上內(nèi)容。取材及樣品準(zhǔn)備取材需要提前到動(dòng)物房禁食、稱體重、取出動(dòng)物、手術(shù)的、固定所需要的試劑和EP管，WesternBlot和PCR所需要的樣本儲(chǔ)存條件。比如凍存管、EP管，是否需要冰塊？是否需要液氮？取材當(dāng)天需要多少人？是否需要請(qǐng)人幫忙？如果所需要取出的樣本較多，建議大家請(qǐng)人一起幫忙，流水線作業(yè)，這樣能節(jié)省時(shí)間，并且能保證樣品的質(zhì)量。如果請(qǐng)人，每個(gè)人需要負(fù)責(zé)哪一板塊的工作，比如誰負(fù)責(zé)，誰負(fù)責(zé)取血液，誰負(fù)責(zé)取，誰負(fù)責(zé)拍照、誰負(fù)責(zé)儲(chǔ)存，都需要提前規(guī)劃交代清楚。實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)如果是需要自己做的檢測(cè)，比如常見的WesternBlot、PCR，建議提前可以看看教程（無論是視頻還是貼吧，都要自己多方參考）。有了一定的理論基礎(chǔ)后，再向老師、師兄師姐學(xué)習(xí)經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)。云南實(shí)驗(yàn)科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室