RNA各種可逆的化學(xué)修飾被認(rèn)為是一種新的表觀遺傳調(diào)控方式。m6A是真核生物mRNA常見的化學(xué)修飾，在調(diào)控mRNA穩(wěn)定性，剪切和翻譯方面具有重要的作用。作者使用轉(zhuǎn)錄組測序發(fā)現(xiàn)了METTL3（甲基轉(zhuǎn)移酶3），一種主要的RNAN6-腺苷-甲基轉(zhuǎn)移酶，在人肝細(xì)胞（HCC）和多種實體中高表達(dá)。在臨床上，METTL3的過度表達(dá)與肝細(xì)胞患者不良預(yù)有關(guān)。體外實驗證明敲除METTL3會抑制HCC細(xì)胞增殖，遷移及克隆形成。體內(nèi)實驗證明敲除METTL3會明顯抑制HCC體內(nèi)成瘤和肺轉(zhuǎn)移。另外，使用CRISPR/dCas9-VP64系統(tǒng)，內(nèi)源性高表達(dá)METTL3會促進HCC細(xì)胞在體外和體內(nèi)生長。通過轉(zhuǎn)錄組測序、m6A-Seq、MeRIP-PCR，作者確定了SOCS2（細(xì)胞因子信號2的抑制因子）作為METTL3介導(dǎo)的m6A修飾的下游靶基因。敲除METTL3表達(dá)會消除SOCS2mRNAm6A修飾并增強SOCS2mRNA表達(dá)。m6A介導(dǎo)的SOCS2mRNA降解是依賴于m6A“讀取器”蛋白YTHDF2?？傊?，METTL3在HCC大部分高表達(dá)中,并通過m6A-YTHDF2依賴機制抑制SOCS2表達(dá)從而促進HCC進展。因此，作者發(fā)現(xiàn)了在肝發(fā)生過程中表觀遺傳改變的一種新機制。圖4RNA甲基化轉(zhuǎn)移酶METLLT3在肝組織中高表達(dá)。細(xì)胞核是細(xì)胞的控制中心，它包含了遺傳物質(zhì)DNA，控制著細(xì)胞的生長和分裂。云南外包科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)

我們知道WB實驗步驟繁瑣，一次實驗歷時也不短，從提蛋白到顯影結(jié)束可能要三天，我們就講一下這里面的一些關(guān)鍵環(huán)節(jié)。一、蛋白提取及變性1、提取蛋白很多經(jīng)驗豐富的WB實驗者都深有體會，蛋白提取是影響結(jié)重要的環(huán)節(jié)之一。該過程重要的是防降解和保證蛋白濃度不要太低。防降解主要有兩點，一是裂解前注意保持樣品處于低溫環(huán)境中，二是裂解時加入足夠的蛋白酶抑制劑。我們習(xí)慣先用冰冷的PBS做心臟的體循環(huán)灌注，然后冰上取腦，分離各腦區(qū)(嗅球，皮層，海馬，中腦，小腦，延髓，丘腦，紋狀體)后置于，用液氮速凍后轉(zhuǎn)移至-80度冰箱長期保存。接著是保證蛋白濃度，即要加入適量的裂解液，加太少會使蛋白提取不充分，加太多會讓蛋白濃度太低，一般經(jīng)驗是這樣的，細(xì)胞樣品例如一個六孔板的細(xì)胞加60微升的裂解液，動物組織的話每毫克組織加10微升裂解液。還要加上超聲破碎處理，具體方案見討論部分。如果沒有超聲破碎儀，那就用1毫升注射器不斷抽吸，冰上反復(fù)抽吸1分鐘左右，注意不要產(chǎn)生過多氣泡。(需要灌注取材的視頻可以私聊獲取，由于文件過大，又比較血腥，不宜直接放到文章里。)2、蛋白變性加入上樣緩沖液后100攝氏度煮10分鐘，這里的上樣緩沖液有兩種可選。寧夏大鼠科研技術(shù)服務(wù)實驗細(xì)胞轉(zhuǎn)染又分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時轉(zhuǎn)染是指外源基因進入受體細(xì)胞后.

這種細(xì)胞保持著其原始的生物學(xué)特性，具有高度的活性和分裂能力。原代細(xì)胞在許多生物醫(yī)學(xué)研究中具有重要地位，包括藥物篩選、疾病模型的建立以及疫苗研發(fā)等。原代細(xì)胞的獲得通常是通過組織剪切、消化或酶解等方式從機體或組織中分離出來。這些細(xì)胞脫離了它們在生物體中的環(huán)境，但是仍然保持著其基本的生物學(xué)特性，包括細(xì)胞膜、細(xì)胞核、細(xì)胞器以及其他重要的生物分子。原代細(xì)胞在未經(jīng)過傳代培養(yǎng)的情況下，保持著其原始的生物學(xué)特性，因此，它們常常被用于藥物篩選、毒理學(xué)研究等。同時，由于原代細(xì)胞具有高度活性和分裂能力，它們也被用于組織工程和再生醫(yī)學(xué)中，如皮膚移植、骨頭修復(fù)和神經(jīng)再生等。此外，原代細(xì)胞模型在疾病研究中也扮演著重要角色。由于原代細(xì)胞具有更高的生物真實性，使用它們建立的疾病模型能夠更準(zhǔn)確地模擬疾病的發(fā)展過程和藥物的作用機制，從而為新藥研發(fā)和疾病治、療提供更有效的工具。總之，原代細(xì)胞是一種具有高度活性和分裂能力的細(xì)胞，在生物醫(yī)學(xué)研究中具有重要的作用。由于其原始的生物學(xué)特性。

把膜先用TBST泡洗兩遍再用5%脫脂奶粉或者BSA室溫封閉1-2小時。注意一定要讓蛋白面充分接觸封閉液。2、孵一抗脫脂奶粉封閉的話，要用TBST泡洗三遍再轉(zhuǎn)移至一抗溶液中，BSA封閉的可以直接轉(zhuǎn)移至一抗中。如果膜的寬(膜是一個長方形，這里的寬與長相對應(yīng))不大于8毫米，我習(xí)慣置于15毫升離心管中孵育，兩條膜"背對背"式放置于一個管子里(3毫升液體即可)。如果大于8毫米，就用普通的5格的一抗孵育盒(4毫升即可)。4度過夜，一般是12-18個小時，注意放置水平，用搖床。內(nèi)參等蛋白豐度很高的如果孵久了可能出現(xiàn)條帶連在一起的情況，這時可以縮短孵育時間或者降低一抗的濃度。六、孵二抗顯影1、孵二抗室溫一個小時足矣。這步要注意的是建議用5%BSA或者脫脂奶粉稀釋二抗，這樣背景會干凈許多。也要注意膜的蛋白面要充分接觸二抗溶液，我們一般一條膜一個槽地孵。2、顯影這一步有個細(xì)節(jié)可能有些同學(xué)沒注意到，就是ECL發(fā)光液要與HRP反應(yīng)一分鐘后顯影效果才會更好，還有要注意的是顯影液要均勻覆蓋，一般第二次顯影(加新的顯影液)比一次好看。動物實驗這些取樣細(xì)節(jié)，你有注意嗎？

膿毒癥動物模型必須具備以下基本要素：有膿毒癥典型的高排低阻血流動力學(xué)表現(xiàn)和高代謝狀態(tài)；伴發(fā)多個功能障礙；有較高的自然死亡率，根據(jù)膿毒癥的轉(zhuǎn)歸，要求動物模型的自然死亡率達(dá)到50%～70%；膿毒癥是嚴(yán)重引起機體的炎癥反應(yīng)過度造成的自身損傷，不是細(xì)菌和內(nèi)對機體的直接損傷，故出現(xiàn)功能障礙及動物死亡距膿毒癥模型制備應(yīng)有一定的時間間距。一般在制模后6～12h后發(fā)生的功能障礙或死亡屬全身炎癥反應(yīng)所致。實驗動物的選擇在制作動物模型時多選用雄性小鼠，因為雌性小鼠較雄性小鼠更能耐受膿毒癥和失血性休克，且進入發(fā)期的雌性小鼠性水平變化很大，而雄性小鼠在膿毒癥時更易于發(fā)生免疫抑制。為什么選擇CLP模型？盲腸結(jié)扎穿孔模型（CLP）模型是接近于人類膿毒癥機制的模型，被稱為膿毒癥模型的“金標(biāo)準(zhǔn)”。CLP技術(shù)在20世紀(jì)70年代被建立。CLP模型非常適宜用于防治膿毒癥或膿毒性休克新藥的臨床前觀察造模方法CLP膿毒癥模型的建立主要分為兩個階段：盲腸遠(yuǎn)端結(jié)扎和盲腸穿刺。首先是手術(shù)引發(fā)的結(jié)扎部位組織變性壞死引起局部炎癥反應(yīng)，其次是穿孔后使糞便內(nèi)容物漏入腹膜引起多菌性細(xì)菌性腹膜炎，進而誘發(fā)全身性炎癥反應(yīng)。健康的HEK 293T細(xì)胞，一般使用復(fù)蘇后10代以內(nèi)的細(xì)胞進行慢病毒的生產(chǎn)，要求無菌以及支原體污染；上海小鼠科研技術(shù)服務(wù)實驗

動物疾病模型作為研究工具，在探索疾病發(fā)展和檢查的過程中發(fā)揮了巨大的作用。云南外包科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)

中華文化促進會文化創(chuàng)新與傳播委員會會長朱建聲、西安海棠學(xué)院院長馮居秦、西安交通大學(xué)人文學(xué)院EDP中心主任、中華風(fēng)采人物媒體社長王天保、西安市EMBA助企商會會長張西安、陜西省糖尿病協(xié)會副會長張麗、陜西省養(yǎng)生協(xié)會會長李靖、陜西省職業(yè)經(jīng)理人協(xié)會名譽會長劉志超、西藏鷹山科技集團董事長張沛、西安天歌干細(xì)胞健康管理中心總經(jīng)理楊海軍和團隊及各行各業(yè)企業(yè)界朋友、受益者近200人參與了活動。西安天歌干細(xì)胞健康管理有限公司總經(jīng)理楊海軍介紹了成立一年來的工作情況和未來的發(fā)展布局。隨后，天歌干細(xì)胞健康管理中心負(fù)責(zé)人分別同中華文化促進會文化創(chuàng)新與傳播委員會會長朱建聲；西安市（EMBA助企商會）/西安市EMBA商會會長張西安；鄭州天歌干細(xì)胞健康管理有限公司總經(jīng)理張永紅和上海豪景醫(yī)療器械有限公司總經(jīng)理張建國進行了簽約儀式。主持人同中華風(fēng)采人物媒體社長、新時代風(fēng)采人物研究會會長、文化名人收藏大家王天保，中華風(fēng)采人物媒體主編李西紅，西藏鷹山科技集團董事長張沛分別從幾個話題闡述和討論了大健康產(chǎn)業(yè)的未來前景。為了答謝各界朋友的的支持與厚愛，活動舉行了現(xiàn)場抽獎環(huán)節(jié)，將活動掀起了高潮。通過活動一方面讓大家和身邊的朋友更關(guān)注健康。云南外包科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)