經(jīng)多級(jí)乙醇至水洗：二甲苯(i)5min→二甲苯(ⅱ)5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸餾水洗2min；4)蘇木素染色5分鐘，自來(lái)水沖洗；5)鹽酸乙醇分化30秒；6)自來(lái)水浸泡15分鐘；7)置伊紅液2分鐘。8)常規(guī)脫水，透明，封片：95％乙醇(i)1min→95％乙醇(ⅱ)1min→100％乙醇(i)1min→100％乙醇(ⅱ)1min→二甲苯石碳酸(3：1)1min→二甲苯(i)1min→二甲苯(ⅱ)1min→中性樹(shù)脂封固。9)顯微鏡下拍照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在4個(gè)月時(shí)，與ctrl(對(duì)照)小鼠比較，sixko小鼠的視網(wǎng)膜外核層已經(jīng)開(kāi)始變薄，表明感光細(xì)胞死亡(圖7)。實(shí)施例5視網(wǎng)膜冰凍切片免疫染色：取4月齡的由實(shí)施例2得到的gm20541基因敲除純合子小鼠斷頸處死后，快速取眼球，并放入4％的pfa中，冰上固定15min后，在角膜上剪口，然后繼續(xù)冰上固定。2h后，pbs緩沖液沖洗3遍，然后將眼球置于30％蔗糖溶液中脫水2h，然后解剖鏡下剪去角膜及晶體，oct包埋并迅速置于-80℃冰箱冷凍。大約10min后，取出oct包埋的眼球，置于冰凍切片機(jī)-25℃平衡約30min后即可切片。切片厚度為12μm。切片完成后，選取質(zhì)量較高的片子于37℃烘箱放置30min，然后免疫組化筆在有視網(wǎng)膜組織的地方畫(huà)圈，pbs洗三遍以去除oct。因此，外科結(jié)扎膽總管并使膽總管完全阻塞已成為引起嚙齒動(dòng)物梗阻性膽汁淤積性損傷的常用模型。寧夏腦定位動(dòng)物模型技術(shù)

    輕微的接觸角膜的中心頂端。一通道正極接右眼，二通道正極接左眼。通過(guò)針管對(duì)雙眼滴生理鹽水，改善金環(huán)電極及角膜的接觸效果。保證兩個(gè)金環(huán)電極以相同的角度、方式接觸兩眼角膜中心正端的相同位置。5記錄示波信號(hào)確認(rèn)無(wú)誤后，關(guān)閉暗紅光?？梢韵葒L試記錄一下暗適應(yīng)光強(qiáng)為·s/m2的erg檢測(cè)，確認(rèn)一下信號(hào)的質(zhì)量：如果雙眼的振幅出現(xiàn)了與預(yù)期不同的較大差異，建議再次檢查金環(huán)電極的安裝位置。然后依次記錄暗適應(yīng)光強(qiáng)為·s/m2的信號(hào)。需要注意的是，完成暗適應(yīng)·s/m2光強(qiáng)檢測(cè)后，系統(tǒng)將自動(dòng)打開(kāi)背景光。同樣的，需要打開(kāi)定時(shí)器，光適應(yīng)10-15分鐘，再記錄。6經(jīng)過(guò)光適應(yīng)后，依次記錄光適應(yīng)·s/m2以及·s/m2光強(qiáng)下波形，記錄·s/m2光強(qiáng)下閃爍視網(wǎng)膜誘發(fā)電位。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在4個(gè)月時(shí)，與ctrl(對(duì)照)小鼠比較，cko(gm20541基因敲除純合子小鼠)小鼠的a波和b波在暗適應(yīng)和光適應(yīng)條件下均明顯降低，表明gm20541敲除后導(dǎo)致視力受損(見(jiàn)圖5和圖6)。實(shí)施例4視網(wǎng)膜石蠟切片h&e染色：對(duì)4月齡小鼠的視網(wǎng)膜進(jìn)行石蠟切片、蘇木精-伊紅染色法(h&e染色方法)染色，具體操作如下：1)快速取小鼠眼球組織，并置于固定液中固定24h；2)石蠟包埋，切片，厚度為4μm；3)切片常規(guī)用二甲苯脫蠟。江蘇哪里有動(dòng)物模型造模（arteriosclerosis，AS）是一種緩慢進(jìn)行性疾病，嚴(yán)重影響人類健康。

    但是人為調(diào)節(jié)更能直接的根據(jù)所需模擬出實(shí)驗(yàn)環(huán)境，相對(duì)于自動(dòng)控制的環(huán)境模擬能有效減少意外情況的發(fā)生。2、本系統(tǒng)設(shè)置的多個(gè)代謝籠可以同時(shí)培養(yǎng)多種動(dòng)物，造模動(dòng)物多。3、本實(shí)用新型的系統(tǒng)能夠很好地模擬高原壓力、溫度、濕度以及低氧環(huán)境，還具有動(dòng)物行為學(xué)遠(yuǎn)程觀察功能，保障了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中實(shí)時(shí)監(jiān)控與實(shí)驗(yàn)結(jié)束后操作過(guò)程的溯源。附圖說(shuō)明為了更清楚地說(shuō)明本實(shí)用新型實(shí)施例的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，應(yīng)當(dāng)理解，以下附圖示出了本實(shí)用新型的某些實(shí)施例，因此不應(yīng)被看作是對(duì)范圍的限定，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關(guān)的附圖。圖1為本實(shí)用新型一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)的主視圖；圖2為本實(shí)用新型一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)的立體結(jié)構(gòu)示意圖；圖3為代謝籠的立體結(jié)構(gòu)示意圖；圖中標(biāo)記：1-功能設(shè)備集成底座，2-飼養(yǎng)倉(cāng)，3-代謝籠，4-觀察窗，5-操作窗，6-小物件傳遞窗，7-大物件傳遞窗，8-投料斗，9-飲水瓶，10-聚糞斗，11-尿液排出口，12-糞便排出口，13-進(jìn)風(fēng)系統(tǒng)，14-排風(fēng)系統(tǒng)，15-高原光照環(huán)境模擬裝置，16-高原溫度環(huán)境模擬裝置。

    靜置25分鐘后把酒精倒干，用吸水紙吸出多余的酒精，然后配壓縮膠，同樣的操作，關(guān)鍵是梳子要插得快，要小心梳子下產(chǎn)生氣泡，然后靜置30分鐘。如果是當(dāng)天跑膠，我會(huì)等上層膠凝2個(gè)小時(shí)再用，但要注意防干燥縮水，可以在一個(gè)小時(shí)的時(shí)候沿著梳子上緣加點(diǎn)電泳液。所以我一般提前一晚制膠，泡于純水或者電泳液里置于4度冰箱暫存。三、蛋白電泳1、上樣前準(zhǔn)備把膠組裝到電泳芯上，注意密閉性(否則漏液)，如果內(nèi)槽漏液就不是勻強(qiáng)電場(chǎng)了，條帶可能就不是一條直線。然后內(nèi)槽倒?jié)M電泳液，拔梳子，這一步要小心，梳子要兩邊一起緩緩?fù)习纬觯缓笥^察泳道內(nèi)有無(wú)脫落的膠?；蛘吣z絲，有的話用1毫升注射器吸出。然后從冰箱取出蛋白樣品，解凍。準(zhǔn)備振蕩器。2、上樣和電泳注意，上樣后蛋白會(huì)開(kāi)始慢慢在膠中彌散，所以上樣越快越好。我習(xí)慣先上蛋白Marker,再上蛋白樣品，蛋白上樣前確保樣品完全解凍和充分振蕩(推薦使用振蕩器振蕩)，吸的時(shí)候沒(méi)有拉絲即可，建議上樣分鐘把樣品從冰上取出來(lái)，不然樣品中SDS可能會(huì)結(jié)晶析出，從而影響電泳效果。上層膠80V25分鐘，下層膠120V65分鐘。四、轉(zhuǎn)膜1、轉(zhuǎn)膜前準(zhǔn)備我會(huì)在電泳結(jié)束0分鐘準(zhǔn)備，把轉(zhuǎn)膜液配好置于4度冰箱預(yù)冷，然后裁膜，準(zhǔn)備轉(zhuǎn)膜裝置。SD大鼠腦缺血模型建立。

    可用鋨酸或甲醛蒸汽固定。主要用于血液或細(xì)胞涂片以及某些薄膜組織的固定。（2）固定的目的①保持其原有狀態(tài)：使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等成分轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，迅速防止組織、細(xì)胞的死后變化，防止自溶與，防止細(xì)胞過(guò)度收縮或膨脹而失去其原有形態(tài)結(jié)構(gòu)，使之盡量保持生前的狀態(tài)和結(jié)構(gòu)。②以便染色后易于鑒別和觀察：不同組織成分對(duì)染料有不同的親和力，以便染色后易于鑒別和觀察。③使組織塊硬化，便于制作薄片（組織塊在脫水、包埋、切片、染色等過(guò)程中不易損壞）。（3）固定液固定液種類：一類是單純固定液，即只有一種試劑；另一類是混合固定液，由兩種或兩種以上試劑組成。作為較好的固定液，應(yīng)有下列特性，首先，有強(qiáng)滲透力，能迅速的滲入組織內(nèi)部；其次，不使組織過(guò)度收縮或膨脹，并能使組織內(nèi)欲觀察的成分得以凝固為不溶性物質(zhì)；，能使組織達(dá)到一定的硬度并獲得較佳的折光率和對(duì)某些染料具有較強(qiáng)的親和力。固定液通常使用10%的甲醛溶液。特殊要求的組織，常需要特殊的固定液，取樣之前應(yīng)做好準(zhǔn)備。如眼球樣本應(yīng)使用FAS眼球固定液，脂肪組織應(yīng)使用脂肪組織固定液等。此外，在進(jìn)行骨組織樣本制備的時(shí)候，還應(yīng)注意提前進(jìn)行脫鈣處理。可以嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)材料的可比性。云南實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型手術(shù)

卵巢切除致骨質(zhì)疏松大鼠模型。寧夏腦定位動(dòng)物模型技術(shù)

    根據(jù)gm20541的cdna序列設(shè)計(jì)引物：gm20541-cdna-f：5’-tcggtctcatcttcattccc-3'；gm20541-cdna-r：5’-ggaaggctctgttccggtat-3'；(g)以提取的cdna為模板，進(jìn)行rt-pcr。擴(kuò)增后進(jìn)行電泳。結(jié)果見(jiàn)圖4中b，可以看出，通過(guò)rt-pcr方法檢測(cè)gm20541在gm20541基因敲除純合子小鼠的視網(wǎng)膜中表達(dá)量降低。圖4的b中ctrl是指野生型對(duì)照，sixko是指gm20541基因敲除純合子小鼠；gm20541rnalevel是指rna表達(dá)水平相對(duì)變化，以野生型表達(dá)水平為1。實(shí)施例3對(duì)4月齡的gm20541基因敲除純合子小鼠進(jìn)行erg視力檢測(cè)：1暗適應(yīng)動(dòng)物應(yīng)整夜暗適應(yīng)，環(huán)境應(yīng)做到?jīng)]有光線；2次日麻醉：稱重，腹腔內(nèi)注射；宜深度麻醉；3動(dòng)物固定及散瞳：麻醉完成后，在暗紅光照明下將小鼠用膠帶固定在動(dòng)物試驗(yàn)平臺(tái)的前方：需保證小鼠正"趴"，即相對(duì)于閃光刺激器的刺激口，雙眼高度一致，充分暴露，滴加散瞳劑。4電極安裝：將視網(wǎng)膜電圖儀(espionvisualelectrophysiologysystem,diagnosysllc,littleton,ma,usa)預(yù)熱后，在耳夾電極涂上導(dǎo)電膏，夾尾巴，插入放大器“地”接口；雙頭的針電極插入后頸皮(大約在兩耳中間)，同時(shí)接兩個(gè)通道的“負(fù)”接口；金環(huán)電極夾在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)的電極支架上，仔細(xì)調(diào)整其角度。寧夏腦定位動(dòng)物模型技術(shù)