根據(jù)gm20541的cdna序列設(shè)計(jì)引物:gm20541-cdna-f:5’-tcggtctcatcttcattccc-3';gm20541-cdna-r:5’-ggaaggctctgttccggtat-3';(g)以提取的cdna為模板,進(jìn)行rt-pcr。擴(kuò)增后進(jìn)行電泳。結(jié)果見(jiàn)圖4中b,可以看出,通過(guò)rt-pcr方法檢測(cè)gm20541在gm20541基因敲除純合子小鼠的視網(wǎng)膜中表達(dá)量降低。圖4的b中ctrl是指野生型對(duì)照,sixko是指gm20541基因敲除純合子小鼠;gm20541rnalevel是指rna表達(dá)水平相對(duì)變化,以野生型表達(dá)水平為1。實(shí)施例3對(duì)4月齡的gm20541基因敲除純合子小鼠進(jìn)行erg視力檢測(cè):1暗適應(yīng)動(dòng)物應(yīng)整夜暗適應(yīng),環(huán)境應(yīng)做到?jīng)]有光線(xiàn);2次日麻醉:稱(chēng)重,腹腔內(nèi)注射;宜深度麻醉;3動(dòng)物固定及散瞳:麻醉完成后,在暗紅光照明下將小鼠用膠帶固定在動(dòng)物試驗(yàn)平臺(tái)的前方:需保證小鼠正"趴",即相對(duì)于閃光刺激器的刺激口,雙眼高度一致,充分暴露,滴加散瞳劑。4電極安裝:將視網(wǎng)膜電圖儀(espionvisualelectrophysiologysystem,diagnosysllc,littleton,ma,usa)預(yù)熱后,在耳夾電極涂上導(dǎo)電膏,夾尾巴,插入放大器“地”接口;雙頭的針電極插入后頸皮(大約在兩耳中間),同時(shí)接兩個(gè)通道的“負(fù)”接口;金環(huán)電極夾在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)的電極支架上,仔細(xì)調(diào)整其角度。C57BL/6成年鼠肺部通過(guò)呼吸機(jī)過(guò)量通氣損傷模型的建立;大鼠動(dòng)物模型飼養(yǎng)
應(yīng)根據(jù)所檢測(cè)指標(biāo)的要求,需采取不同策略處理。在如今分子生物學(xué)當(dāng)?shù)赖默F(xiàn)實(shí)背景下,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)除了對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體征及生理指標(biāo)進(jìn)行的監(jiān)控外,各種分子檢測(cè)甚至是組學(xué)檢測(cè)也開(kāi)始大行其道,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后的機(jī)制研究成為了實(shí)驗(yàn)的重頭戲。一般來(lái)說(shuō),動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)象主要包括:(1)體液中各類(lèi)因子定性及定量檢測(cè)由于此類(lèi)檢測(cè)對(duì)象多為蛋白及各類(lèi)小分子物質(zhì),因此在取樣過(guò)程中應(yīng)注意防止此類(lèi)物質(zhì)降解,在獲取后,應(yīng)及時(shí)置于溫(≤-80℃)進(jìn)行保存,在后續(xù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,也應(yīng)當(dāng)注意保存條件的穩(wěn)定性,避免反復(fù)凍融。常用的方法便是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA),除此之外,可利用生化分析儀及不同檢測(cè)方法的試劑盒(比色法、比濁法等)方法對(duì)各類(lèi)生化指標(biāo)及因子進(jìn)行定性及定量檢測(cè)。(2)組織病理、生理變化及免疫組化檢測(cè)常用的病理檢測(cè)多使用H&E染色對(duì)細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核進(jìn)行染色標(biāo)記,以觀察細(xì)胞變化。除此之外,許多特殊染色也在病理生理變化中得到了應(yīng)用,如利用Masson染色檢測(cè)組織纖維化病變,Nissl染色檢測(cè)神經(jīng)元損傷,β-半乳糖甘酶染色檢測(cè)細(xì)胞衰老等。此外,還可以通過(guò)免疫組化技術(shù)對(duì)某些特異性標(biāo)記物進(jìn)行免疫顯色檢測(cè),達(dá)到原位定性或定量檢測(cè)的目的。。北京乳鼠動(dòng)物模型服務(wù)博來(lái)霉素誘導(dǎo)急性肺損傷小鼠模型。
堿燒傷致角膜損傷大鼠模型一、服務(wù)信息1、動(dòng)物模型名稱(chēng):堿燒傷致角膜損傷大鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬:SD大鼠3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別:雌雄不限4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡:成年5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重:160-200g6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境:SPF級(jí)二、服務(wù)項(xiàng)目服務(wù)編號(hào)服務(wù)內(nèi)容服務(wù)周期價(jià)錢(qián)DH2020堿燒傷致角膜損傷大鼠模型1周詢(xún)價(jià)1、實(shí)驗(yàn)方法:氫氧化鈉致大鼠角膜化學(xué)性損傷。大鼠用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉,用干棉棒拭去結(jié)膜囊多余液體,將統(tǒng)一規(guī)格直徑3mm的圓形濾紙片浸入1mol/LNaOH溶液中20s,飽和后取出置于干燥濾紙上1秒以吸去過(guò)多的堿液,將濾紙片貼敷于大鼠右眼角膜90s后移去,立即用滅菌水沖洗結(jié)膜囊及角膜2min。2、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn):肉眼或裂隙燈下觀察到角膜有損傷。三、交付標(biāo)準(zhǔn):1.提供動(dòng)物模型構(gòu)建過(guò)程中的原始實(shí)驗(yàn)記錄及數(shù)據(jù)圖片。2.根據(jù)要求提供構(gòu)建成功的模型動(dòng)物或相關(guān)組織材料。四、服務(wù)項(xiàng)目說(shuō)明:1、如有特殊要求,請(qǐng)另詢(xún)價(jià)。2、雙方簽訂合同后,收取70%首付后啟動(dòng)實(shí)驗(yàn)。
相較于施用所述候選藥物前,所述視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的視力提高;(2)施用所述候選藥物后,相較于施用所述候選藥物前,所述視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的視網(wǎng)膜外核層變厚;(3)施用所述候選藥物后,相較于施用所述候選藥物前,所述視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的視網(wǎng)膜外節(jié)增長(zhǎng)。第四方面,本發(fā)明實(shí)施例提供了一種視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的繁育方法,其包括:將由如上所述的方法得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型進(jìn)行自交。在由方面所述的構(gòu)建方法得到了視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的基礎(chǔ)上,為了獲得更多的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型,本領(lǐng)域技術(shù)人員容易想到直接將上述的構(gòu)建方法得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型進(jìn)行自交以繁育或培育出更多數(shù)量的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型,這也是屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。附圖說(shuō)明為了更楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案,下面將對(duì)實(shí)施例中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹,應(yīng)當(dāng)理解,以下附圖示出了本發(fā)明的某些實(shí)施例,因此不應(yīng)被看作是對(duì)范圍的限定,對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講,在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下,還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關(guān)的附圖。圖1:檢測(cè)gm20541基因在不同組織中的表達(dá);圖中:a:rt-pcr檢測(cè)gm20541基因在不同組織的表達(dá)結(jié)果。由于卵巢早衰的病因多種多樣,如自身免疫功能異常、遺傳因素、代謝因素、化療、放療及等。
轉(zhuǎn)基因小鼠對(duì)黑色素瘤發(fā)生的分子途徑的理解有重要意義。此外,轉(zhuǎn)基因小鼠是可靠且可重現(xiàn)的模型,用來(lái)評(píng)估受損基因?qū)谏亓錾飳W(xué)的影響。應(yīng)用:基因工程小鼠模型可用于研究特定基因組改變?cè)诤谏亓龅陌l(fā)生和發(fā)展的重要性及藥物的靶向。1Lum-/-基因敲除小鼠Lumican是一種富含亮氨酸的小蛋白聚糖(smallleucine-richproteoglycan,SLRP),為膠原原纖維形成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑。黑色素瘤中Lumican表達(dá)降低與浸潤(rùn)相關(guān)。方法:有研究者利用BamHI建立的克隆衍生物導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞,建立Lum-/-轉(zhuǎn)基因小鼠。該模型可提供與發(fā)生和轉(zhuǎn)移相關(guān)機(jī)制及可見(jiàn)變的進(jìn)展,以及確定負(fù)責(zé)的黑色素瘤進(jìn)展的基因。2Tyr::N-RasQ61K轉(zhuǎn)基因小鼠方法:有研究者使用突變的人N-RasQ61K和SV40剪接以及聚腺苷酸化序列生成Tyr::N-RasQ61K構(gòu)建體,并注射到卵母細(xì)胞中,建立Tyr::N-RasQ61K轉(zhuǎn)基因小鼠。3BrafV600E轉(zhuǎn)基因小鼠模型有研究者使用LoxP-stop-LoxP(LSL)/Cre重組酶技術(shù)從內(nèi)源性Braf基因中誘導(dǎo)BrafV600E表達(dá),建立BrafV600E轉(zhuǎn)基因黑色素瘤小鼠模型??偨Y(jié)目前已有三種不同的黑色素瘤小鼠模型,但由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人類(lèi)基因組、基因調(diào)控、細(xì)胞類(lèi)型、結(jié)構(gòu)與組成等方面是有一定差別。通過(guò)高脂飲食誘導(dǎo)構(gòu)建非酒精性脂肪肝模型。湖南高脂高糖動(dòng)物模型造模
心力衰竭(heart failure)簡(jiǎn)稱(chēng)心衰,是指由于心臟的收縮功能和(或)舒張功能發(fā)生障礙。大鼠動(dòng)物模型飼養(yǎng)
指明方向。盡管現(xiàn)在基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組等組學(xué)已經(jīng)取得了非凡的突破,但人類(lèi)對(duì)于組學(xué)的整體性和復(fù)雜性認(rèn)識(shí)還是很初級(jí),也就比開(kāi)始高明那么一點(diǎn)點(diǎn),對(duì)橫亙?cè)诮M學(xué)和個(gè)體之間的裂隙毫無(wú)辦法——這也是目前生物研究被黑的重要原因之一:由于目前還不存在什么生物根本性原理,很多研究還是得靠盲人摸象式的實(shí)驗(yàn)、觀察和歸納。當(dāng)年山中伸彌找到誘導(dǎo)分化細(xì)胞核重編程(也就是IPSc技術(shù))的四個(gè)基因,可不是用理論算出來(lái)的,是大海撈針般地從成百上千個(gè)轉(zhuǎn)錄因子基因組合中篩選出來(lái)的。盡管以前的研究能有所幫助,但本質(zhì)還是差別不大,這也是為什么分子生物學(xué)科研常常被類(lèi)比成民工搬磚。明白了這個(gè)背景,你大概就能理解小鼠的意義。既然我們對(duì)復(fù)雜系統(tǒng)的架構(gòu)原理毫無(wú)辦法,那我們不妨就建立一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)模型,自上而下地研究問(wèn)題。誠(chéng)然,動(dòng)物模型和人類(lèi)差別巨大,小鼠、大鼠、兔、猴身上做的好好的實(shí)驗(yàn),放在人身上就不靈了(有時(shí)候,即使是針對(duì)某一個(gè)人群成功的實(shí)驗(yàn),換一個(gè)人群就不靈了,人類(lèi)內(nèi)部的多樣性都不容小覷)。但是,同在哺乳動(dòng)物大家庭,大家的系統(tǒng)架構(gòu)應(yīng)該是差不多的,差別只在細(xì)節(jié),問(wèn)題已經(jīng)從大海撈針變成了池塘撈針。為什么藥物會(huì)失效呢?如果是靶點(diǎn)有差異。大鼠動(dòng)物模型飼養(yǎng)