SD大鼠腦缺血致腦梗死模型【材料】水合氯醛、線栓直徑（體重250-300g）【方法】1、10％水合氯醛（35mg/kg）腹腔注射麻醉。2、仰臥位固定，頸正中線切口，分離肌肉和筋膜，分離左側(cè)頸總動脈（CCA）、頸外動脈（ECA）和頸內(nèi)動脈（ICA）。3、微動脈夾暫時夾閉頸內(nèi)動脈（ICA），活扣結(jié)扎近心端頸總動脈（CCA）、頸外動脈（ECA）打雙結(jié)，在雙結(jié)中間剪開小口插入線栓。4、將拴線插入到頸內(nèi)動脈（ICA），用眼科鑷輕推拴線，以頸外動脈（ECA）和頸內(nèi)動脈（ICA）分叉處為參考位置。5、栓線插入預(yù)刻深度，感到有阻力，說明栓線已到達腦中動脈（MCA）,打結(jié)固定栓線。6、血管外的栓線不要留得過長，1h后拔出栓線，縫合傷口，單籠飼養(yǎng)觀察。注：前兩三天老鼠會萎靡，不進食，注意不要，老鼠無死亡即可。在肝臟中，肝外膽道系統(tǒng)的阻塞會引發(fā)膽汁淤積和炎癥，導(dǎo)致門靜脈周圍區(qū)域的強烈纖維化反應(yīng)。上海模式動物模型實驗室

    3）基因/蛋白質(zhì)表達定性或定量檢測在進行分子檢測的過程中，保持核酸和蛋白質(zhì)的完整性至關(guān)重要，因此在取樣過程中，應(yīng)盡量避免核酸及蛋白質(zhì)的降解。如不注意采樣過程，將會導(dǎo)致樣本中的核酸及蛋白質(zhì)的無差別降解，嚴重影響后續(xù)分子檢測結(jié)果。在條件允許的情況下，組織樣本在離體后應(yīng)立刻裝入凍存管內(nèi)，并立即放入液氮中進行冷凍。在RNA提取樣本的保存過程中，可以選擇非冷凍型RNA保存液或Trizol試劑進行RNA酶的抑制。針對蛋白質(zhì)提取樣本的保存，我們同樣可以使用商品化的蛋白酶抑制劑進行短期處理。聚合酶鏈式反應(yīng)（PolymeraseChainReaction，PCR）及免疫印跡（Westernblotting，WB），這兩種實驗手段是分子生物學檢測中不可或缺的一部分，也是發(fā)表論文至關(guān)重要的分子檢測數(shù)據(jù)。PCR主要用來對基因在基因組層面或轉(zhuǎn)錄層面的變化進行定性或定量檢測，而WB則主要用來對某一蛋白質(zhì)的表達進行定量檢測。（4）轉(zhuǎn)錄組學、蛋白質(zhì)組學及代謝組學檢測隨著檢測水平及相關(guān)產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，各類組學檢測的價格降低，實驗設(shè)計中也常常運用組學檢測來提升實驗設(shè)計的檔次。在我們進行轉(zhuǎn)錄組學及蛋白質(zhì)組學的檢測過程中，同樣是要首先確保目標RNA或蛋白質(zhì)的片段完整性。上海C57動物模型飼養(yǎng)合理建立周圍性面癱動物模型對進一步深入研究具有重要意義。

    其也是可以作為視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的。以上所述為本發(fā)明的實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。sequencelisting四川省人民醫(yī)院利用gm20541基因構(gòu)建視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的方法和應(yīng)用111406dna人工序列1gaatgcagtgacctatgatgatgtgtgtgtgaacttcactctggaagaatggactttact60ggatccttcacagaagagtctctacagagatgtgatgcaggaaacctacaggaatctcac120tgctataggctacaattgggaagatgacaatattgaagactattttcaaagttctagaag180acatggaaggcatgaaagaaatcatagtggagagaaaccttatgcttgtaaccaatgtga240taaagccttttcatgtcatcatagtctccaaatacataaaagaagacatactggagagaa300actctatgaatgtaaccgttgtaataaaggctttccatatcccagtgctctacaaataca360taaaaggatacacagtggagagaaaccctatgaatgtaaacaatgtggtaaagcctttgc420atgtcacagttctcttcaaaggcatgaaagaatacatactggtgagaaaccttatgaatg480tagccaatgtggtaaagcctttacacatcaaaagagtctccaaatacataaaagaactca540cagtggagaaaaaccatatgggtgtagtcagtgtggaaaagactttgtaagtcagagtcg600tcttctagaacataaaaggacacatactgga。

    經(jīng)多級乙醇至水洗：二甲苯(i)5min→二甲苯(ⅱ)5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸餾水洗2min；4)蘇木素染色5分鐘，自來水沖洗；5)鹽酸乙醇分化30秒；6)自來水浸泡15分鐘；7)置伊紅液2分鐘。8)常規(guī)脫水，透明，封片：95％乙醇(i)1min→95％乙醇(ⅱ)1min→100％乙醇(i)1min→100％乙醇(ⅱ)1min→二甲苯石碳酸(3：1)1min→二甲苯(i)1min→二甲苯(ⅱ)1min→中性樹脂封固。9)顯微鏡下拍照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在4個月時，與ctrl(對照)小鼠比較，sixko小鼠的視網(wǎng)膜外核層已經(jīng)開始變薄，表明感光細胞死亡(圖7)。實施例5視網(wǎng)膜冰凍切片免疫染色：取4月齡的由實施例2得到的gm20541基因敲除純合子小鼠斷頸處死后，快速取眼球，并放入4％的pfa中，冰上固定15min后，在角膜上剪口，然后繼續(xù)冰上固定。2h后，pbs緩沖液沖洗3遍，然后將眼球置于30％蔗糖溶液中脫水2h，然后解剖鏡下剪去角膜及晶體，oct包埋并迅速置于-80℃冰箱冷凍。大約10min后，取出oct包埋的眼球，置于冰凍切片機-25℃平衡約30min后即可切片。切片厚度為12μm。切片完成后，選取質(zhì)量較高的片子于37℃烘箱放置30min，然后免疫組化筆在有視網(wǎng)膜組織的地方畫圈，pbs洗三遍以去除oct。通過建立腦缺血-再灌注動物模型，模擬人類ICVD的病理過程。

    應(yīng)根據(jù)所檢測指標的要求，需采取不同策略處理。在如今分子生物學當?shù)赖默F(xiàn)實背景下，動物實驗除了對實驗動物的體征及生理指標進行的監(jiān)控外，各種分子檢測甚至是組學檢測也開始大行其道，動物實驗結(jié)束之后的機制研究成為了實驗的重頭戲。一般來說，動物實驗檢測對象主要包括：（1）體液中各類因子定性及定量檢測由于此類檢測對象多為蛋白及各類小分子物質(zhì)，因此在取樣過程中應(yīng)注意防止此類物質(zhì)降解，在獲取后，應(yīng)及時置于溫（≤-80℃）進行保存，在后續(xù)實驗過程中，也應(yīng)當注意保存條件的穩(wěn)定性，避免反復(fù)凍融。常用的方法便是酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA），除此之外，可利用生化分析儀及不同檢測方法的試劑盒（比色法、比濁法等）方法對各類生化指標及因子進行定性及定量檢測。（2）組織病理、生理變化及免疫組化檢測常用的病理檢測多使用H&E染色對細胞質(zhì)及細胞核進行染色標記，以觀察細胞變化。除此之外，許多特殊染色也在病理生理變化中得到了應(yīng)用，如利用Masson染色檢測組織纖維化病變，Nissl染色檢測神經(jīng)元損傷，β-半乳糖甘酶染色檢測細胞衰老等。此外，還可以通過免疫組化技術(shù)對某些特異性標記物進行免疫顯色檢測，達到原位定性或定量檢測的目的。。它主要影響身體內(nèi)的大中動脈，如冠狀動脈、頸動脈、腦動脈和腎動脈等，其發(fā)病機制的主要過程。北京實驗動物模型造模

通過阿霉素（Adriamycin，ADR）腹腔注射給藥（Adriamycin，ADR）試圖造成小鼠心衰。上海模式動物模型實驗室

    省心省時一些基因編輯鼠模型表型不易發(fā)現(xiàn)，需要結(jié)合外科手術(shù)造模、物理刺激或藥物誘導(dǎo)才能發(fā)現(xiàn)表型。專業(yè)的手術(shù)模型團隊結(jié)合成熟穩(wěn)定的基因修飾鼠平臺和飼養(yǎng)繁育平臺，賽業(yè)生物可為您提供一站式“基因編輯鼠模型制備——種群擴繁——手術(shù)造?！硇万炞C”服務(wù)，讓您省心省時。3.專業(yè)的技術(shù)支持賽業(yè)生物專業(yè)的小動物外科手術(shù)團隊熟練掌握多種模型的制備，具備建立復(fù)雜及復(fù)合手術(shù)疾病模型的能力，可能夠根據(jù)您的需求，制定合理的實驗計劃，同時提供及時的項目匯報與售后服務(wù)，讓您省事省心。，確保動物福利與質(zhì)量標準與國際接軌賽業(yè)模式動物中心通過ISO9001:2015和AAALAC雙認證，ISO9001:2015認證確保向廣大學者提供的所有產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)符合國際標準，AAALAC認證表明了賽業(yè)生物尊重動物福利和倫理，重視生物安全的負責態(tài)度。適用動物品種：大鼠、小鼠。手術(shù)疾病模型團隊首席科學家簡介張榮利博士張榮利博士有二十多年小鼠手術(shù)疾病模型制備經(jīng)驗，畢業(yè)后先后在中國中醫(yī)科學院、清華大學、北京大學及國際學術(shù)機構(gòu)任職，2011年起在美國CaseWesternReserveUniversity工作，任ResearchScientist并擔任心血管生理學實驗室主任，負責基因工程動物的疾病表型發(fā)現(xiàn)與新藥臨床前研究。上海模式動物模型實驗室