但是人為調(diào)節(jié)更能直接的根據(jù)所需模擬出實(shí)驗(yàn)環(huán)境,相對(duì)于自動(dòng)控制的環(huán)境模擬能有效減少意外情況的發(fā)生。2、本系統(tǒng)設(shè)置的多個(gè)代謝籠可以同時(shí)培養(yǎng)多種動(dòng)物,造模動(dòng)物多。3、本實(shí)用新型的系統(tǒng)能夠很好地模擬高原壓力、溫度、濕度以及低氧環(huán)境,還具有動(dòng)物行為學(xué)遠(yuǎn)程觀察功能,保障了實(shí)驗(yàn)過程中實(shí)時(shí)監(jiān)控與實(shí)驗(yàn)結(jié)束后操作過程的溯源。附圖說明為了更清楚地說明本實(shí)用新型實(shí)施例的技術(shù)方案,下面將對(duì)實(shí)施例中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹,應(yīng)當(dāng)理解,以下附圖示出了本實(shí)用新型的某些實(shí)施例,因此不應(yīng)被看作是對(duì)范圍的限定,對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講,在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下,還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關(guān)的附圖。圖1為本實(shí)用新型一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)的主視圖;圖2為本實(shí)用新型一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)的立體結(jié)構(gòu)示意圖;圖3為代謝籠的立體結(jié)構(gòu)示意圖;圖中標(biāo)記:1-功能設(shè)備集成底座,2-飼養(yǎng)倉,3-代謝籠,4-觀察窗,5-操作窗,6-小物件傳遞窗,7-大物件傳遞窗,8-投料斗,9-飲水瓶,10-聚糞斗,11-尿液排出口,12-糞便排出口,13-進(jìn)風(fēng)系統(tǒng),14-排風(fēng)系統(tǒng),15-高原光照環(huán)境模擬裝置,16-高原溫度環(huán)境模擬裝置。用血管內(nèi)線栓阻斷法制備大鼠 MCAO模型。已被腦血管病研究者接受和采用。西藏動(dòng)物模型造模
把膜先用TBST泡洗兩遍再用5%脫脂奶粉或者BSA室溫封閉1-2小時(shí)。注意一定要讓蛋白面充分接觸封閉液。2、孵一抗脫脂奶粉封閉的話,要用TBST泡洗三遍再轉(zhuǎn)移至一抗溶液中,BSA封閉的可以直接轉(zhuǎn)移至一抗中。如果膜的寬(膜是一個(gè)長方形,這里的寬與長相對(duì)應(yīng))不大于8毫米,我習(xí)慣置于15毫升離心管中孵育,兩條膜"背對(duì)背"式放置于一個(gè)管子里(3毫升液體即可)。如果大于8毫米,就用普通的5格的一抗孵育盒(4毫升即可)。4度過夜,一般是12-18個(gè)小時(shí),注意放置水平,用搖床。內(nèi)參等蛋白豐度很高的如果孵久了可能出現(xiàn)條帶連在一起的情況,這時(shí)可以縮短孵育時(shí)間或者降低一抗的濃度。六、孵二抗顯影1、孵二抗室溫一個(gè)小時(shí)足矣。這步要注意的是建議用5%BSA或者脫脂奶粉稀釋二抗,這樣背景會(huì)干凈許多。也要注意膜的蛋白面要充分接觸二抗溶液,我們一般一條膜一個(gè)槽地孵。2、顯影這一步有個(gè)細(xì)節(jié)可能有些同學(xué)沒注意到,就是ECL發(fā)光液要與HRP反應(yīng)一分鐘后顯影效果才會(huì)更好,還有要注意的是顯影液要均勻覆蓋,一般第二次顯影(加新的顯影液)比一次好看。西藏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型培養(yǎng)小鼠卵巢早衰POF模型。
17-高原濕度環(huán)境模擬裝置,18-動(dòng)物行為學(xué)遠(yuǎn)程觀察單元,19-功能控制面板。具體實(shí)施方式為了使本實(shí)用新型的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白,以下結(jié)合附圖及實(shí)施例,對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解,此處所描述的具體實(shí)施例用以解釋本實(shí)用新型,并不用于限定本實(shí)用新型,即所描述的實(shí)施例是本實(shí)用新型一部分實(shí)施例,而不是全部的實(shí)施例。通常在此處附圖中描述和示出的本實(shí)用新型實(shí)施例的組件可以以各種不同的配置來布置和設(shè)計(jì)。因此,以下對(duì)在附圖中提供的本實(shí)用新型的實(shí)施例的詳細(xì)描述并非旨在限制要求保護(hù)的本實(shí)用新型的范圍,而是表示本實(shí)用新型的選定實(shí)施例。基于本實(shí)用新型的實(shí)施例,本領(lǐng)域技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下所獲得的所有其他實(shí)施例,都屬于本實(shí)用新型保護(hù)的范圍。需要說明的是,術(shù)語“”和“第二”等之類的關(guān)系術(shù)語用來將一個(gè)實(shí)體或者操作與另一個(gè)實(shí)體或操作區(qū)分開來,而不一定要求或者暗示這些實(shí)體或操作之間存在任何這種實(shí)際的關(guān)系或者順序。而且,術(shù)語“包括”、“包含”或者其任何其他變體意在涵蓋非排他性的包含,從而使得包括一系列要素的過程、方法、物品或者設(shè)備不包括那些要素,而且還包括沒有明確列出的其他要素。
再向老師、師兄師姐學(xué)習(xí)經(jīng)驗(yàn)和技術(shù),如果實(shí)驗(yàn)平臺(tái)的儀器需要提前預(yù)約,建議提前規(guī)劃好使用的時(shí)間。反復(fù)總結(jié)尋找答案在整個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)的過程中可能會(huì)出現(xiàn)很多問題。比如造模效果欠佳、灌胃操作不當(dāng)、腹腔注射操作失誤、物使用不當(dāng)?shù)纫饎?dòng)物死亡。每遇到問題都需要自己想辦法解決,可以從導(dǎo)師、師兄師姐、文獻(xiàn)、貼吧、視頻教程等找到答案。比如筆者曾遇到同樣的物給藥,發(fā)現(xiàn)有的大鼠麻醉得很深,有的大鼠還活蹦亂跳,在反復(fù)嘗試調(diào)整濃度,給藥劑量,更換麻醉方式,后來才發(fā)現(xiàn)是動(dòng)物體重秤的準(zhǔn)度有問題,導(dǎo)致體重秤得不準(zhǔn)。因此,需要自己反復(fù)琢磨到底是實(shí)驗(yàn)過程中哪一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題,逐一排除。也要求在每一個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟需要標(biāo)準(zhǔn)化,統(tǒng)一化,盡可能的排除干擾因素,這樣方便在遇到問題快的找到答案。同時(shí),建議每日總結(jié),大到動(dòng)物死亡原因分析,小到灌胃操作耗時(shí)多長時(shí)間。建議反復(fù)總結(jié)出每天實(shí)驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn)。做任何一個(gè)操作之前,建議提前腦海中反復(fù)模擬,準(zhǔn)備好相關(guān)工具和試劑,避免臨用之際缺少藥的,影響實(shí)驗(yàn)操作節(jié)奏和個(gè)人心情。筆者曾經(jīng)灌胃操作的時(shí)候發(fā)現(xiàn)藥物竟然忘帶了,只好重新回實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備,那真叫一個(gè)郁悶。仔細(xì)記錄每日實(shí)驗(yàn)過程無論是碩士還是博士??梢試?yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件,增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)材料的可比性。
糖尿病足大鼠模型【目的】構(gòu)建糖尿病足大鼠模型;【材料】1、材料:STZ藥物、注射器、檸檬酸、檸檬酸三鈉;2、試劑配制:1)檸檬酸納緩沖液配制:A液十B液=1:,PH=;A液:檸檬酸mL;B液:朽檬酸三納2)STZ液配制:55mg/kg(避光,現(xiàn)配現(xiàn)用10min內(nèi)注射);3、糖尿病模型構(gòu)建方法:1)大鼠術(shù)前禁食12h;2)按55ug/g注射.連續(xù)3天注射,對(duì)照組注射檸檬酸緩沖液,造模組注射STZ液,注射后不禁水、禁食2-4h;3)STZ注射結(jié)束5天后空腹測(cè)血糖,血糖值高于12mmol/L選入實(shí)驗(yàn)組;【方法】方法一:細(xì)菌懸浮液造模1、糖尿病模型大鼠第二周至第三周時(shí),后足背側(cè)注射l0ul金黃色葡萄球菌懸浮液,造成糖尿病肢端的動(dòng)物模型;2、后續(xù)觀察傷口情況;方法二:皮膚劃傷造模1、三周后糖尿病大鼠后足足背手術(shù)剪做一個(gè)圓形皮膚創(chuàng)口,直徑5mm;2、后續(xù)每日觀察傷口情況,作好記錄。大鼠面癱模型的建立。江蘇高脂高糖動(dòng)物模型技術(shù)
特發(fā)性肺纖維化(IPF)小鼠模型建立。西藏動(dòng)物模型造模
經(jīng)多級(jí)乙醇至水洗:二甲苯(i)5min→二甲苯(ⅱ)5min→100%乙醇2min→95%的乙醇1min→80%乙醇1min→75%乙醇1min→蒸餾水洗2min;4)蘇木素染色5分鐘,自來水沖洗;5)鹽酸乙醇分化30秒;6)自來水浸泡15分鐘;7)置伊紅液2分鐘。8)常規(guī)脫水,透明,封片:95%乙醇(i)1min→95%乙醇(ⅱ)1min→100%乙醇(i)1min→100%乙醇(ⅱ)1min→二甲苯石碳酸(3:1)1min→二甲苯(i)1min→二甲苯(ⅱ)1min→中性樹脂封固。9)顯微鏡下拍照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在4個(gè)月時(shí),與ctrl(對(duì)照)小鼠比較,sixko小鼠的視網(wǎng)膜外核層已經(jīng)開始變薄,表明感光細(xì)胞死亡(圖7)。實(shí)施例5視網(wǎng)膜冰凍切片免疫染色:取4月齡的由實(shí)施例2得到的gm20541基因敲除純合子小鼠斷頸處死后,快速取眼球,并放入4%的pfa中,冰上固定15min后,在角膜上剪口,然后繼續(xù)冰上固定。2h后,pbs緩沖液沖洗3遍,然后將眼球置于30%蔗糖溶液中脫水2h,然后解剖鏡下剪去角膜及晶體,oct包埋并迅速置于-80℃冰箱冷凍。大約10min后,取出oct包埋的眼球,置于冰凍切片機(jī)-25℃平衡約30min后即可切片。切片厚度為12μm。切片完成后,選取質(zhì)量較高的片子于37℃烘箱放置30min,然后免疫組化筆在有視網(wǎng)膜組織的地方畫圈,pbs洗三遍以去除oct。西藏動(dòng)物模型造模