我們知道WB實驗步驟繁瑣，一次實驗歷時也不短，從提蛋白到顯影結束可能要三天，我們就講一下這里面的一些關鍵環(huán)節(jié)。一、蛋白提取及變性1、提取蛋白很多經(jīng)驗豐富的WB實驗者都深有體會，蛋白提取是影響結果重要的環(huán)節(jié)之一。該過程重要的是防降解和保證蛋白濃度不要太低。防降解主要有兩點，一是裂解前注意保持樣品處于低溫環(huán)境中，二是裂解時加入足夠的蛋白酶抑制劑。我們習慣先用冰冷的PBS做心臟的體循環(huán)灌注，然后冰上取腦，分離各腦區(qū)(嗅球，皮層，海馬，中腦，小腦，延髓，丘腦，紋狀體)后置于，用液氮速凍后轉移至-80度冰箱長期保存。接著是保證蛋白濃度，即要加入適量的裂解液，加太少會使蛋白提取不充分，加太多會讓蛋白濃度太低，一般經(jīng)驗是這樣的，細胞樣品例如一個六孔板的細胞加60微升的裂解液，動物組織的話每毫克組織加10微升裂解液。還要加上超聲破碎處理，具體方案見討論部分。如果沒有超聲破碎儀，那就用1毫升注射器不斷抽吸，冰上反復抽吸1分鐘左右，注意不要產(chǎn)生過多氣泡。(需要灌注取材的視頻可以私聊獲取，由于文件過大，又比較血腥，不宜直接放到文章里。)2、蛋白變性加入上樣緩沖液后100攝氏度煮10分鐘，這里的上樣緩沖液有兩種可選。在肝臟中，肝外膽道系統(tǒng)的阻塞會引發(fā)膽汁淤積和炎癥，導致門靜脈周圍區(qū)域的強烈纖維化反應。高脂高糖動物模型建模

    本發(fā)明涉及醫(yī)學工程技術領域，具體而言，涉及一種利用gm20541基因構建視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的方法和應用。背景技術：視網(wǎng)膜色素變性(retinitispigmentosa，rp)是一組視網(wǎng)膜光感受器異常導致的遺傳性致盲眼底病，在全世界的發(fā)病率約為1/3000～1/4000，而在中國人群的發(fā)病率可達1/3500，由于我國人口眾多，rp患者可達三十萬之眾，給家庭和社會帶來了沉重的負擔。目前針對rp的診斷和面臨許多困難，尚無有效的手段，這主要歸因于其在臨床表型和遺傳上具有高度的異質性，針對其病理機制系統(tǒng)研究不足。典型的rp患者早由于視桿細胞功能缺陷而出現(xiàn)夜盲和視野狹窄，逐步發(fā)展為管狀視野，直至失明；眼底檢查可見視網(wǎng)膜色素沉著。在病理學方面，典型的rp主要影響視桿細胞，造成視桿細胞死亡并繼發(fā)視錐細胞死亡，主要表現(xiàn)為光感受器受損、變性，視網(wǎng)膜外核層逐漸變薄直至消失，視網(wǎng)膜外網(wǎng)層及其他相關細胞層出現(xiàn)相應病理改變。此外，由于rp在臨床表型和遺傳模式上均具有高度的異質性，導致許多的rp致病機制尚不清楚，這為rp疾病的臨床診斷帶來極大困難，因此針對rp疾病的致病機制研究迫在眉睫。而目前，缺乏相應的rp疾病模型。北京腦定位動物模型手術可提供專業(yè)的大鼠小鼠動物疾病模型技術，包含心血管系統(tǒng)神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、生殖、泌尿系統(tǒng)、成瘤系統(tǒng)等。

    D-半乳糖致老年癡呆大鼠模型一、服務信息1、動物模型名稱：D-半乳糖致老年癡呆大鼠模型2、實驗動物種屬：SD大鼠3、實驗動物性別：雄性4、實驗動物年齡：成年鼠5、實驗動物體重：180g-220g6、實驗動物環(huán)境：SPF級二、服務項目服務編號服務內(nèi)容服務周期價錢DH2009D-半乳糖致老年癡呆大鼠模型8周詢價1、實驗方法：D-半乳糖誘導（大鼠按）（注：每天1次，連續(xù)6-7周。）2、檢測標準：①SOD明顯下降、MDA明顯增加；②水迷宮試驗顯示學習記憶能力下降；③腦組織神經(jīng)元數(shù)目減少。三、交付標準:1.提供動物模型構建過程中的原始實驗記錄及數(shù)據(jù)圖片。2.根據(jù)要求提供構建成功的模型動物或相關組織材料。四、服務項目說明：1、如有特殊要求，請另詢價。2、雙方簽訂合同后，收取70%首付后啟動實驗。

    特發(fā)性肺纖維化（IPF）小鼠模型建立【方法】1、BALB/c小鼠麻醉，6-8周齡，體重20~25g，仰臥固定于實驗臺上，頸部去毛后酒精消毒，切開皮膚，逐層暴露氣管；2、將1mL注射器經(jīng)兩氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端刺入氣管，回抽無阻力；3、注入博萊霉素（約4~5mg/kg）再向氣管內(nèi)注入～3次，使藥物在肺部分布均勻；4、以大鼠身體長軸為中心，正反快速旋轉鼠板1～2分鐘?？p合皮膚，局部聚維酮碘消毒(或用青霉素消毒)防止，室溫保持在24～25℃，待動物自然清醒后置籠內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)。肺纖維化模型發(fā)展時間：2周可見肺系數(shù)(肺重/體重×100％)、羥脯氨酸含量明顯升高。顯微鏡下可見炎癥細胞浸潤，以淋巴細胞、單核吞噬細胞為主，并有肺泡壁增厚、成纖維細胞增生等Ⅱ級肺泡炎表現(xiàn)。4周可見肺間質內(nèi)有大量散在綠染的膠原纖維，肺泡結構破壞，見有許多纖維細胞等Ⅲ級肺間質纖維化病變。大鼠模型病理組織學與病理生理學改變與人類肺間質纖維化相似。其病變早期表現(xiàn)為滲出性肺泡炎，炎癥細胞在病變處聚集增多。晚期為肺間質纖維化，間質細胞增生，基質膠原聚集取代正常的肺組織結構。【檢測】組織病理切片HE染色。人類疾病的動物模型是指各種醫(yī)學科學研究中建立的具有人類疾病模擬表現(xiàn)的動物。

    腹主動脈縮窄致心衰大鼠模型一、服務信息1、動物模型名稱：腹主動脈縮窄致心衰大鼠模型2、實驗動物種屬：SD大鼠3、實驗動物性別：雌性4、實驗動物年齡：成年5、實驗動物體重：180~220g6、實驗動物環(huán)境：SPF級二、服務項目服務編號服務內(nèi)容服務周期價錢DH2015腹主動脈縮窄致心衰大鼠模型15周詢價1、實驗方法：采用主動脈縮窄法建立模型大鼠麻醉后，仰臥位固定、去腹毛、消毒，沿腹正中線切開皮膚及肌層，分離出腹主動脈，在腎動脈上方將腹主動脈與鈍頭8號探針一起結扎后，小心抽出針頭。手術造模后大鼠正常飼養(yǎng)3個月。大鼠終末體重(BW),心室重(VW),計算心體比(VW/BW),并進行心功能檢測,包括心率(HR)、左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)及左室最大壓力上升及下降速度(±dp/dtmax),并對心肌組織進行病理學檢測.2、檢測標準：模型組大鼠VW/BW明顯增加，LVSP明顯降低，LVEDP明顯升高，±dp/dtmax則**減小，與正常對照組相比具有統(tǒng)計學差異。病理學檢測結果表明心肌出現(xiàn)典型心衰樣病理改變。三、交付標準:1.提供動物模型構建過程中的原始實驗記錄及數(shù)據(jù)圖片。2.根據(jù)要求提供構建成功的模型動物或相關組織材料。四、服務項目說明：1、如有特殊要求，請另詢價。通過博來霉素誘導的肺炎樣癥狀及肺纖維化癥狀模型為研究ALL的有效措施提供理想的動物模型。云南皮下成瘤動物模型飼養(yǎng)

特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是臨床上具有代表性的一種慢性纖維化性肺。高脂高糖動物模型建模

    動物的選擇目前常用的模式生物有果蠅、酵母、小鼠、斑馬魚等。目前主要是小鼠黑色素瘤模型。造模方法黑色素瘤小鼠模型可分為誘發(fā)性模型、移植性模型、轉基因模型。一、誘導性模型應用：誘導的小鼠模型模擬人類受外界因素影響獲得的黑色素瘤，常用于研究預防黑色素瘤形成。1紫外線誘導的小鼠模型通過紫外線照射獲得的黑色素瘤模型被認為是臨床上可靠的模型。方法：有研究者將HGF/SFcDNA表達的小鼠置于日光燈下用不同劑量(kJ/m2UVB、kJ/m2UVA、)進行紫外誘導15min。模型驗證：誘導后的小鼠出現(xiàn)皮膚發(fā)紅，偶有淺表皮脫屑，在組織病理學中觀察到小鼠產(chǎn)生的大多數(shù)皮膚黑色素瘤中具有真皮成分，病變顯示具有垂直生長期或浸潤性惡性黑色素瘤以及淋巴結轉移，這些病變與人類患者黑色素瘤頁面狀擴散的表皮內(nèi)病變特征相似。缺點：但野生型或正常型小鼠一般不易發(fā)生UV誘導的黑色素瘤，因此UV誘導的黑色素瘤小鼠模型往往需要聯(lián)合免疫缺陷小鼠，其操作技術較難、成本較高。2化學誘導化學致物誘導黑色素瘤小鼠模型大多采用DMBA和TBA誘導。DMBA是一種免疫抑制多環(huán)芳烴，其致機理是其活性代謝物被CYP450代謝成致物1，2－環(huán)氧化物-3，4-二醇DMBA，進而損傷DNA。TPA是通過蛋白激酶C充當啟動子。高脂高糖動物模型建模