原標(biāo)題：原代細(xì)胞培養(yǎng)難？有這一篇就夠了！導(dǎo)語(yǔ)原代細(xì)胞培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)，是建立細(xì)胞系的，其步驟包括取材→分離→培養(yǎng)和維持，給大家?guī)?lái)原代細(xì)胞培養(yǎng)的一些技巧，希望大家能有所收獲！原代細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用1、為研究生物體細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝、繁殖提供有力的手段；2、為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件；3、服務(wù)于臨床實(shí)踐，用于藥物篩選等。原代細(xì)胞培養(yǎng)之取材取材作為原代細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的至關(guān)重要，以下幾種取材技術(shù)，你都用過(guò)哪些方法呢？兔髓核原代細(xì)胞培養(yǎng)之分離注意事項(xiàng)1、組織塊培養(yǎng)法1）組織塊接種后，在觀察和移動(dòng)的過(guò)程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng)，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會(huì)脫落飄起。2）加入的培養(yǎng)液不宜過(guò)多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來(lái)。3）當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來(lái)后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。4）為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。2、貼壁型原代細(xì)胞1)原代培養(yǎng)的分離細(xì)胞在初次接觸體外環(huán)境時(shí)，它們之間會(huì)互相影響，在這些細(xì)胞之間能產(chǎn)生一些促生長(zhǎng)的活性物質(zhì)，使細(xì)胞彼此互相促進(jìn)存活和生長(zhǎng)。人臍靜脈血管平滑肌細(xì)胞分離自臍帶組織，是臍靜脈的重要結(jié)構(gòu)之一。吉林模式原代細(xì)胞外包

    包括臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞、皮膚成纖維細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等各種細(xì)胞的原代培養(yǎng)。本人從2014年研究生畢業(yè)后在一家干細(xì)胞公司從事干細(xì)胞項(xiàng)目研發(fā)工作5年以上，擁有5年以上各種細(xì)胞如臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞、皮膚成纖維細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)經(jīng)驗(yàn)。包括負(fù)責(zé)人脂肪干細(xì)胞、野生型豬和基因敲除豬脂肪干細(xì)胞及軟骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)技術(shù)，并多次為301醫(yī)院提供質(zhì)量合格的脂肪干細(xì)胞、軟骨細(xì)胞；負(fù)責(zé)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的制備，將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞送中國(guó)食品藥品檢定研究院進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，并順利獲得中國(guó)食品藥品檢定研究院簽發(fā)的關(guān)于細(xì)胞安全性和生物學(xué)效應(yīng)合格的檢定報(bào)告。非常擅長(zhǎng)從臍帶組織、脂肪組織、皮膚組織等各種組織中分離培養(yǎng)獲得臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞、皮膚成纖維細(xì)胞等，一般第4-7天可見(jiàn)細(xì)胞爬出，7-14天可見(jiàn)大量細(xì)胞爬出，21天左右可進(jìn)行原代傳代培養(yǎng)，30天內(nèi)可獲得足夠量的細(xì)胞并進(jìn)行凍存。如需要各種細(xì)胞的組織塊分離培養(yǎng)服務(wù)，也歡迎大家和我聯(lián)系，我將竭誠(chéng)為您服務(wù)。吉林小鼠原代細(xì)胞臍帶是哺乳類(lèi)連接胎兒和胎盤(pán)的管狀結(jié)構(gòu)。臍帶中通過(guò)尿膜的血管即臍動(dòng)脈和臍靜脈。

    磷酸緩沖鹽溶液),注射器，灌流針，移液槍?zhuān)囵B(yǎng)皿，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，無(wú)菌水。二、組織塊制備選擇符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理規(guī)范的方式處死動(dòng)物，將動(dòng)物浸泡在裝有70％醫(yī)用酒精的燒杯中數(shù)分鐘，用無(wú)菌剪暴露心臟，注射器吸取無(wú)菌pbs連接灌流針進(jìn)行心臟灌流以去除循環(huán)中的血液，對(duì)所需的或組織進(jìn)行取材，將組織移至無(wú)菌操作臺(tái)中，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求用無(wú)菌鑷和無(wú)菌剪修剪出合適的大小，組織塊不宜過(guò)厚以免影響培養(yǎng)效果，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選用膠原酶去除纖維組織。三、一體式原代細(xì)胞爬片瓶的使用根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，可選用血清，明膠，多聚賴(lài)氨酸等基質(zhì)預(yù)先包被培養(yǎng)瓶底部，以使細(xì)胞更好的貼壁生長(zhǎng)。向加樣口6加入適當(dāng)培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶，使培養(yǎng)基覆蓋培養(yǎng)瓶底部一薄層即可。根據(jù)組織塊的大小，用移液槍或鑷子將組織塊通過(guò)加樣口均勻放置在培養(yǎng)瓶底部，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的種植密度。注射器吸取適量無(wú)菌水然后向正壓口2中注入，在水的壓力下，通過(guò)聯(lián)動(dòng)裝置即可推動(dòng)纖維板8下移，待纖維板和組織塊達(dá)到合適的接觸程度時(shí)停止注水，繼續(xù)向加樣口加入適量的培養(yǎng)基浸沒(méi)組織塊，旋緊瓶蓋，動(dòng)作輕柔的將培養(yǎng)瓶放進(jìn)培養(yǎng)箱中。1-2天后鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)以及生長(zhǎng)密度。

    原代細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)與不足細(xì)胞培養(yǎng)很好的補(bǔ)充了體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的不足，它讓細(xì)胞功能和進(jìn)程的研究更具可操作性。細(xì)胞系的一個(gè)缺點(diǎn)是它們往往與原始的組織有不一樣的遺傳和表型。相比之下，原代細(xì)胞保持了細(xì)胞在體內(nèi)的許多重要標(biāo)志和功能。原代細(xì)胞的生長(zhǎng)：雖然原代細(xì)胞有諸多優(yōu)點(diǎn)，但是獲得高純度的原代細(xì)胞是一個(gè)非常艱巨的過(guò)程。比起細(xì)胞系，原代細(xì)胞可謂是極其敏感，需要額外添加經(jīng)典培養(yǎng)基所沒(méi)有的營(yíng)養(yǎng)。原代細(xì)胞要在專(zhuān)為每種細(xì)胞定制的特殊培養(yǎng)液中存活和生長(zhǎng)。例如內(nèi)皮細(xì)胞與上皮細(xì)胞或神經(jīng)元營(yíng)養(yǎng)需求就大為不同。因此需要特殊培養(yǎng)基。傳統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)基靠血清提供生長(zhǎng)因子、脂類(lèi)和其他未知成分供細(xì)胞生長(zhǎng)。但高血清會(huì)導(dǎo)致原代細(xì)胞分化或助長(zhǎng)成纖維細(xì)胞等污染。此外，使用血清還會(huì)顧慮費(fèi)用增高和批次差異等問(wèn)題。使用低血清或無(wú)血清的特殊成分培養(yǎng)基不僅可以避開(kāi)這些問(wèn)題，還能更好的促進(jìn)原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。另外，將原代細(xì)胞接種在生理親和性的基板上可以顯著提高細(xì)胞貼壁率、生長(zhǎng)狀態(tài)和純度。基因表達(dá)分析：基因表達(dá)直接影響細(xì)胞功能，基因表達(dá)分析對(duì)研究原代細(xì)胞起重要作用。傳統(tǒng)的報(bào)告基因檢測(cè)和cDNA芯片方法往往需要轉(zhuǎn)染或大量高質(zhì)量RNA。但是原代細(xì)胞是出了名的難轉(zhuǎn)染。臍靜脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展。

    作為本實(shí)用新型所述的一種可以分離的細(xì)胞培養(yǎng)板的一方案，其中：所述底座底部固定安裝有支撐腳架。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型的有益效果是：通過(guò)該一種可以分離的細(xì)胞培養(yǎng)板的設(shè)置，結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)合理，通過(guò)底座、一號(hào)培養(yǎng)板、梯形卡槽、二號(hào)培養(yǎng)板、梯形卡塊和固定螺絲的配合，實(shí)現(xiàn)了方便拆卸，且連接更加穩(wěn)定，通過(guò)橫向標(biāo)尺和縱向標(biāo)尺的配合，方便標(biāo)號(hào)對(duì)比，提高了效率。附圖說(shuō)明為了更清楚地說(shuō)明本實(shí)用新型實(shí)施方式的技術(shù)方案，下面將結(jié)合附圖和詳細(xì)實(shí)施方式對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖是本實(shí)用新型的一些實(shí)施方式，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖。其中：圖1為本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為本實(shí)用新型側(cè)視結(jié)構(gòu)示意圖；圖3為本實(shí)用新型培養(yǎng)皿槽結(jié)構(gòu)示意圖。圖中；100底座、110支撐腳架、200一號(hào)培養(yǎng)板、210梯形凹槽、220固定螺絲、300二哈培養(yǎng)板、310梯形卡塊、400培養(yǎng)皿槽、410限位槽、420限位彈簧、430固定桿、500縱向標(biāo)尺、510橫向標(biāo)尺。具體實(shí)施方式為使本實(shí)用新型的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型的具體實(shí)施方式做詳細(xì)的說(shuō)明。采用波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色鑒定，結(jié)果顯示波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色鑒定呈現(xiàn)陽(yáng)性。黑龍江哪里有原代細(xì)胞培養(yǎng)

當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時(shí)，給細(xì)胞傳代。吉林模式原代細(xì)胞外包

    如果接種的細(xì)胞密度過(guò)低，細(xì)胞之間的促生長(zhǎng)作用很小，也很難使細(xì)胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進(jìn)入生存環(huán)境的變化過(guò)程。如果接種的細(xì)胞密度過(guò)大，會(huì)導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。2）適當(dāng)增大原代培養(yǎng)接種的細(xì)胞密度，給培養(yǎng)的細(xì)胞提供更多的類(lèi)似于在體內(nèi)時(shí)細(xì)胞之間的相互作用，會(huì)極大提高原代培養(yǎng)的細(xì)胞在體外存活率。待細(xì)胞適應(yīng)體外環(huán)境后進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)再以較低的密度接種和培養(yǎng)。3）盡快使接種的細(xì)胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵?？梢栽诮臃N后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h到5h，待細(xì)胞貼壁后，再補(bǔ)足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。3、懸浮型原代細(xì)胞1）必須保持細(xì)胞的懸浮狀態(tài)?？梢酝ㄟ^(guò)增加培養(yǎng)液的黏度來(lái)幫助細(xì)胞呈懸浮狀態(tài)，如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液是，以5ml為限度，否則攪拌時(shí)會(huì)產(chǎn)生氣泡對(duì)細(xì)胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過(guò)快，否則即可使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下，可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞換液時(shí)要注意不要吸出細(xì)胞。2）能夠進(jìn)行懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營(yíng)養(yǎng)成分消耗大。吉林模式原代細(xì)胞外包