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或者是還包括為這種過程、方法、物品或者設(shè)備所固有的要素。在沒有更多限制的情況下,由語句“包括一個……”限定的要素,并不排除在包括所述要素的過程、方法、物品或者設(shè)備中還存在另外的相同要素。以下結(jié)合實施例對本實用新型的特征和性能作進一步的詳細描述。實施例1本實用新型提供一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng),包括功能設(shè)備集成底座1和設(shè)置在功能設(shè)備集成底座1上的飼養(yǎng)倉2,所述飼養(yǎng)倉2具有無極調(diào)控微負壓裝置、高原低氧環(huán)境模擬裝置、高原光照環(huán)境模擬裝置15、高原溫度環(huán)境模擬裝置16、高原濕度環(huán)境模擬裝置17、動物行為學(xué)遠程觀察單元18,所述飼養(yǎng)倉2內(nèi)設(shè)置有若干代謝籠3,飼養(yǎng)倉2前后箱體上設(shè)置有觀察窗4和若干操作窗5,飼養(yǎng)倉2左右箱體上分別設(shè)置有小物件傳遞窗6和大物件傳遞窗7,所述代謝籠3還包括設(shè)置在代謝籠3上的投料斗8、飲水瓶9和設(shè)置在代謝籠3下方的聚糞斗10、尿液排出口11、糞便排出口12。本實施例的工作原理:本裝置的各個功能均通過設(shè)置在飼養(yǎng)倉2上的功能控制面板19控制,本裝置外形采用304不銹鋼,具有良好的氣密性。實驗動物送入飼養(yǎng)倉2內(nèi)部后,關(guān)閉小物件傳遞窗6和大物件傳遞窗7,通過功能控制面板19實現(xiàn)飼養(yǎng)倉2內(nèi)部環(huán)境模擬。(arteriosclerosis,AS)是一種緩慢進行性疾病,嚴重影響人類健康。北京大鼠動物模型建模
脂多糖致膿毒血癥肝損傷小鼠模型【方法】1、小鼠稱重,按體重計算藥物用量。2、脂多糖(LPS)藥物配制,生理鹽水溶解,根據(jù)小鼠體重配制終濃度為10mg/kg,200ul/只腹腔注射使用。3、抓取小鼠,捏緊小鼠頸背部皮膚,小拇指無名指疊加固定小鼠左下肢充分暴露小鼠腹部。4、小鼠的頭部向下,這樣腹腔中的就會自然倒向胸部,防止注射器刺入時損傷腸道。進針的動作要輕乘,防止刺傷腹部。5、注射器吸取準備好的藥物,腹腔左下部與身體呈45度角左右斜角進針注射LPS,注射完藥物后,輕微旋轉(zhuǎn)針頭退針,防止漏液。6、造模18h后處死小鼠解剖取組織進行組織病理學(xué)檢查。【檢測】肝組織有無:1、肝水腫;2、肝出血;3、炎性細胞浸潤;4、肝組織腫大等病理改變。再觀察肝損傷程度,各按程度積分為:0分為無該項病理改變;1分為病理變化輕且很局限;2分為病理變化中等且局限;3分為病變中等但或局部很;4分為非常的理改變。求出各動物的各項病理改變的總和,作為肝損傷程度積分。西藏豚鼠動物模型技術(shù)好的動物模型能夠較好地模擬疾病狀態(tài),為的研究提供可能。
實驗樣本分類實驗一般采取樣本有:血液樣本、組織樣本和細胞樣本。通常,組織樣本采集后,應(yīng)立即用等滲溶液(PBS或生理鹽水)盡量把血液漂洗干凈(除非血液也是分析對象),用濾紙或紗布吸干,把樣本分切成幾分,每份的體積約2個黃豆大小,每份用一個管子裝。血液樣本的采集應(yīng)根據(jù)不同實驗的要求,將會采取不同策略。血清樣本:全血中不加抗凝劑,血液凝固后取出的不含凝血因子的淡黃色透明液體。(全血標本室溫放置2小時3000rpm/min離心15min)血漿樣本:全血中加抗凝劑,血液凝固后取出的含凝血因子的淡黃色透明液體。(可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃,3000rpm/min離心15min)如果是做生化\ELISA等檢測可以考慮血漿和血清,根據(jù)獲得的樣本量可考慮分裝成100-500μl/管,可避免反復(fù)凍融造成的檢測誤差。生化:建議優(yōu)先選擇血清,其次選擇肝素抗凝血漿;ELISA:建議優(yōu)先選擇血清,其次選擇肝素或EDTA抗凝血漿;凝血實驗:只能選擇枸櫞酸鈉抗凝血漿;血常規(guī):只能選擇EDTA抗凝全血;如果要收集其中的白細胞、血小板等建議用抗凝全血。如果要做流式建議用專門的流式用血液收集管,防止表面抗原的丟失,或者盡快安排就近檢測。樣本處理取樣完后。
四氯化碳誘導(dǎo)急性肝損傷大鼠模型【方法】1、將大鼠隨機分配至2組中,每組5只,正常喂食喂水7d后進行試驗;2、大鼠體重為200g±10g,按組別給予藥物:生理鹽水組每只腹腔注射1ml生理鹽水、模型組每只按5ml/kg背部皮下注射四氯化碳3、各組藥物注射24h后取材進行相關(guān)檢測(注:注射前按比例混合四氯化碳:橄欖油=1:)【評定】給予四氯化碳后TP含量下降,ALT和AST含量上升【檢測】生理鹽水組肝索結(jié)構(gòu)清晰,血管內(nèi)無淤血,血管周圍無炎癥病灶,肝小葉結(jié)構(gòu)清晰;給予四氯化碳后肝索排列紊亂,結(jié)構(gòu)不清,存在大量壞死區(qū)域且肝索結(jié)構(gòu)消失,有大小不一的空泡結(jié)構(gòu),多數(shù)血管內(nèi)有淤血并伴有粉染蛋白樣物質(zhì),血管周圍有炎癥反應(yīng)灶,少量紅細胞滲出;西維來司鈉介入后肝索排列不清晰,存在部分壞死區(qū)域且肝索結(jié)構(gòu)消失,有大小不一的空泡結(jié)構(gòu),少數(shù)血管內(nèi)有淤血并伴有粉染蛋白樣物質(zhì),血管周圍有炎癥反應(yīng)灶,極少量紅細胞滲出。裸鼠皮下成瘤:前肢近腋后皮下注射細胞懸液; 裸鼠原位瘤:胰腺成瘤;尾靜脈注射成瘤。
微波爐中融化后制成1%的瓊脂糖膠。取10μlpcr產(chǎn)物于加樣孔中,120v恒壓瓊脂糖電泳15min.用凝膠成像系統(tǒng)成像。圖4中a上方是gm20541條件性敲除鑒定結(jié)果,wt表示野生型對照,條帶大小為223bp;het表示雜合子,有兩個條帶223bp和358bp;sixko表示純合子,條帶大小為358bp。圖4中a下方是six3-cre鑒定結(jié)果。six3-cre大小為200bp。根據(jù)圖4中a的結(jié)果,顯示所采用的鑒定方法可對新生小鼠的基因型進行有效鑒定。其中,gm20541基因敲除純合子小鼠即可作為視網(wǎng)膜色素變性疾病模型(后文用sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠;ctr是指野生型;het是指雜合子),并進行相關(guān)表型的驗證。(5)rt-pcr實驗分析six3-cre敲除小鼠視網(wǎng)膜中基因敲除效率驗證,方法如下:(a)分別分離野生型和突變型小鼠視網(wǎng)膜組織,置于,加入1mltrizol提取液,室溫20分鐘;(b)加入200μl氯仿,充分混勻,室溫靜置10分鐘;(c)將樣品置于4度離心機,10000轉(zhuǎn)離心15分鐘;(d)小心吸取上清液,加入等體積異丙醇,充分混勻,10000轉(zhuǎn)離心沉淀rna;(e)75%乙醇清洗析出的總rna,離心再次沉淀,然后晾干加入depc水溶解;(f)提取的總rna用cdna合成試劑盒(invitrogen,waltham,ma,usa)合成cdna。LPS脂多糖致膿毒血癥肝損傷小鼠模型。北京高脂高糖動物模型造模
動物模型的優(yōu)越性主要表現(xiàn)在以下幾下方面。北京大鼠動物模型建模
缺點:該移植模型的原發(fā)出現(xiàn)與轉(zhuǎn)移發(fā)生之間時間間隔短,不利于藥物藥效研究;且細胞為鼠源,與人類有一定的差異。2異種移植模型異種移植模型是將人類的細胞或組織移植入免疫缺陷型實驗動物體內(nèi)。此模型一般采用免疫缺陷型小鼠,例如無胸腺裸鼠、CB17-SCID小鼠、NOD/SCID小鼠、NSG小鼠。一般來說,免疫缺陷程度越高,成瘤性越好。的相關(guān)研究中,人源細胞系異種移植(cell-line-derivedxenograft,CDX)模型和患者組織異種移植(patient-derivedxenograft,PDX)模型已得到廣泛應(yīng)用。CDX模型方法:將5×106的人A375黑色素瘤細胞皮下注射NOD/SCID小鼠腹側(cè)的雙側(cè),成功構(gòu)建黑色素瘤CDX模型。PDX模型方法:有研究者將93個新鮮的患者組織切成2×2×2mm3碎片的大小,皮下接種6周大的NOD/SCID雌性小鼠,建立PDX模型。優(yōu)點:保留了病人的組織學(xué)和遺傳學(xué)特征,可模擬潰瘍狀態(tài)對人類黑色素瘤預(yù)后的影響。缺點:此模型移植后的潛伏期長,連續(xù)傳代后鼠基質(zhì)被人類基質(zhì)替代,移植率可變,免疫系統(tǒng)受損,有移植物抗宿主病的可能性以及某些免疫細胞功能的缺乏。三、轉(zhuǎn)基因小鼠模型可以通過異位表達基因,引入特定的致突變或滅活抑制基因來對小鼠進行轉(zhuǎn)基因黑色素瘤模型的構(gòu)建。北京大鼠動物模型建模