轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果及TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析）圖5RNA-Seq和m6A-seq聯(lián)合鑒定SOCS2是介導(dǎo)的m6A修飾的下游靶基因PLoSOne2015,在許多不同種類的RNA中，都已觀察到N6-腺苷(m6A)的甲基化，但其在microRNAs中還沒(méi)有被研究。研究者在FTO1C1,FTO2D4和FTO3C3細(xì)胞系中，通過(guò)敲除m6A甲基轉(zhuǎn)移酶FTO篩選到表達(dá)差異的microRNA,說(shuō)明miRNA受m6A甲基化的調(diào)控。進(jìn)一步通過(guò)MeRIP-Seq發(fā)現(xiàn)相當(dāng)一部分的microRNA具有m6A修飾。通過(guò)motif分析，他們發(fā)現(xiàn)了區(qū)分甲基化和非甲基化microRNA的一致序列。該文章所述的表觀遺傳修飾在基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的復(fù)雜性上增加了一個(gè)新的層次。圖FTO敲除對(duì)甲基化的miRNAs的穩(wěn)定狀態(tài)的影響。參考文獻(xiàn)Y,DominissiniD,RechaviG,HeC:Geneexpressionregulationmediatedthroughreversiblem(6)(5):'(1):(12):(6):(1):(1):(uridine)(41):(6)(7540):(1):(7481):(4):(6)A-LAIC-seqrevealsthecensusandcomplexityofthem(6)(8):'UTRm(6)(4):(7544):(6)(6):(5):(7667):(2):"">panstyle="color:#f5c81c;">xiainducesthebreastcancerstemcellphenotypebyHIF-dependentandALKBH5-mediatedm(6)(14):"">panstyle="color:#f5c81c;">(40):(6)(3):(1):(1):(4):(11):。動(dòng)物疾病模型可以分為兩種類型：自然模型和人工模型。湖北兔科研技術(shù)服務(wù)外包

    1.首要原則：細(xì)胞不重要情況下立即丟棄，培養(yǎng)箱滅菌，所用培養(yǎng)基也都要丟棄，器械等重新滅菌或拆用新的。2.細(xì)菌污染一般都救不回來(lái)了，發(fā)現(xiàn)的時(shí)候培養(yǎng)基一般都很渾濁且細(xì)胞都死了3.污染且細(xì)胞很重要時(shí)：遇到念球菌污染，且細(xì)胞為基因改造細(xì)胞，非常重要。如231貼壁乳腺細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周圍出現(xiàn)很小的串珠透亮圓點(diǎn)，非常像念球菌污染，此時(shí)細(xì)胞狀態(tài)尚可，且污染少。處理如下：用預(yù)熱或室溫PBS清洗3次，可適當(dāng)振搖，將污染沖洗下來(lái)。隨后加入10-20%雙抗到培養(yǎng)瓶，置于37度培養(yǎng)箱1h，之后再用PBS清洗三遍，直至視野下無(wú)可見(jiàn)污染。此時(shí)細(xì)胞也被沖下大部分，因此此方法只適用在細(xì)胞貼壁強(qiáng)，狀態(tài)好，密度高時(shí)使用。之后每天再更換培養(yǎng)基，每次用PBS沖洗2遍。過(guò)幾天細(xì)胞狀態(tài)尚可時(shí)，消化離心時(shí)用500r，3min，去掉上清，重復(fù)3次。這個(gè)方法是根據(jù)文獻(xiàn)可利用念球菌和細(xì)胞體積重量差異實(shí)現(xiàn)分離。基本上這一步做完以后，污染就基本了，接下來(lái)就注意多觀察，勤換液就行。兔科研技術(shù)服務(wù)外包干貨分享 | PCR反應(yīng)污染原因追蹤及污染處理方法。

    外泌體的抑制作用外泌體水平升高通常與不同類型的惡化相關(guān)，一些研究人員希望能通過(guò)降低外泌體到正常水平來(lái)防止不良預(yù)后。從這個(gè)角度出發(fā)，許多正在進(jìn)行的研究旨在通過(guò)調(diào)節(jié)外泌體生成分泌的過(guò)程或通過(guò)特異性靶向其成分抑制其與靶細(xì)胞的相互作用來(lái)調(diào)節(jié)外泌體的產(chǎn)生。如今我們對(duì)外泌體機(jī)制和不同生理和病理?xiàng)l件下的功能的理解呈指數(shù)級(jí)增長(zhǎng)，雖然目前其生物學(xué)功能還未完全解析清楚，但研究者們?cè)谠S多領(lǐng)域均已對(duì)其進(jìn)行了深入探索。外泌體不是廢物顆粒，而是細(xì)胞間通訊的關(guān)鍵介質(zhì)，作為宿主細(xì)胞的衛(wèi)星，外泌體包含大量的生物信息，其功能超出了初的預(yù)期，宿主細(xì)胞控制著外泌體的內(nèi)容物，從而改變了自己或其他細(xì)胞的命運(yùn)。其次，外泌體對(duì)的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移有著強(qiáng)烈的影響，可以通過(guò)外泌體預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)移的部位并建立轉(zhuǎn)移前的生態(tài)位。參考文獻(xiàn)：[1]高方園,焦豐龍,張養(yǎng)軍,秦偉捷,錢小紅.外泌體分離技術(shù)及其臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].色譜,2019,37。

    RNA各種可逆的化學(xué)修飾被認(rèn)為是一種新的表觀遺傳調(diào)控方式。m6A是真核生物mRNA常見(jiàn)的化學(xué)修飾，在調(diào)控mRNA穩(wěn)定性，剪切和翻譯方面具有重要的作用。作者使用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序發(fā)現(xiàn)了METTL3（甲基轉(zhuǎn)移酶3），一種主要的RNAN6-腺苷-甲基轉(zhuǎn)移酶，在人肝細(xì)胞（HCC）和多種實(shí)體中高表達(dá)。在臨床上，METTL3的過(guò)度表達(dá)與肝細(xì)胞患者不良預(yù)有關(guān)。體外實(shí)驗(yàn)證明敲除METTL3會(huì)抑制HCC細(xì)胞增殖，遷移及克隆形成。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明敲除METTL3會(huì)明顯抑制HCC體內(nèi)成瘤和肺轉(zhuǎn)移。另外，使用CRISPR/dCas9-VP64系統(tǒng)，內(nèi)源性高表達(dá)METTL3會(huì)促進(jìn)HCC細(xì)胞在體外和體內(nèi)生長(zhǎng)。通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、m6A-Seq、MeRIP-PCR，作者確定了SOCS2（細(xì)胞因子信號(hào)2的抑制因子）作為METTL3介導(dǎo)的m6A修飾的下游靶基因。敲除METTL3表達(dá)會(huì)消除SOCS2mRNAm6A修飾并增強(qiáng)SOCS2mRNA表達(dá)。m6A介導(dǎo)的SOCS2mRNA降解是依賴于m6A“讀取器”蛋白YTHDF2?？傊琈ETTL3在HCC大部分高表達(dá)中,并通過(guò)m6A-YTHDF2依賴機(jī)制抑制SOCS2表達(dá)從而促進(jìn)HCC進(jìn)展。因此，作者發(fā)現(xiàn)了在肝發(fā)生過(guò)程中表觀遺傳改變的一種新機(jī)制。圖4RNA甲基化轉(zhuǎn)移酶METLLT3在肝組織中高表達(dá)。盡管存在挑戰(zhàn)，動(dòng)物疾病模型的發(fā)展前景仍然值得期待。

    小鼠尾尖用酒精擦拭尾巴，引起輕微的血管擴(kuò)張；用無(wú)菌手術(shù)刀、刀片或鋒利的剪刀，快速截?cái)嘈∈笪布?-2毫米。如果需要多次，之后每次需截除2-3毫米；從尾部像尾尖方向按摩，增加血流；用采集血液；結(jié)束后，按壓傷口或使用止血?jiǎng)﹣?lái)止血；每次量大約可達(dá)。小鼠眼球取血單手保定好小鼠；必要時(shí)剪掉小鼠胡須，防止污染血液；輕壓取血側(cè)眼部皮膚，使眼球充血突出；用彎頭鑷夾取眼球并快速在摘?。煌瑫r(shí)用左手中指輕按小鼠心臟部位，以加快心臟泵血速度；當(dāng)血液流盡時(shí)，用脫臼法處死小鼠；大鼠眼眶取血先將小鼠進(jìn)行麻醉，大鼠翻正反射消失時(shí)不在繼續(xù)麻醉；抗凝處理過(guò)的玻璃毛細(xì)采樣管，掰成2-3厘米長(zhǎng)度；右手食指和拇指輕按眼眶兩側(cè)皮膚，使眼球突出，毛細(xì)管從內(nèi)側(cè)的眼球與眼瞼的縫隙處進(jìn)入，輕輕旋轉(zhuǎn)毛細(xì)管，稍微深入眼球后上方，血液流速快的時(shí)候4-5滴即可，溫柔的將毛細(xì)管取出；用棉簽按壓大鼠眼眶止血，每次可取血50-100微升，將血液放入冰盒中保存。小鼠心臟取血先將小鼠麻醉，稍靠右側(cè)平躺在手術(shù)板上固定；左側(cè)第三四根肋骨間觸摸心臟，跳動(dòng)明顯，慢慢進(jìn)針；針有回血停止進(jìn)針，開(kāi)始取血；一次可以300到500微升，小鼠存活，放到加熱墊上待小鼠蘇醒后放入籠中。在疫苗測(cè)試中，動(dòng)物模型則可以用來(lái)評(píng)估疫苗的有效性和安全性。湖北豚鼠科研技術(shù)服務(wù)服務(wù)

細(xì)胞是生命的基本單位，所有生物體都是由一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞組成的。下面就跟著上海東寰一起看看吧。湖北兔科研技術(shù)服務(wù)外包

    外泌體的功能外泌體可能作為細(xì)胞之間物質(zhì)和信號(hào)通訊的途徑，不同的細(xì)胞通過(guò)分泌攜帶不同組分的外泌體實(shí)現(xiàn)細(xì)胞間通訊，這些外泌體被受體細(xì)胞吸收，通過(guò)物質(zhì)交換或釋放內(nèi)含物實(shí)現(xiàn)物質(zhì)和信號(hào)的交流。外泌體與受體細(xì)胞的信息交流可能通過(guò)以下4種途徑實(shí)現(xiàn):外泌體表面膜蛋白質(zhì)被目的細(xì)胞表面的受體識(shí)別，從而靶細(xì)胞;外泌體在蛋白酶作用下產(chǎn)生的表面膜蛋白質(zhì)碎片可作為目的細(xì)胞表面受體的配體;外泌體脂膜可以與目的細(xì)胞膜融合，將蛋白質(zhì)和RNA等內(nèi)容物釋放進(jìn)去，此類膜融合可能改變靶細(xì)胞的一些膜特性，例如脂質(zhì)和膜蛋白質(zhì)的密度及種類;目的細(xì)胞通過(guò)胞吞的形式攝入外泌體經(jīng)由以上幾種途徑，外泌體將其攜帶的生物信息運(yùn)輸?shù)街苓叞屑?xì)胞或經(jīng)血液等體液運(yùn)輸而被遠(yuǎn)處組織細(xì)胞攝取，進(jìn)而影響目的細(xì)胞的基本功能和基因表達(dá)。幾乎所有的細(xì)胞都可以在自發(fā)或在一定刺激條件下產(chǎn)生外泌體，不同的細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體具有不同的功能，這些外泌體參與了一系列生理和病理過(guò)程，如發(fā)生與發(fā)展、抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)、組織愈合等。此外，外泌體與疾病的研究表明：外泌體可能在代謝性疾病的出現(xiàn)以及心血管健康中發(fā)揮作用。湖北兔科研技術(shù)服務(wù)外包