m6A研究又有新手段了？趕緊來了解一下吧！欄目：研究動(dòng)態(tài)發(fā)布時(shí)間：2019-08-14RNA甲基化m6A是如今的研究熱點(diǎn)之一,Cell上新發(fā)表了一篇介紹不使用m6A抗體的檢測(cè)mRNAm6A水平的Resource文章......RNA甲基化m6A是如今的研究熱點(diǎn)之一，目前主要的研究思路包括差異表達(dá)的write，reader和eraser基因分析；m6A抗體檢測(cè)全轉(zhuǎn)錄組甲基化水平；分析m6A甲基化水平變化的靶基因和下游機(jī)制研究。而在7月25日的Cell上新發(fā)表了一篇介紹不使用m6A抗體的檢測(cè)mRNAm6A水平的Resource文章，小編時(shí)間和大家分享一下。作者開發(fā)這一方法的前提是有研究報(bào)道了MazF能特異性的識(shí)別無修飾的ACA序列并發(fā)揮RNA酶活性在ACA之前剪切底物。但ACA序列的個(gè)A發(fā)生m6A甲基化之后將無法被MazF所識(shí)別，如圖一所示。圖1MazFRNA酶作用示意圖根據(jù)這一原理，作者將純化后的mRNA進(jìn)行MazF酶處理，然后再對(duì)打斷的RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)建庫(kù)測(cè)序。對(duì)于無修飾的位點(diǎn)，ACA處被完全剪切，測(cè)序reads正好分布于該位點(diǎn)上下游而且比對(duì)至該處的上下游reads數(shù)是相同的.如圖2所示。而甲基化位點(diǎn)的reads會(huì)包含上下游的序列。作者開發(fā)了MAZTER-MINE軟件包專門進(jìn)行分析（圖3）。瘤細(xì)胞的增殖活性，從而更好地評(píng)估腫、瘤的惡性程度和預(yù)后.湖北組織科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)

    且研究表明HNRNPC通過m6A與RNA結(jié)合調(diào)控目標(biāo)轉(zhuǎn)錄本的豐度和選擇性剪切[9].圖1m6A修飾的酶系統(tǒng)[10]m6A生物學(xué)功能越來越多的證據(jù)表明m6A修飾在哺乳動(dòng)物中發(fā)揮重要的生物功能。例如，在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控RNA的穩(wěn)定性[11]、定位[12]、運(yùn)輸、剪切[13]和翻譯[14]。ClaudioR.等發(fā)現(xiàn)依賴METTL3的pri-miRNA甲基化，會(huì)促進(jìn)DGCR8識(shí)別和加工，從而促進(jìn)microRNA的成熟[15]。此外，m6A識(shí)別蛋白HNRNPA2B1促進(jìn)pri-miRNA加工成pre-miRNA[16]。另外，環(huán)狀RNA上m6A的修飾能促進(jìn)環(huán)狀RNA的翻譯[17]。m6A修飾在基因表達(dá)調(diào)控中起著重要的作用，其調(diào)控機(jī)制的異?？赡芘c人類疾病或相關(guān)。目前發(fā)現(xiàn)m6A可能會(huì)影響精子發(fā)育（ALKBH5，METTL3，Ythdc2）、發(fā)育（METTL3、FTO、ALKBH5）、免疫（METTL3）、UV誘導(dǎo)的DNA損傷反應(yīng)（METTL3，F(xiàn)TO）、生成（YTHDF2）或轉(zhuǎn)移（METTL14）、干細(xì)胞更新（METTL14）、脂肪分化（FTO）、生物節(jié)律、細(xì)胞發(fā)育分化、細(xì)胞分裂及其它的一些生命過程。例如，ALKBH5敲除的雄性小鼠增加了mRNA中的m(6)A修飾，其特點(diǎn)是凋亡影響減數(shù)分裂中期的精子細(xì)胞，引起生育能力受損[7]。METTL3和METTL14增加弱精癥精子的m6A水平[18]，在生殖細(xì)胞中，METTL3的敲除嚴(yán)重抑制精子分化和減數(shù)分裂的發(fā)生。貴州疾病科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)細(xì)胞劃痕(wound healing）法是簡(jiǎn)捷測(cè)定細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)和修復(fù)能力的方法。

    用伊紅乙醇液對(duì)比染色1~3min。（4）將切片放入95%乙醇中洗去多余的紅色，然后放入無水乙醇中3~5min，吸干后將切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3~5min。3、觀察在鏡下可見卵巢呈扁橢圓形，表面為單層扁平上皮細(xì)胞或單層立方上皮，卵巢實(shí)質(zhì)分為皮質(zhì)和髓質(zhì)?？梢娚掀ぃ悸雅莺蜕L(zhǎng)卵泡。卵巢組織中各發(fā)育階段卵泡及卵巢基質(zhì)的形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰可見,細(xì)胞核呈藍(lán)紫色,細(xì)胞質(zhì)及間質(zhì)成分呈淺紅色,卵泡中卵母細(xì)胞、卵泡細(xì)胞、透明帶均清晰可見。注意事項(xiàng)1.取材注意事項(xiàng)（1）取材動(dòng)作要迅速，不宜作太久的拖延以免組織細(xì)胞的成分、結(jié)構(gòu)等發(fā)生變化。（2）切片材料應(yīng)根據(jù)需要觀察的部位進(jìn)行選擇，盡可能不要損傷所需要的部分。（3）切取的組織塊不宜太大，以利于固定劑穿透，通常以5mmx5mmx2mm或10mmx10mmx2mm為宜。2.固定注意事項(xiàng)（1）一般固定液，都以新配為好，配好后應(yīng)貯存在陰涼處，不宜放在日光下，以免引起化學(xué)變化，失去固定作用。（2）有些混合固定液的成份之間會(huì)發(fā)生氧化還原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早，固定時(shí)就沒有作用了。（3）固定材料時(shí)，固定液必須充足，一般為材料塊的20~30倍，有些水分多的材料，中間應(yīng)更換1~2次新液。（4）材料固定完畢后。

    1.首要原則：細(xì)胞不重要情況下立即丟棄，培養(yǎng)箱滅菌，所用培養(yǎng)基也都要丟棄，器械等重新滅菌或拆用新的。2.細(xì)菌污染一般都救不回來了，發(fā)現(xiàn)的時(shí)候培養(yǎng)基一般都很渾濁且細(xì)胞都死了3.污染且細(xì)胞很重要時(shí)：遇到念球菌污染，且細(xì)胞為基因改造細(xì)胞，非常重要。如231貼壁乳腺細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周圍出現(xiàn)很小的串珠透亮圓點(diǎn)，非常像念球菌污染，此時(shí)細(xì)胞狀態(tài)尚可，且污染少。處理如下：用預(yù)熱或室溫PBS清洗3次，可適當(dāng)振搖，將污染沖洗下來。隨后加入10-20%雙抗到培養(yǎng)瓶，置于37度培養(yǎng)箱1h，之后再用PBS清洗三遍，直至視野下無可見污染。此時(shí)細(xì)胞也被沖下大部分，因此此方法只適用在細(xì)胞貼壁強(qiáng)，狀態(tài)好，密度高時(shí)使用。之后每天再更換培養(yǎng)基，每次用PBS沖洗2遍。過幾天細(xì)胞狀態(tài)尚可時(shí)，消化離心時(shí)用500r，3min，去掉上清，重復(fù)3次。這個(gè)方法是根據(jù)文獻(xiàn)可利用念球菌和細(xì)胞體積重量差異實(shí)現(xiàn)分離。基本上這一步做完以后，污染就基本了，接下來就注意多觀察，勤換液就行。裸鼠皮下成瘤模型造模意義.

    一種是用beta巰基乙醇打開蛋白質(zhì)分子二硫鍵的，另一種是用DTT(二硫蘇糖醇)。兩者的作用是一樣的，但特點(diǎn)不一樣，前者更容易與氧氣反應(yīng)，穩(wěn)定性比后者差，如果在常溫下暴露在空中，前者只能維持24小時(shí)的活性，后者卻可以維持7天左右。所以該如何選擇?如果是蛋白樣品較少，跑幾次就可以用完的樣品，這時(shí)選擇beta巰基乙醇。如果樣品很多，計(jì)劃跑上幾十次的，優(yōu)先選擇DTT,建議變性后分裝保存。二、SDS-PAGE凝膠配制1、配膠前準(zhǔn)備首先強(qiáng)調(diào)一下，一塊好的膠是跑好蛋白的前提，所以這個(gè)環(huán)節(jié)也不容忽視。玻璃板的選擇，一種是1毫米厚度的，另一種是，這個(gè)厚度選擇也是有講究的，如果上樣體積小于10微升，優(yōu)先選1毫米，否則選。原因是什么?答案在轉(zhuǎn)膜部分揭曉。還有分離膠的濃度也要選擇適合的。然后玻璃板和梳子要洗干凈，晾干。裝板，注意厚板和薄板的底部要對(duì)齊，否則會(huì)漏膠。加制膠的各成分前，要觀察液體是否有沉淀，有沉淀的盡量不要用。2、制膠按配方說明依次加入各組分，加完SDS后先簡(jiǎn)單手動(dòng)搖勻幾下，然后迅速加入過硫酸銨和TEMED,搖勻，緊接著就灌膠。然后我習(xí)慣用95%的酒精壓膠，我也用過純水，感覺純水壓沒那么好，由于水的密度較大，會(huì)把分界處的膠壓得膨大。將Transwell小室放入配套培養(yǎng)板中，形成由細(xì)胞可穿透性膜分隔開的兩室系統(tǒng)，將高營(yíng)養(yǎng)液與低營(yíng)養(yǎng)液分隔開。云南乳鼠科研技術(shù)服務(wù)分離

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)這些取樣細(xì)節(jié)，你有注意嗎？湖北組織科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)

    中華文化促進(jìn)會(huì)文化創(chuàng)新與傳播委員會(huì)會(huì)長(zhǎng)朱建聲、西安海棠學(xué)院院長(zhǎng)馮居秦、西安交通大學(xué)人文學(xué)院EDP中心主任、中華風(fēng)采人物媒體社長(zhǎng)王天保、西安市EMBA助企商會(huì)會(huì)長(zhǎng)張西安、陜西省糖尿病協(xié)會(huì)副會(huì)長(zhǎng)張麗、陜西省養(yǎng)生協(xié)會(huì)會(huì)長(zhǎng)李靖、陜西省職業(yè)經(jīng)理人協(xié)會(huì)名譽(yù)會(huì)長(zhǎng)劉志超、西藏鷹山科技集團(tuán)董事長(zhǎng)張沛、西安天歌干細(xì)胞健康管理中心總經(jīng)理楊海軍和團(tuán)隊(duì)及各行各業(yè)企業(yè)界朋友、受益者近200人參與了活動(dòng)。西安天歌干細(xì)胞健康管理有限公司總經(jīng)理楊海軍介紹了成立一年來的工作情況和未來的發(fā)展布局。隨后，天歌干細(xì)胞健康管理中心負(fù)責(zé)人分別同中華文化促進(jìn)會(huì)文化創(chuàng)新與傳播委員會(huì)會(huì)長(zhǎng)朱建聲；西安市（EMBA助企商會(huì)）/西安市EMBA商會(huì)會(huì)長(zhǎng)張西安；鄭州天歌干細(xì)胞健康管理有限公司總經(jīng)理張永紅和上海豪景醫(yī)療器械有限公司總經(jīng)理張建國(guó)進(jìn)行了簽約儀式。主持人同中華風(fēng)采人物媒體社長(zhǎng)、新時(shí)代風(fēng)采人物研究會(huì)會(huì)長(zhǎng)、文化名人收藏大家王天保，中華風(fēng)采人物媒體主編李西紅，西藏鷹山科技集團(tuán)董事長(zhǎng)張沛分別從幾個(gè)話題闡述和討論了大健康產(chǎn)業(yè)的未來前景。為了答謝各界朋友的的支持與厚愛，活動(dòng)舉行了現(xiàn)場(chǎng)抽獎(jiǎng)環(huán)節(jié)，將活動(dòng)掀起了高潮。通過活動(dòng)一方面讓大家和身邊的朋友更關(guān)注健康。湖北組織科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)