收藏查看我的收藏0有用+1已投票0細胞培養(yǎng)編輯鎖定本詞條由“科普中國”科學(xué)百科詞條編寫與應(yīng)用工作項目審核。細胞培養(yǎng)（cellculture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對于整個生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說，細胞培養(yǎng)都是一個必不可少的過程，細胞培養(yǎng)本身就是細胞的大規(guī)?？寺　＜毎囵B(yǎng)技術(shù)可以由一個細胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術(shù)必不可少的環(huán)節(jié)，而且細胞培養(yǎng)本身就是細胞的克隆。細胞培養(yǎng)技術(shù)是細胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù)，通過細胞培養(yǎng)既可以獲得大量細胞，又可以借此研究細胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。[1]中文名細胞培養(yǎng)外文名cellculture別名細胞克隆術(shù)語細胞培養(yǎng)技術(shù)地位生物技術(shù)中基礎(chǔ)的技術(shù)常用培養(yǎng)基無鈣、鎂、離子溶液目錄1分類2環(huán)境及條件?環(huán)境因素?營養(yǎng)條件3設(shè)施器材4一般過程5具體步驟6注意事項細胞培養(yǎng)分類編輯動物細胞培養(yǎng)高速冷凍離心機在所有的細胞離體培養(yǎng)中，困難的是動物細胞培養(yǎng)。細胞形態(tài)：細胞梭形，不規(guī)則，貼壁培養(yǎng)。湖北實驗原代細胞構(gòu)建

    每15min搖晃一次，消化時間根據(jù)組織來定，約1-2h；5.待大部分組織塊消化成透明狀時，用40μm的細胞濾網(wǎng)過濾細胞，收集；6.用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。常見問題解答：Q：為什么我取得原代織，分離的卻不是細胞？A：取材時，我們要熟悉所需組織的類型和部位特征，選擇細胞集中、活力較好的部分。避免結(jié)締等正常組織。Q：若是細胞中混成纖維細胞，如何去除？A：成纖維細胞的去除對于細胞培養(yǎng)十分重要。由于成纖維細胞貼壁速度細胞快，可利用反復(fù)貼壁法使二者分離，進而達到成纖維細胞的目的。Q：為什么離心后，沒有細胞分離出來？A：需要考慮消化酶的因素，由于組織較致密，胰酶無法消化，一般選用膠原酶，如膠原酶Ⅳ。若是組織十分致密可以再結(jié)合機械法，如研磨或者攪拌加速細胞分散。如下表為二者的區(qū)別：膠原酶胰酶來源細菌胰臟消化組織纖維多的硬組織軟組織對細胞影響傷害小長時間有損傷作用力度緩和強注：膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細胞膠原酶，根據(jù)分離的組織類型需選擇合適的膠原酶類型。Q：消化時間如何確定？A：具體的消化酶的量和消化時間可根據(jù)組織類型和多少進行調(diào)整。Q：消化之前為什么用EDTA?A：EDTA是一種非酶消化物，又稱螯合劑，對一些組織。湖南乳鼠原代細胞外包血管疾病發(fā)生和發(fā)展的一個主要因素是由于血管平滑肌細胞轉(zhuǎn)變成為了具有繁殖能力的表型。

    細胞檢測平臺可提供細胞增殖/細胞毒性、細胞凋亡、細胞周期、細胞遷移/細胞侵襲等細胞學(xué)檢測技術(shù)服務(wù)。通過細胞學(xué)檢測可以對目的基因的生理功能及其相互作用進行研究,是基礎(chǔ)科研及藥物研發(fā)中檢測物質(zhì)毒性、評估藥物安全性及有效性、的發(fā)生及增值等的重用手段。分子檢測平臺可提供反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR、定點突變、載體構(gòu)建、種屬鑒定、質(zhì)粒提取等常規(guī)分子生物學(xué)技術(shù)服務(wù)，此外憑借分子平臺專業(yè)團隊多年經(jīng)驗積累，可開展基因編輯技術(shù)(CRSPRCas9)、miRNA靶基因的預(yù)測與驗證、雙熒光素酶報告基因檢測等特色技術(shù)服務(wù)。分子檢測應(yīng)用于科學(xué)研究及醫(yī)療診斷領(lǐng)域，為疾病的研究和診斷提供更準確、更科學(xué)的信息和依據(jù)。為生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的各個領(lǐng)域，提供了一個強有力的技術(shù)平臺。蛋白檢測平臺可提供WB、IHC、IF、IP/CO-IP、ELISA等免疫學(xué)檢測服務(wù)。免疫學(xué)檢測是根據(jù)抗原、抗體反應(yīng)的原理，利用已知的抗原檢測未知的抗體或利用已知的抗體檢測未知的抗原，可以定性、定位和定量地檢測某一特異蛋白。這些方法為科研人員在研究諸如細胞信號通路、生理過程調(diào)控、代謝調(diào)節(jié)等方面提供重要手段。'病毒平臺可提供慢病毒包裝、腺病毒包裝、穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株篩選的技術(shù)服務(wù)。

    7)蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。(8)將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中（37℃，5%CO2，95%空氣）(9)放入培養(yǎng)箱后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。5、細胞培養(yǎng)過程中，多久更換一次培養(yǎng)基？這取決于細胞生長的速度。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基，許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。注意：凍存細胞復(fù)蘇后，在6-16小時內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細胞。6、我能擴增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細胞嗎？這取決于細胞的類型。一些細胞類型像神經(jīng)細胞，神經(jīng)膠質(zhì)細胞和一些生長緩慢的上皮細胞，不推薦擴增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細胞類型像成纖維細胞、星形細胞、腎系膜細胞、星形膠質(zhì)細胞等等，可以擴增培養(yǎng)和再次凍存。然而，需要注意的是再次凍存的過程可能導(dǎo)致細胞生長性能的改變。7、培養(yǎng)瓶中應(yīng)該加入多少體積的培養(yǎng)基？我們推薦的用量為：T-25培養(yǎng)瓶5ml，T-75培養(yǎng)瓶15ml，T-150培養(yǎng)瓶30ml。干細胞的誘導(dǎo)分化一方面是干細胞鑒定的主要方法。

    [1]細胞培養(yǎng)營養(yǎng)條件1．培養(yǎng)基細胞培養(yǎng)基包含細胞生長所需的各種營養(yǎng)物質(zhì)，包括碳水化合物、氨基酸、無機鹽、維生素等。針對不同細胞的營養(yǎng)需求，有多種合成培養(yǎng)基可供選擇，如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。2．其他添加成分在各種合成培養(yǎng)基提供基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)之外，還需根據(jù)不同細胞和不同的培養(yǎng)目的添加其他成分，如血清、因子等。血清提供的是細胞外基質(zhì)、生長因子和轉(zhuǎn)鐵蛋白等重要物質(zhì)，常用的是胎牛血清。要根據(jù)不同的細胞和不同的研究目的決定添加血清的比例。10%～20%的血清能維持細胞較快的生長增殖速度，稱為生長培養(yǎng)液；為維持細胞緩慢生長或不死，添加2%～5%的血清即可，稱為維持培養(yǎng)液。但血清中也存在有害于細胞生長和繁殖的物質(zhì)，如補體、免疫球蛋白和一些生長抑制因子；成分不明確，影響對結(jié)果的分析；不同動物、不同批次的血清活性差別較大，影響培養(yǎng)效果的穩(wěn)定性。谷氨酰胺是細胞生長重要的氮源，在細胞生長代謝過程中起重要作用，但由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定容易降解，4℃下放置7天即可分解約50%，故谷氨酰胺需在使用前添加。為防止污染，培養(yǎng)基中還需添加一定量的常用名稱、濃度及敏感性如下表。為了后續(xù)實驗成功進行，我們對分離培養(yǎng)的細胞做一個細胞鑒定實驗。云南豚鼠原代細胞培養(yǎng)

人臍動脈內(nèi)皮細胞分離自臍帶動脈，一般用于生理學(xué)和藥理學(xué)研究。湖北實驗原代細胞構(gòu)建

    直至內(nèi)箱盒2的滑塊211與滑槽111的開口處齊平為止，簡單方便。需要說明的是，滑槽111的正面及背面可同時存放內(nèi)箱盒2，即每一滑槽111內(nèi)可同時存放兩個內(nèi)箱盒2。所述外箱體1內(nèi)設(shè)有3列中空的矩形槽11，各所述矩形槽11的兩側(cè)分別設(shè)有15層對稱的滑槽111。即，本實用新型總共可存放90個內(nèi)箱盒2。如圖3及圖4所示，進一步的，為方便實驗者存取內(nèi)箱盒2，所述滑槽111的高度大于滑塊212的高度，所述滑塊212的高度大于滑輪211的直徑。本實施例中，滑槽111的高度稍大于滑塊212的高度。如此，當內(nèi)箱盒2的正面已接近收納至滑槽111內(nèi)時，滑塊212與滑槽111之間會產(chǎn)生一個移動的阻力，導(dǎo)致內(nèi)箱盒2無法繼續(xù)順利的滑動，從而提高內(nèi)箱盒2存放的穩(wěn)定性，避免外箱體1受到顛簸，內(nèi)箱盒2就滑脫掉落。如圖5所示，為營造無菌無毒的培養(yǎng)環(huán)境，從而提高細胞培養(yǎng)的存活率，所述內(nèi)箱盒2包括底盒21、紫外燈23及上蓋22。所述紫外燈23設(shè)于底盒21內(nèi)，所述底盒21與上蓋22的一側(cè)通過合頁鉸接，所述底盒21與上蓋22的另一側(cè)通過鎖扣24扣合連接。紫外燈23具有殺菌消毒的作用，在每一內(nèi)箱盒2內(nèi)設(shè)有一紫外燈23，可為細菌培養(yǎng)皿單獨提供一個無菌無毒的培養(yǎng)環(huán)境，提高培養(yǎng)細胞的存活率。而鎖扣24的設(shè)置。湖北實驗原代細胞構(gòu)建