原代細(xì)胞的優(yōu)勢與不足細(xì)胞培養(yǎng)很好的補(bǔ)充了體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的不足，它讓細(xì)胞功能和進(jìn)程的研究更具可操作性。細(xì)胞系的一個(gè)缺點(diǎn)是它們往往與原始的組織有不一樣的遺傳和表型。相比之下，原代細(xì)胞保持了細(xì)胞在體內(nèi)的許多重要標(biāo)志和功能。原代細(xì)胞的生長：雖然原代細(xì)胞有諸多優(yōu)點(diǎn)，但是獲得高純度的原代細(xì)胞是一個(gè)非常艱巨的過程。比起細(xì)胞系，原代細(xì)胞可謂是極其敏感，需要額外添加經(jīng)典培養(yǎng)基所沒有的營養(yǎng)。原代細(xì)胞要在專為每種細(xì)胞定制的特殊培養(yǎng)液中存活和生長。例如內(nèi)皮細(xì)胞與上皮細(xì)胞或神經(jīng)元營養(yǎng)需求就大為不同。因此需要特殊培養(yǎng)基。傳統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)基靠血清提供生長因子、脂類和其他未知成分供細(xì)胞生長。但高血清會(huì)導(dǎo)致原代細(xì)胞分化或助長成纖維細(xì)胞等污染。此外，使用血清還會(huì)顧慮費(fèi)用增高和批次差異等問題。使用低血清或無血清的特殊成分培養(yǎng)基不僅可以避開這些問題，還能更好的促進(jìn)原代細(xì)胞的生長。另外，將原代細(xì)胞接種在生理親和性的基板上可以顯著提高細(xì)胞貼壁率、生長狀態(tài)和純度。基因表達(dá)分析：基因表達(dá)直接影響細(xì)胞功能，基因表達(dá)分析對研究原代細(xì)胞起重要作用。傳統(tǒng)的報(bào)告基因檢測和cDNA芯片方法往往需要轉(zhuǎn)染或大量高質(zhì)量RNA。但是原代細(xì)胞是出了名的難轉(zhuǎn)染。細(xì)胞形態(tài)：細(xì)胞梭形，不規(guī)則，貼壁培養(yǎng)。組織原代細(xì)胞分離

    細(xì)胞之間的促生長作用很小，也很難使細(xì)胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進(jìn)入生存環(huán)境的變化過程。如果接種的細(xì)胞密度過大，會(huì)導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。2）適當(dāng)增大原代培養(yǎng)接種的細(xì)胞密度，給培養(yǎng)的細(xì)胞提供更多的類似于在體內(nèi)時(shí)細(xì)胞之間的相互作用，會(huì)極大提高原代培養(yǎng)的細(xì)胞在體外存活率。待細(xì)胞適應(yīng)體外環(huán)境后進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)再以較低的密度接種和培養(yǎng)。3）盡快使接種的細(xì)胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵?？梢栽诮臃N后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h到5h，待細(xì)胞貼壁后，再補(bǔ)足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。3、懸浮型原代細(xì)胞1）必須保持細(xì)胞的懸浮狀態(tài)?？梢酝ㄟ^增加培養(yǎng)液的黏度來幫助細(xì)胞呈懸浮狀態(tài)，如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液是，以5ml為限度，否則攪拌時(shí)會(huì)產(chǎn)生氣泡對細(xì)胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快，否則即可使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下，可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞換液時(shí)要注意不要吸出細(xì)胞。2）能夠進(jìn)行懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營養(yǎng)成分消耗大，換液時(shí)間隔一般較短。云南原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)名稱：人臍靜脈血管平滑肌細(xì)胞 Human umbilical vein vascular smooth muscle cell 貨號(hào)：PC-H-18103。

    易操作原代細(xì)胞和細(xì)胞系的比較3.原代細(xì)胞的應(yīng)用由于原代細(xì)胞生物學(xué)特性未發(fā)生很大改變，接近和反映體內(nèi)生長特性，因此是：(1)研究生物體細(xì)胞的生長、代謝、繁殖提供有力的工具；(2)更好實(shí)現(xiàn)醫(yī)診治模式，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥的目的。第二部分：原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)技術(shù)原代培養(yǎng)的原理將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶/膠原酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養(yǎng)。主要包括取材——分離——培養(yǎng)等3部分；在原代細(xì)胞應(yīng)用較多的包括：組織（如實(shí)體瘤、皮膚等）、懸浮細(xì)胞的取材等。下面依次介紹：一、組織的取材病人自體的原代細(xì)胞由于更接近臨床患者標(biāo)本，可以更好實(shí)現(xiàn)醫(yī)療的診治模式，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥的目的。所以對病人自體細(xì)胞體外分離與培養(yǎng)十分必要?；具^程如下圖所示：原代細(xì)胞的分離步驟備注：上圖細(xì)胞為肉瘤患者的原代細(xì)胞具體步驟如下：1.在無菌條件下的冰上對新鮮離體的組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；2.加入2mmol的EDTA，搖勻后放置冰上約30-60min；3.離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；4.消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。

    導(dǎo)語原代細(xì)胞培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)，是建立細(xì)胞系的步，其步驟包括取材→分離→培養(yǎng)和維持，給大家?guī)碓?xì)胞培養(yǎng)的一些技巧，希望大家能有所收獲！原代細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用1、為研究生物體細(xì)胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段；2、為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件；3、服務(wù)于臨床實(shí)踐，用于藥物篩選等。原代細(xì)胞培養(yǎng)之取材取材作為原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中的部至關(guān)重要，以下幾種取材技術(shù)，你都用過哪些方法呢？兔髓核原代細(xì)胞培養(yǎng)之分離注意事項(xiàng)1、組織塊培養(yǎng)法1）組織塊接種后的天，在觀察和移動(dòng)的過程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng)，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會(huì)脫落飄起。2）加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來。3）當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長。4）為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。2、貼壁型原代細(xì)胞1)原代培養(yǎng)的分離細(xì)胞在初次接觸體外環(huán)境時(shí)，它們之間會(huì)互相影響，在這些細(xì)胞之間能產(chǎn)生一些促生長的活性物質(zhì)，使細(xì)胞彼此互相促進(jìn)存活和生長。如果接種的細(xì)胞密度過低。多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長。

    是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵?？梢栽诮臃N后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h到5h，待細(xì)胞貼壁后，再補(bǔ)足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。3、懸浮型原代細(xì)胞1）必須保持細(xì)胞的懸浮狀態(tài)?？梢酝ㄟ^增加培養(yǎng)液的黏度來幫助細(xì)胞呈懸浮狀態(tài)，如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液是，以5ml為限度，否則攪拌時(shí)會(huì)產(chǎn)生氣泡對細(xì)胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快，否則即可使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下，可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞換液時(shí)要注意不要吸出細(xì)胞。2）能夠進(jìn)行懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營養(yǎng)成分消耗大，換液時(shí)間隔一般較短。原代細(xì)胞培養(yǎng)問題解答1、原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別？根據(jù)傳統(tǒng)定義，收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞[Freshney,.(1987)..(NewYork,.)].這類細(xì)胞直接從組織分離，生命周期有限，經(jīng)數(shù)次傳代后會(huì)逐漸停止生長。原代細(xì)胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞的生長空間，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的一致性。細(xì)胞系是不斷生長、分化的細(xì)胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細(xì)胞系用于醫(yī)療或科研。但實(shí)際上。轉(zhuǎn)染的目的是產(chǎn)生重組蛋白，或特異性增強(qiáng)或控制轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的基因表達(dá)。黑龍江C57原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室

具有多種原代細(xì)胞，包含人源細(xì)胞、大鼠細(xì)胞、小鼠細(xì)胞。組織原代細(xì)胞分離

    包括臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞、皮膚成纖維細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等各種細(xì)胞的原代培養(yǎng)。本人從2014年研究生畢業(yè)后在一家干細(xì)胞公司從事干細(xì)胞項(xiàng)目研發(fā)工作5年以上，擁有5年以上各種細(xì)胞如臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞、皮膚成纖維細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)經(jīng)驗(yàn)。包括負(fù)責(zé)人脂肪干細(xì)胞、野生型豬和基因敲除豬脂肪干細(xì)胞及軟骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)技術(shù)，并多次為301醫(yī)院提供質(zhì)量合格的脂肪干細(xì)胞、軟骨細(xì)胞；負(fù)責(zé)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的制備，將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞送中國食品藥品檢定研究院進(jìn)行質(zhì)量檢測，并順利獲得中國食品藥品檢定研究院簽發(fā)的關(guān)于細(xì)胞安全性和生物學(xué)效應(yīng)合格的檢定報(bào)告。非常擅長從臍帶組織、脂肪組織、皮膚組織等各種組織中分離培養(yǎng)獲得臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞、皮膚成纖維細(xì)胞等，一般第4-7天可見細(xì)胞爬出，7-14天可見大量細(xì)胞爬出，21天左右可進(jìn)行原代傳代培養(yǎng)，30天內(nèi)可獲得足夠量的細(xì)胞并進(jìn)行凍存。如需要各種細(xì)胞的組織塊分離培養(yǎng)服務(wù)，也歡迎大家和我聯(lián)系，我將竭誠為您服務(wù)。組織原代細(xì)胞分離