如果接種的細胞密度過低，細胞之間的促生長作用很小，也很難使細胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進入生存環(huán)境的變化過程。如果接種的細胞密度過大，會導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。2）適當增大原代培養(yǎng)接種的細胞密度，給培養(yǎng)的細胞提供更多的類似于在體內(nèi)時細胞之間的相互作用，會極大提高原代培養(yǎng)的細胞在體外存活率。待細胞適應(yīng)體外環(huán)境后進行傳代培養(yǎng)時再以較低的密度接種和培養(yǎng)。3）盡快使接種的細胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵。可以在接種后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h到5h，待細胞貼壁后，再補足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。3、懸浮型原代細胞1）必須保持細胞的懸浮狀態(tài)?？梢酝ㄟ^增加培養(yǎng)液的黏度來幫助細胞呈懸浮狀態(tài)，如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液是，以5ml為限度，否則攪拌時會產(chǎn)生氣泡對細胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快，否則即可使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下，可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細胞換液時要注意不要吸出細胞。2）能夠進行懸浮培養(yǎng)的細胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營養(yǎng)成分消耗大。根據(jù)您的需要可以提供經(jīng)濟實惠的多克隆細胞系或者單克隆細胞系。疾病模型原代細胞外包

    展開全部原代2113細胞和傳代細胞培養(yǎng)有含義5261、培養(yǎng)過程、培養(yǎng)結(jié)果和應(yīng)用四個方面4102區(qū)別：16531、含義不同原代培養(yǎng)是直接從生物體獲取組織或的一部分進行培養(yǎng)，也稱初代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)是將培養(yǎng)物放置在體外生長環(huán)境中持續(xù)培養(yǎng)，中途不分割培養(yǎng)物的培養(yǎng)過程。有幾方面含義：原代培養(yǎng)中的代并非細胞的代數(shù)，因為培養(yǎng)過程中細胞經(jīng)多次分裂已經(jīng)產(chǎn)生多代子細胞。傳代培養(yǎng)是指需要將培養(yǎng)物分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)器皿（瓶）內(nèi)，再進行培養(yǎng)的過程。2、培養(yǎng)過程不同原代培養(yǎng)的基本過程包括取材、培養(yǎng)材料的制備、接種、加培養(yǎng)液、置培養(yǎng)條件下培養(yǎng)等步驟，在所有的操作過程中，都必須保持培養(yǎng)物及生長環(huán)境的無菌。傳代培養(yǎng)時要注意無菌操作并防止細胞之間的交叉污染。所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次只進行一種細胞的操作。取出長成單層的原代培養(yǎng)細胞，倒掉瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加入消化液。細胞變圓，相互之間不再連片時將消化液倒掉，加入新鮮培養(yǎng)液，吹打，制成細胞懸液。3、培養(yǎng)結(jié)果不同原代培養(yǎng)細胞會分裂。原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細胞的生長就會出現(xiàn)停滯，大部分細胞衰老死亡。細胞接種后一般幾小時內(nèi)就能貼壁，并開始生長。西藏兔原代細胞分離臍靜脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展。

    盒內(nèi)有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入一80℃冰箱內(nèi)，過夜，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放入液氮，可以保存三個月。凍存液的配制：70%的完全培養(yǎng)基+20%FBS+10%，邊滴邊搖。[5]細胞培養(yǎng)注意事項編輯（1）次開始培養(yǎng)某種細胞時，一定要在，可以得到關(guān)于該細胞的詳細信息，包括需要使用的培養(yǎng)基、血清、添加劑、通常的消化時間、傳代時間等。對于特定的細胞（如原代培養(yǎng)的細胞），需要查閱相關(guān)文獻來獲得更準確的培養(yǎng)方法。（2）進入細胞間開始細胞培養(yǎng)時，必須嚴格按照下列步驟操作：①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經(jīng)消毒并檢測沒有問題，不確定的溶液和耗材請勿使用，除非特殊情況，不要借用別人的溶液。②確定衣服的袖口已經(jīng)卷起或者白大褂的袖口已經(jīng)扎緊。③確定酒精燈內(nèi)的酒精量，需要的話及時進行補充。④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋，實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松。⑤盡量不要直接傾倒溶液，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗，溶液粘在瓶口，請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍（不要接觸到瓶口）后在火焰上簡單燒灼。⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的，必須及時更換。

    原代細胞培養(yǎng)問題解答1、原代細胞與細胞系有什么區(qū)別？根據(jù)傳統(tǒng)定義，自組織收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney,.(1987)..(NewYork,.)].這類細胞直接從組織分離，生命周期有限，經(jīng)數(shù)次傳代后會逐漸停止生長。原代細胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的一致性。細胞系是不斷生長、分化的細胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫(yī)療或科研。但實際上，經(jīng)過長時間、連續(xù)的傳代培養(yǎng)后，細胞系隨著代數(shù)的增加，細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群，除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。2、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？倍增是培養(yǎng)物中細胞總數(shù)的翻倍，通常是指細胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的，是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。3、接收到的凍存細胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快，以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。4、凍存的細胞該如何開始培養(yǎng)？。干細胞的誘導(dǎo)分化一方面是干細胞鑒定的主要方法。

    導(dǎo)語對于大部分科研人員來說，研究中一般用到均是現(xiàn)成的細胞系/株，我們只需要：進行細胞傳代和保種。然而，這些細胞系常常由于體外長期培養(yǎng)，而丟失原有生物學(xué)特性，對藥物處理的反應(yīng)差距越來越大。因此，原代細胞的地位日漸凸顯，Paper中若有了原代細胞的數(shù)據(jù)都會添色不少。然而，就小編親生經(jīng)歷，原代細胞分離著實是個技術(shù)活，結(jié)合自身經(jīng)驗，為大家介紹：組織和正常組織的原代細胞的分離與培養(yǎng)方法。原代細胞的基本知識1.什么是原代細胞培養(yǎng)?原代細胞（Primarycells）：是指直接從機體取出的組織或細胞獲得單個細胞并在體外進行培養(yǎng)的細胞。這里的組織主要指：組織、外周血及胚胎等。原代細胞培養(yǎng)：由于原代細胞生長緩慢，繁殖一定的代數(shù)停止生長（一般10代以內(nèi)）。所以一般認為：培養(yǎng)的原代的第1和傳代到第10代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。2.原代細胞與細胞系（celllines）的區(qū)別原代細胞和細胞系的比較：PrimarycellsCelllines增殖能力較弱強繁殖代數(shù)一般只能傳10代以內(nèi)無限增殖，50代左右遺傳物質(zhì)完整性遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)發(fā)生改變生物特性接近臨床樣本偏離臨床樣本培養(yǎng)容易程度比較復(fù)雜簡單。臍帶是哺乳類連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu)。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈。西藏血液原代細胞實驗室

由于臍帶是分娩過程中的廢棄物，同時從臍帶中分離人臍靜脈平滑肌細胞方法相對成熟。疾病模型原代細胞外包

    視實驗?zāi)康亩ǎ?，?jīng)過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）后接入培養(yǎng)器皿中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。理論上講各種動物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng)，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養(yǎng)，分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng)，組織比正常組織容易培養(yǎng)。取材后應(yīng)立即處理，盡快培養(yǎng)，因故不能馬上培養(yǎng)時，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養(yǎng)液中保存。取組織時應(yīng)嚴格保持無菌，同時也要避免接觸其他的有害物質(zhì)。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌，為減少污染可用素處理。由組織并分離分散細胞的方法可參閱有關(guān)文獻。三、培養(yǎng)將取得的組織細胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個小時后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基。如系細胞培養(yǎng)，一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進行細胞計數(shù)，按要求以一定的量（以每毫升細胞數(shù)表示）接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細胞進入培養(yǎng)器皿后，立即放入培養(yǎng)箱中，使細胞盡早進入生長狀態(tài)。正在培養(yǎng)中的細胞應(yīng)每隔一定時間觀察一次。疾病模型原代細胞外包