一種是用beta巰基乙醇打開(kāi)蛋白質(zhì)分子二硫鍵的,另一種是用DTT(二硫蘇糖醇)。兩者的作用是一樣的,但特點(diǎn)不一樣,前者更容易與氧氣反應(yīng),穩(wěn)定性比后者差,如果在常溫下暴露在空中,前者只能維持24小時(shí)的活性,后者卻可以維持7天左右。所以該如何選擇?如果是蛋白樣品較少,跑幾次就可以用完的樣品,這時(shí)選擇beta巰基乙醇。如果樣品很多,計(jì)劃跑上幾十次的,優(yōu)先選擇DTT,建議變性后分裝保存。二、SDS-PAGE凝膠配制1、配膠前準(zhǔn)備首先強(qiáng)調(diào)一下,一塊好的膠是跑好蛋白的前提,所以這個(gè)環(huán)節(jié)也不容忽視。玻璃板的選擇,一種是1毫米厚度的,另一種是,這個(gè)厚度選擇也是有講究的,如果上樣體積小于10微升,優(yōu)先選1毫米,否則選。原因是什么?答案在轉(zhuǎn)膜部分揭曉。還有分離膠的濃度也要選擇適合的。然后玻璃板和梳子要洗干凈,晾干。裝板,注意厚板和薄板的底部要對(duì)齊,否則會(huì)漏膠。加制膠的各成分前,要觀察液體是否有沉淀,有沉淀的盡量不要用。2、制膠按配方說(shuō)明依次加入各組分,加完SDS后先簡(jiǎn)單手動(dòng)搖勻幾下,然后迅速加入過(guò)硫酸銨和TEMED,搖勻,緊接著就灌膠。然后我習(xí)慣用95%的酒精壓膠,我也用過(guò)純水,感覺(jué)純水壓沒(méi)那么好,由于水的密度較大,會(huì)把分界處的膠壓得膨大。由于卵巢早衰的病因多種多樣,如自身免疫功能異常、遺傳因素、代謝因素、化療、放療及等。北京C57動(dòng)物模型飼養(yǎng)
brain:腦組織;liver:肝臟;retina:視網(wǎng)膜,intestine:腸;muscle:肌肉;heart:心臟;kidney:腎臟;spleen:脾;b:圖1中a的統(tǒng)計(jì)結(jié)果;c:westernblot檢測(cè)gm20541蛋白在不同組織的表達(dá);d:圖1中c的統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖2:gm20541基因敲除小鼠的構(gòu)建路線;圖中sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠;ctr是指野生型;het是指雜合子。圖3:中長(zhǎng)距離pcr鑒定子一代鼠的結(jié)果;圖中:a:擴(kuò)增5’端長(zhǎng)臂使用引物對(duì)gm5’lrf和sa3’r,擴(kuò)增產(chǎn)物為;其中a2,3,6,9,10,b1為陽(yáng)性;b:擴(kuò)增3’端長(zhǎng)臂使用引物對(duì)neof和gm3’lrr,擴(kuò)增產(chǎn)物為。其中:a2,3,6,9,10,b6,9,es1g,es2g為陽(yáng)性雜合子,+/+為野生型對(duì)照。圖4:gm20541基因敲除小鼠的鑒定;a:gm20541基因敲除小鼠的基因型鑒定結(jié)果;b:實(shí)時(shí)定量pcr實(shí)驗(yàn)分析gm20541敲除小鼠視網(wǎng)膜中基因敲除效率,證明gm20541在敲除小鼠視網(wǎng)膜中不再表達(dá);sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠;ctr是指野生型;het是指雜合子。圖5:暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖(electroretinogram,erg)檢測(cè)結(jié)果;圖中:a-c:不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖軌跡圖;d:不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖a波統(tǒng)計(jì)。北京乳鼠動(dòng)物模型建??商峁?zhuān)業(yè)的大鼠小鼠動(dòng)物疾病模型技術(shù),包含心血管系統(tǒng)神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、生殖、泌尿系統(tǒng)、成瘤系統(tǒng)等。
特發(fā)性肺纖維化(IPF)小鼠模型建立【方法】1、BALB/c小鼠麻醉,6-8周齡,體重20~25g,仰臥固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,頸部去毛后酒精消毒,切開(kāi)皮膚,逐層暴露氣管;2、將1mL注射器經(jīng)兩氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端刺入氣管,回抽無(wú)阻力;3、注入博萊霉素(約4~5mg/kg)再向氣管內(nèi)注入~3次,使藥物在肺部分布均勻;4、以大鼠身體長(zhǎng)軸為中心,正反快速旋轉(zhuǎn)鼠板1~2分鐘??p合皮膚,局部聚維酮碘消毒(或用青霉素消毒)防止,室溫保持在24~25℃,待動(dòng)物自然清醒后置籠內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)。肺纖維化模型發(fā)展時(shí)間:2周可見(jiàn)肺系數(shù)(肺重/體重×100%)、羥脯氨酸含量明顯升高。顯微鏡下可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),以淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞為主,并有肺泡壁增厚、成纖維細(xì)胞增生等Ⅱ級(jí)肺泡炎表現(xiàn)。4周可見(jiàn)肺間質(zhì)內(nèi)有大量散在綠染的膠原纖維,肺泡結(jié)構(gòu)破壞,見(jiàn)有許多纖維細(xì)胞等Ⅲ級(jí)肺間質(zhì)纖維化病變。大鼠模型病理組織學(xué)與病理生理學(xué)改變與人類(lèi)肺間質(zhì)纖維化相似。其病變?cè)缙诒憩F(xiàn)為滲出性肺泡炎,炎癥細(xì)胞在病變處聚集增多。晚期為肺間質(zhì)纖維化,間質(zhì)細(xì)胞增生,基質(zhì)膠原聚集取代正常的肺組織結(jié)構(gòu)。【檢測(cè)】組織病理切片HE染色。
D-半乳糖致老年癡呆大鼠模型一、服務(wù)信息1、動(dòng)物模型名稱(chēng):D-半乳糖致老年癡呆大鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬:SD大鼠3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別:雄性4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡:成年鼠5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重:180g-220g6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境:SPF級(jí)二、服務(wù)項(xiàng)目服務(wù)編號(hào)服務(wù)內(nèi)容服務(wù)周期價(jià)錢(qián)DH2009D-半乳糖致老年癡呆大鼠模型8周詢(xún)價(jià)1、實(shí)驗(yàn)方法:D-半乳糖誘導(dǎo)(大鼠按)(注:每天1次,連續(xù)6-7周。)2、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn):①SOD明顯下降、MDA明顯增加;②水迷宮試驗(yàn)顯示學(xué)習(xí)記憶能力下降;③腦組織神經(jīng)元數(shù)目減少。三、交付標(biāo)準(zhǔn):1.提供動(dòng)物模型構(gòu)建過(guò)程中的原始實(shí)驗(yàn)記錄及數(shù)據(jù)圖片。2.根據(jù)要求提供構(gòu)建成功的模型動(dòng)物或相關(guān)組織材料。四、服務(wù)項(xiàng)目說(shuō)明:1、如有特殊要求,請(qǐng)另詢(xún)價(jià)。2、雙方簽訂合同后,收取70%首付后啟動(dòng)實(shí)驗(yàn)。通過(guò)截?cái)啻笫竺娌可窠?jīng)致面癱模型的建立。
或者是還包括為這種過(guò)程、方法、物品或者設(shè)備所固有的要素。在沒(méi)有更多限制的情況下,由語(yǔ)句“包括一個(gè)……”限定的要素,并不排除在包括所述要素的過(guò)程、方法、物品或者設(shè)備中還存在另外的相同要素。以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型的特征和性能作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。實(shí)施例1本實(shí)用新型提供一種高原性人類(lèi)疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng),包括功能設(shè)備集成底座1和設(shè)置在功能設(shè)備集成底座1上的飼養(yǎng)倉(cāng)2,所述飼養(yǎng)倉(cāng)2具有無(wú)極調(diào)控微負(fù)壓裝置、高原低氧環(huán)境模擬裝置、高原光照環(huán)境模擬裝置15、高原溫度環(huán)境模擬裝置16、高原濕度環(huán)境模擬裝置17、動(dòng)物行為學(xué)遠(yuǎn)程觀察單元18,所述飼養(yǎng)倉(cāng)2內(nèi)設(shè)置有若干代謝籠3,飼養(yǎng)倉(cāng)2前后箱體上設(shè)置有觀察窗4和若干操作窗5,飼養(yǎng)倉(cāng)2左右箱體上分別設(shè)置有小物件傳遞窗6和大物件傳遞窗7,所述代謝籠3還包括設(shè)置在代謝籠3上的投料斗8、飲水瓶9和設(shè)置在代謝籠3下方的聚糞斗10、尿液排出口11、糞便排出口12。本實(shí)施例的工作原理:本裝置的各個(gè)功能均通過(guò)設(shè)置在飼養(yǎng)倉(cāng)2上的功能控制面板19控制,本裝置外形采用304不銹鋼,具有良好的氣密性。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物送入飼養(yǎng)倉(cāng)2內(nèi)部后,關(guān)閉小物件傳遞窗6和大物件傳遞窗7,通過(guò)功能控制面板19實(shí)現(xiàn)飼養(yǎng)倉(cāng)2內(nèi)部環(huán)境模擬。人類(lèi)疾病的動(dòng)物模型是指各種醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中建立的具有人類(lèi)疾病模擬表現(xiàn)的動(dòng)物。北京哪里有動(dòng)物模型培養(yǎng)
通過(guò)阿霉素(Adriamycin,ADR)腹腔注射給藥(Adriamycin,ADR)試圖造成小鼠心衰。北京C57動(dòng)物模型飼養(yǎng)
所用儀器為bio-rad的化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)。結(jié)果見(jiàn)圖1中c和d,可以看出,通過(guò)免疫印跡(westernblot)的方法證明了gm20541蛋白在小鼠腦、肝臟、視網(wǎng)膜、心臟、腎臟以及脾中均有表達(dá)。實(shí)施例2本實(shí)施例以小鼠為目標(biāo)動(dòng)物,對(duì)本發(fā)明提供的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的構(gòu)建方法進(jìn)行說(shuō)明,gm20541基因敲除的路線如圖2所示,具體操作如下:基因敲除小鼠獲取步驟:1將與小鼠gm20541基因同源的5’臂、含有報(bào)告基因gfp的表達(dá)框、有neo抗性基因的表達(dá)框、兩端有同向排列l(wèi)oxp位點(diǎn)的第3外顯子和3’端臂克隆到bac載體(圖2)以用于替換欲敲除的gm20541基因第3個(gè)外顯子;2利用dna同源重組技術(shù)將gm20541基因中的第3個(gè)外顯子替換,得到gm20541基因條件性敲除的小鼠胚胎干細(xì)胞;3利用步驟2得到的胚胎干細(xì)胞制備得到含gm20541基因敲除細(xì)胞的嵌合體小鼠(圖2);4將步驟3得到的嵌合體小鼠和野生型小鼠交配繁育,在后代中篩選出gm20541基因敲除的雜合子小鼠(圖2)。鑒定:實(shí)施例2中長(zhǎng)距離pcr鑒定陽(yáng)性子一代鼠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,擴(kuò)增5’端長(zhǎng)臂使用引物對(duì)gm5’lrf和sa3’r,擴(kuò)增產(chǎn)物為。gm5’lrf:5’-ggcaggatcttcacctgttgaccaacatgcct-3’;sa3’r:5’-ccaaccccttcctcctacatagttggcagt-3’。結(jié)果見(jiàn)圖3中a。北京C57動(dòng)物模型飼養(yǎng)
上海研錄生物醫(yī)藥有限公司是一家有著先進(jìn)的發(fā)展理念,先進(jìn)的管理經(jīng)驗(yàn),在發(fā)展過(guò)程中不斷完善自己,要求自己,不斷創(chuàng)新,時(shí)刻準(zhǔn)備著迎接更多挑戰(zhàn)的活力公司,在上海市等地區(qū)的商務(wù)服務(wù)中匯聚了大量的人脈以及**,在業(yè)界也收獲了很多良好的評(píng)價(jià),這些都源自于自身的努力和大家共同進(jìn)步的結(jié)果,這些評(píng)價(jià)對(duì)我們而言是比較好的前進(jìn)動(dòng)力,也促使我們?cè)谝院蟮牡缆飞媳3謯^發(fā)圖強(qiáng)、一往無(wú)前的進(jìn)取創(chuàng)新精神,努力把公司發(fā)展戰(zhàn)略推向一個(gè)新高度,在全體員工共同努力之下,全力拼搏將共同上海研錄生物醫(yī)藥供應(yīng)和您一起攜手走向更好的未來(lái),創(chuàng)造更有價(jià)值的產(chǎn)品,我們將以更好的狀態(tài),更認(rèn)真的態(tài)度,更飽滿的精力去創(chuàng)造,去拼搏,去努力,讓我們一起更好更快的成長(zhǎng)!