無需染色紡錘體觀察技術(shù)已逐步應(yīng)用于臨床輔助生殖技術(shù)中。通過該技術(shù)，醫(yī)生可以在不破壞卵母細(xì)胞活性的情況下，評估其質(zhì)量并選擇合適的卵母細(xì)胞進(jìn)行受精和胚胎移植，從而提高妊娠率和胚胎質(zhì)量。無需對卵母細(xì)胞進(jìn)行固定和染色處理，保留了細(xì)胞的活性與完整性。能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測冷凍過程中紡錘體的形態(tài)變化，評估冷凍效果。能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測冷凍過程中紡錘體的形態(tài)變化，評估冷凍效果。Polscope偏振光顯微成像系統(tǒng)的操作和維護(hù)需要較高的專業(yè)知識和技能。紡錘體的形態(tài)變化復(fù)雜多樣，需要豐富的經(jīng)驗(yàn)和專業(yè)知識進(jìn)行數(shù)據(jù)解讀和結(jié)果分析。紡錘體的微管在細(xì)胞分裂過程中起著橋梁和牽引的作用。美國ICSI紡錘體卵冷凍研究

紡錘體成像技術(shù)的中心在于提高成像的分辨率和速度，以捕捉紡錘體的精細(xì)結(jié)構(gòu)和動(dòng)態(tài)變化。以下是幾種主要的紡錘體成像技術(shù)的技術(shù)原理：結(jié)構(gòu)光照明顯微鏡（SIM）：SIM通過引入已知的空間調(diào)制光場，使樣品發(fā)出具有特定空間頻率的熒光信號。通過采集多個(gè)不同空間頻率的熒光圖像，并利用算法進(jìn)行重建，SIM可以實(shí)現(xiàn)超越傳統(tǒng)熒光顯微鏡分辨率的成像。這種方法不僅提高了成像的分辨率，還保持了較快的成像速度和較好的細(xì)胞活性。受激輻射損耗顯微鏡（STED）：STED利用一束聚焦的激光束（稱為STED束）來抑制樣品中特定區(qū)域的熒光信號。通過精確控制STED束的位置和強(qiáng)度，STED可以實(shí)現(xiàn)超越衍射極限的成像分辨率。這種方法特別適用于觀測紡錘體等復(fù)雜結(jié)構(gòu)中的精細(xì)細(xì)節(jié)。單分子定位顯微鏡（SMLM）：SMLM通過檢測樣品中單個(gè)熒光分子的位置來實(shí)現(xiàn)高分辨率成像。由于熒光分子的隨機(jī)閃爍特性，SMLM可以在時(shí)間域上分離不同分子的熒光信號，從而實(shí)現(xiàn)對單個(gè)分子的精確定位。這種方法不僅提高了成像的分辨率，還提供了對紡錘體中單個(gè)微管和蛋白質(zhì)分子的動(dòng)態(tài)變化的觀測能力。武漢輔助生殖紡錘體Oosight Meta紡錘體在細(xì)胞分裂后期通過收縮力推動(dòng)染色體分離。

Oosight影像分析系統(tǒng)采用液晶偏光成像技術(shù)，無需對卵母細(xì)胞進(jìn)行染色，即可實(shí)時(shí)、清晰、高對比度地進(jìn)行紡錘體結(jié)構(gòu)和透明帶成像，對ICSI、核移植操作、卵母細(xì)胞質(zhì)量評價(jià)等有很好的輔助作用。主要應(yīng)用ICSI：在單精胞漿注射過程中定位初級卵母細(xì)胞，避免卵的破裂損傷，增強(qiáng)胚胎的發(fā)育潛能。卵評估：利用定量的分析數(shù)據(jù)對卵進(jìn)行分級，改善對胚胎的選擇。體外成熟評估：在未成熟卵催化（IVM）過程判斷成熟期，判斷依據(jù)采用的是準(zhǔn)確的識別紡錘體，而非不準(zhǔn)確的極體。質(zhì)量控制：利用定量的分析數(shù)據(jù)對卵進(jìn)行分級，改善對胚胎的選擇。核移植：顯著提高核移植的成功率。由于在核摘除的過程可以清楚的看到核質(zhì)，使得核移植的成功率增加了80%，并減少了線粒體DNA的摘除。卵冷凍研究：對冷凍的初級卵母細(xì)胞進(jìn)行解凍前和解凍后的定量分析，從而判斷卵的發(fā)育力，改善妊娠率。紡錘體研究：檢測胚胎中紡錘體的發(fā)育過程，確定正常和非正常分裂率（只可用于搭配有培養(yǎng)箱的顯微鏡）?？梢詫θ旧w非正常的或非整倍體的胚胎成像，從而選擇***的前體做PGD診斷。透明帶研究：測量卵母細(xì)胞的透明帶；準(zhǔn)確測量紡錘體和透明帶中分子排列方向的差別變化，判斷紡錘體和透明帶是否處于正常狀態(tài)

盡管成熟卵母細(xì)胞紡錘體冷凍保存技術(shù)取得了進(jìn)展，但仍面臨一些挑戰(zhàn)。首先，冷凍損傷仍然是制約其臨床應(yīng)用的主要問題之一。盡管玻璃化冷凍法能夠在一定程度上減少冷凍損傷，但仍無法完全避免。其次，冷凍保存后的卵母細(xì)胞在體外受精和胚胎發(fā)育過程中的表現(xiàn)仍存在不確定性。這可能與冷凍過程中紡錘體和染色體的損傷有關(guān)，也可能與冷凍保護(hù)劑的殘留毒性有關(guān)。此外，法律倫理問題也是卵母細(xì)胞冷凍保存技術(shù)面臨的一大挑戰(zhàn)。不同國家和地區(qū)對卵母細(xì)胞冷凍保存的法律和倫理規(guī)定各不相同，這在一定程度上限制了該技術(shù)的普及和應(yīng)用。紡錘體的中心體在細(xì)胞分裂前會(huì)復(fù)制并分離到細(xì)胞兩極。

紡錘體是如何形成的(1)紡錘體是動(dòng)植物細(xì)胞分裂期形成的與染色體正常分離直接相關(guān)的分裂器，紡錘體的裝配在有絲分裂的前期完成。動(dòng)物細(xì)胞紡錘體由星體微管、極間微管、動(dòng)粒微管及其結(jié)合蛋白構(gòu)成，因含有星體微管故稱有星紡錘體。無中心體的動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞也能形成紡錘體，因不含有星體微管而稱之為無星紡錘體。微管是由α、β微管蛋白異源二聚體及少量微管結(jié)合蛋白聚合而成的亞穩(wěn)定動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)。動(dòng)物細(xì)胞的中心體由一對相互垂直的圓筒狀中心粒及中心體基質(zhì)構(gòu)成。它是紡錘體微管向外生長的**，又稱微管組織中心。在有絲分裂前間期的S期初期，中心體開始復(fù)制倍增，在G2期結(jié)束時(shí)完成。在細(xì)胞分裂期前期，間期復(fù)制倍增的兩個(gè)中心體分離，每一個(gè)中心體形成放射狀排列的微管，稱為星體，每個(gè)中心體是它自身星體的**。在有絲分裂細(xì)胞周期的分裂期，微管通過持續(xù)增加和丟失組成微管的微管蛋白亞基來實(shí)現(xiàn)微管的聚合和解聚，微管始終處于生長和縮短的更替中。在分裂前期，紡錘體微管由游離的微管蛋白組裝而成，介導(dǎo)染色體的運(yùn)動(dòng)；分裂末期，紡錘體微管解聚，又組裝形成細(xì)胞質(zhì)微管網(wǎng)絡(luò)。紡錘體微管包括動(dòng)粒微管、極間微管和星體微管.紡錘體在細(xì)胞分裂中的精確調(diào)控是生物體發(fā)育的基礎(chǔ)。北京雙折射性紡錘體加熱臺

紡錘體的研究有助于揭示細(xì)胞分裂過程中的錯(cuò)誤修復(fù)機(jī)制。美國ICSI紡錘體卵冷凍研究

紡錘體觀測儀在補(bǔ)救ICSI中的應(yīng)用我們知道，成熟的卵母細(xì)胞排出***極體。IVF加入精子后，精子會(huì)穿透層層障礙**終進(jìn)入卵子，隨著時(shí)間的推移，卵子的紡錘體會(huì)將染色單體拉向兩極，進(jìn)而排出第二極體，再往后大約加精后9-16小時(shí)，雌雄原核會(huì)出現(xiàn)，而原核的出現(xiàn)才是受精的標(biāo)志。但是對于那些沒有受精的卵子，到了原核出現(xiàn)的時(shí)間窗，發(fā)現(xiàn)沒有受精時(shí)再去補(bǔ)救ICSI，往往錯(cuò)過了卵子的比較好受精時(shí)間，因?yàn)闆]有受精的卵子會(huì)在體外老化，即使受精，胚胎的發(fā)育潛能也很低。所以，我們在加精后的4-6小時(shí)，通過觀察第二極體的排出來初步判斷是否受精，**的增加了那些受精障礙患者的受精率，也避免了卵子的老化。當(dāng)然，偶爾也會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤補(bǔ)救。文獻(xiàn)報(bào)道對IVF受精后的未排出第二極體的卵母細(xì)胞進(jìn)行ICSI補(bǔ)救，實(shí)驗(yàn)組用紡錘體觀測儀觀察并統(tǒng)計(jì)紡錘體的數(shù)目，82.7%含有一個(gè)紡錘體，17.3%含有兩個(gè)紡錘體，并對含有一個(gè)紡錘體的卵母細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)救ICSI；而對照組并未用紡錘體觀測儀觀察紡錘體，只對未排出第二極體的卵母細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)救ICSI。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，使用紡錘體觀測儀觀察紡錘體的數(shù)目能顯著提高正常受精率，降低多原核受精比率。美國ICSI紡錘體卵冷凍研究