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來源: 發(fā)布時間:2022-04-08

利用免疫磁珠法分選并鑒定人前列腺*類干細胞.方法利用免疫磁珠法從人前列腺*細胞株P(guān)C3中分選CD133+/CD44+細胞,通過免疫組化,流式細胞術(shù),CCK8,平板克隆形成實驗及裸鼠成瘤實驗鑒定其表面標志物表達情況及**干細胞特性.結(jié)果經(jīng)免疫磁珠法分選所得CD133+/CD44+細胞比例為0.50%;免疫組化及流式顯示其CD44/CD133/整合素α2β1均高表達;其細胞增殖和克隆形成率高于PC3細胞;以低密度注射時,其裸鼠體內(nèi)成瘤率明顯高于PC3細胞.結(jié)論利用免疫磁珠法可從人前列腺*細胞株P(guān)C3中高效的分選出具有**干細胞生物學特性的前列腺*類干細胞.您喜歡免疫磁珠的這些特點嗎?安徽anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠銷售

常見問題及對策5:磁珠在使用過程中出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象?磁珠在使用時如果出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象一般較難振蕩打散,容易導致分布不均,出現(xiàn)該問題的原因是磁珠在磁場中放置太久而使磁珠牢固的結(jié)合在一起。用超聲波水浴處理2min即可打散磁珠使其重新分散,但應(yīng)注意超聲處理也會使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落,所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。緩沖液匯總Co-IP&CHIP磁珠緩沖液匯總:細胞裂解液:正常RIPA細胞裂解緩沖液(一般是公司購買)抗體磁珠結(jié)合buffer:PBST(1*PBS+1%TritonX-100)Washingbuffer:PBST(1*PBS+1%TritonX-100)抗原與抗體/磁珠復合物bindingbuffer:可以用RIPA細胞裂解緩沖液代替Washingbuffer:PBST(1*PBS+1%TritonX-100)6、Elutionbuffer:(1)變性洗脫緩沖液,直接加入1*蛋白loadingbuffer,98oC5min后棄去磁珠后,收集上清液檢測。(2)非變性洗脫緩沖液:Elutionbuffer:0.1M-0.2MGlycine,0.1%-0.5%Triton100orTween20,pH2.5-3.1。安徽anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠銷售您知道上海普平生物科技有限公司的免疫磁珠系列都有哪些嗎?

利用免疫磁珠從SD大鼠坐骨神經(jīng)分離培養(yǎng)獲得大量,高純度雪旺細胞的方法.[方法]選用4-7dSD大鼠,無菌條件下取雙側(cè)坐骨神經(jīng),解剖鏡下剝離去除神經(jīng)外膜,獲得神經(jīng)束,將神經(jīng)束剪碎至1mm3大小.采用雙酶2次消化法消化,胎牛血清中止消化后,離心并加入DF12培養(yǎng)液培養(yǎng).7d后應(yīng)用免疫磁珠法對細胞進行純化培養(yǎng),培養(yǎng)2d后進行傳代接種.培養(yǎng)過程中對細胞進行形態(tài)學觀察,計數(shù)及活力測定;MTY法繪制細胞生長曲線,采用免疫細胞化學熒光染色對細胞進行鑒定并且計算所得細胞純度.[結(jié)果]分離培養(yǎng)所得細胞即為雪旺細胞;采用免疫磁珠法能對培養(yǎng)所得雪旺細胞進行純化.純化后雪旺細胞活力為96%±0.5%,純度98%±1.1%,培養(yǎng)2d后就可以傳代.[結(jié)論]免疫磁珠法可以用于雪旺細胞的純化培養(yǎng),所得雪旺細胞純度高,活力強,能滿足組織工程人工神經(jīng)的需要.

免疫共沉淀(COIP)實驗過程(1)轉(zhuǎn)染后24-48h可收獲細胞,加入適量細胞裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑),冰上裂解30min,細胞裂解液于4°C,最大轉(zhuǎn)速離心30min后取上清;(2)取少量裂解液以備Westernblot分析,剩余裂解液加1μg相應(yīng)的抗體加入到細胞裂解液,4°C緩慢搖晃孵育過夜;(3)取10μlproteinA瓊脂糖珠,用適量裂解緩沖液洗3次,每次3,000rpm離心3min;(4)將預處理過的10μlproteinA瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h,使抗體與proteinA瓊脂糖珠耦聯(lián);(5)免疫沉淀反應(yīng)后,在4°C以3,000rpm速度離心3min,將瓊脂糖珠離心至管底;將上清小心吸去,瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3-4次;***加入15μl的2×SDS上樣緩沖液,沸水煮5分鐘;(6)SDS-PAGE,Westernblotting或質(zhì)譜儀分析。注意的問題:(1)細胞裂解采用溫和的裂解條件,不能破壞細胞內(nèi)存在的所有蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,多采用非離子變性劑(NP40或TritonX-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的,通過經(jīng)驗確定。不能用高濃度的變性劑(0.2%SDS),細胞裂解液中要加各種酶抑制劑,如商品化的cocktailer。(2)使用明確的抗體,可以將幾種抗體共同使用。(3)使用對照抗體:上海普平生物科技有限公司銷售的免疫磁珠質(zhì)量怎么樣?

實驗優(yōu)化建立基于免疫磁分離技術(shù)對金黃色葡萄球菌的快速分離方法,為后續(xù)快速檢測提供基礎(chǔ).利用金黃色葡萄球菌多抗制備的免疫磁珠對其捕獲.結(jié)合平板菌落計數(shù),考察包被磁珠時多抗加入量,免疫磁珠加入量及捕獲時間等因素對捕獲效率的影響.在單因素實驗基礎(chǔ)上進行正交實驗,并對該方法的靈敏度,特異性及其在食品中的應(yīng)用效果初步探索.結(jié)果表明,比較好捕獲條件為抗體加入量30μL,免疫磁珠加入量80μL,捕獲時間45min,在此條件下捕獲效率均超過30%,該方法捕獲限可達到101CFU/mL,特異性良好,并初步用于羊肉卷洗水中金黃色葡萄球菌的快速分離,捕獲時間小于1h.免疫磁分離作為一種快速的分離篩選方法,可用于食源性金黃色葡萄球菌的快速分離.免疫磁珠的多種系列總有一款是您滿意。上海蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠銷售

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免疫磁性細胞分選系統(tǒng)分離純化骨髓衍生肝干細胞亞群c-Kit^+lin^-。方法:實驗于2006—07/08在南方醫(yī)科大學實驗動物中心完成。6~8周齡的SPF級純系BALB,C雄性小鼠10只,體質(zhì)量18~20g。收集小鼠股骨骨髓細胞,利用免疫磁性細胞分選系統(tǒng),通過兩步法分選純化c-Kit^+lin^-:將獲取的lin^-細胞懸液8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按80μL/10^7加入Buffer重懸細胞。按20μL/10^7加生物素抗體磁珠,混勻,4℃冰箱孵育15min,按1 mL/10^7加入Buffer洗細胞1次,8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按500μL/10^8加入Buffer重懸細胞。Buffer 500μL潤MS柱,懸液過柱后,Buffer 500μL/次洗柱3次,柱子脫離磁場,加1mL Buffer,用配套柱塞推出柱中的c-Kit^+lin^-細胞,收集到c-kit^+lin-細胞,細胞計數(shù)。取2.0x108個細胞分成10等份,流式細胞儀分析c-Kit^+lin^-細胞純度,計算回收率,評估純化效率,苔盼蘭染色檢測純化前后的細胞活力。計算活細胞的百分率。細胞純度和細胞回收率的計算:細胞純度:分離產(chǎn)物中的陽性細胞數(shù),分離細胞的總細胞數(shù)×100%,細胞回收率:分離產(chǎn)物中的陽性細胞數(shù),起始標本陽性細胞總數(shù)×100%。安徽anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠銷售

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