Laemmli 加樣緩沖液(2×)是一種以溴酚藍為染料的 2 倍濃縮的蛋白上樣緩沖液，主要 由 2-ME、SDS、溴酚藍、Laemmli 分層緩沖液等組成，可用于不連續(xù)蛋白電泳的上樣。 組成： 編號 名稱 PE0005 5ml Storage Laemmli 加樣緩沖液(2×) 使用說明書 4℃ 1份 操作步驟(光供參考)： 1、 取適量的蛋白樣品和 Laemmli 加樣緩沖液(2×)等量混合，充分混勻。 2、 直接上樣到 SDS-PAGE 膠加樣孔內(nèi)即可。 3、 通常電泳至藍色染料到達 PAGE 膠的底部附近即可停止。 注意事項： 1、 Leagene Laemmli 加樣緩沖液(2×)中含少量β-巰基乙醇，有輕微刺激性氣味。 2、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 有效期： 12 個月有效。亦可室溫短期保存。固體試劑的取用:直接傾倒時瓶口必須緊挨試管口，試管45度，并且緩緩地倒。痰消化液(胰酶消化法）
篩選：篩選之前:由于每種細胞對G418的敏感性不同，而且不同的廠家生產(chǎn)的相同濃度的G418的活性不盡相同，所以在篩選之前，一定要確定G418的適合篩選濃度。具體如下：將細胞稀釋到1000個細胞/mL，在100ug/mL~1mg/mL的G418濃度范圍內(nèi)進行篩選，選擇出在10~14天內(nèi)使細胞全部死亡的低G418濃度來進行下一步的篩選試驗。由于每種細胞對G418的敏感性不同，一般變動在100ug/ml～1000ug/ml范圍。而且不同的廠家生產(chǎn)的相同濃度的G418的活性不盡相同，所以在篩選之前，一定要確定細胞對這一批G418的適合篩選濃度。盡管如此，特性明確的細胞系G418的適合用量還是穩(wěn)定的?！斗肿涌寺 方o出了幾個常用細胞系所需G418的適合用量。痰消化液(胰酶消化法）BMC原代分離步驟：較上面是血漿，血漿層和淋巴細胞分離液之間是淋巴細胞層呈白膜狀。
丁胺卡那霉素給藥說明：1.患者應(yīng)給予足夠的水分，以減少腎小管損害。2.燒傷患者中本品的半衰期較短（1—1.5小時），因此可能需用5—75mg/kg，每6小時一次。3.長期用藥可能導致耐藥菌過度生長。4.配制靜脈用藥時，每500mg加入氯化鈉注射液，5%葡萄糖注射液或其他滅菌稀釋液100—200ml，上述溶液用于成人病例應(yīng)在30一60分鐘內(nèi)，嬰兒患者于1一2小時內(nèi)緩慢輸入，并相應(yīng)減少稀釋液量。本品不可直接靜脈推注，以免產(chǎn)生神經(jīng)肌肉阻滯和呼吸克制作用。
潮霉素 B使用方法：一、 儲存液的配制（50mg/ml）稱取1 g 潮霉素B（CH6362）用PBS（0.01 M）溶液或去離子水溶解，定容20ml。0.22μm濾器過濾除菌，分裝于無菌凍存管，2-8℃冷藏，1年內(nèi)穩(wěn)定?；蛑苯舆x購潮霉素B溶液（50mg/ml，CH6361）二、 工作濃度的篩選：潮霉素B用來篩選的工作濃度需要根據(jù)細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于開始次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定較佳篩選濃度。一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；菌類300-1000μg/mL。固體試劑的取用:取用固體藥品時藥匙必須是干凈的。
兩性霉素B溶液（10mg/ml）：注意事項：兩性霉素B作用原理在于其與菌類細胞膜上的Ergosterol結(jié)合導致細胞膜通透性發(fā)生變化，使菌類細胞內(nèi)鉀離子、氨基酸通透到到膜外，破壞菌類正常代謝，進而使菌類細胞死亡。儲存條件：4℃，避光，12個月。兩性霉素B又稱廬山霉素，是從鏈霉菌(Streptomycesnodosus)的培養(yǎng)液中分離而得的一種多烯類克菌類，其抑菌機制是能與菌類細胞膜上的麥角甾醇結(jié)合，導致細胞膜受損，通透性提高，細胞內(nèi)物質(zhì)外漏，破壞正常代謝而起抑菌作用。細菌因其細胞膜上不含麥角甾醇成分，故無效。兩性霉素B克菌類譜廣，幾乎對絕大部分菌類均有效，耐藥菌株少見，高濃度時呈殺菌作用。兩性霉素B溶液在室溫不穩(wěn)定，易被光、熱和酸破壞，在pH6.0～7.5下克菌作用很好。丁胺卡那霉素給藥說明：患者應(yīng)給予足夠的水分，以減少腎小管損害。痰消化液(胰酶消化法）
科研實驗中試劑取用應(yīng)注意事項：視線與量筒內(nèi)液體的凹液面的低處保持水平。痰消化液(胰酶消化法）
殺滅曲線的建立：通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線），確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的較低濃度，從而篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株。建立殺滅曲線至少選擇5個濃度。1、按照20-25%的細胞密度將未轉(zhuǎn)化的細胞鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2過夜培養(yǎng)（需要更高密度，可增加接種量）。2、根據(jù)細胞類型，設(shè)定合適的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。3、第2天換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基，每個濃度做三個平行孔。4、接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。5、按照每2天進行活細胞計數(shù)，來確定殺滅未轉(zhuǎn)染細胞的恰當濃度。通常7-10天內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的較低濃度為篩選用的工作濃度。痰消化液(胰酶消化法）