液體培養(yǎng)基接種向肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中接種少量菌體時,其操作步驟基本與斜面接種時相同,不同之處是挑取菌體的接種環(huán)放入液體培養(yǎng)基后,應在液體表面處的管內(nèi)壁上輕輕磨擦,使菌體從環(huán)上脫落,混進液體培養(yǎng)基,塞好試管塞后,搖動液體,使菌體在液體中分布均勻,或用試管振蕩器混勻。向液體培養(yǎng)基中接種量大或要求定量接種時,可將無菌水或液體培養(yǎng)基注入菌種試管,用接種環(huán)將菌苔刮下,再將菌種懸液以無菌吸管定量吸出加入,或直接倒入液體培養(yǎng)基。如果菌種為液體培養(yǎng)物,則可用無菌吸管定量吸出加入或直接倒入液體培養(yǎng)基。整個接種過程都要求無菌操作。PH電極的保護液為了測量時會更加精確。免疫染色封閉液
檢測試劑盒檢測原理:檢測試劑盒為雙抗體夾心法檢測抗原RBD蛋白,酶標板采用高親和力抗RBD蛋白抗體作為包被物,檢測時酶標板孔加入待檢樣品或標準品(哺乳動物重組表達RBD蛋白),再加入生物素化抗RBD蛋白抗體,反應后加入鏈霉親和素HRP,后加入單組份TMB底物液。 如果待檢樣品中含有RBD蛋白,TMB底物液在HRP催化下顯色,加入終止液終止顯色后,在酶標儀OD450/OD630讀取吸光值,吸光值大小與待檢測樣品中RBD蛋白濃度呈正相關,根據(jù)標準品濃度/吸光值繪制的標準曲線,可計算出待檢樣品中RBD蛋白含量。Ficoll 400裂解液(50% w/v)pH緩沖溶液有何用途:檢測pH電極的性能。
主要試劑配制:(1)PBS:PBS粉劑每袋加ddH2O定容至1000mL,調(diào)pH7.2,高壓滅菌,4℃保存?zhèn)溆?。?)RPIM-1640培養(yǎng)基:臨用前根據(jù)需要加15%胎牛血清,較后按1%體積分數(shù)加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素),使青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100 U/mL和100 U/mL,置于4℃冰箱保存。(3)臺盼藍染液:稱取4g臺盼藍,于研缽中用少量雙蒸水研磨,加雙蒸水至100mL,1500rpm離心15min,吸取上層液,即為4%水溶液。用前,用1.8%氯化鈉溶液稀釋1倍,即為2%臺盼藍染液。
檢測試劑盒操作注意事項:實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。所有液體組分使用前充分搖勻。加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的。加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻檢測試劑盒里的各種成份及樣品。實驗室分裝時,固體只標明試劑名稱,液體還須注名明濃度。
檢測試劑盒用途:運用定性夾心免疫檢測技術,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是我國型HEV毒株主要氨基酸序列中抗原性很強的肽段,別離來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品參與孔中并孵育,如果其間存在HEV IgM抗體,這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結(jié)合,并固定在上面,洗板除掉其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后參與羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結(jié)合物,經(jīng)第二次孵育后,酶結(jié)合物就會與*次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合,洗板除掉未結(jié)合的酶結(jié)合物,參與TMB底物溶液,在第三次孵育時會發(fā)作酶-底物反響,只要那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所構(gòu)成的復合物的孔才會發(fā)作顏色改變,參與硫酸溶液停止酶和底物間的反響,并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體檢測試劑盒的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性??蒲袑嶒炛性噭┤∮脩⒁馐马棧喝∮靡欢康囊后w—使用量筒。甲基橙-酸性靛藍指示劑
ELISA檢測試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎病毒抗體ELISA檢測。免疫染色封閉液
用pH計測定配制好的鹽溶液的pH值,使其在6.4~7.0之間。一般鹽霧標準中要求試驗過程中的鹽霧收集液pH值在6.5~7.2之間。當pH值不在上述范圍時,應用氫氧化鈉(NaOH)或者冰乙酸(CH3COOH)進行調(diào)節(jié)。氫氧化鈉可以使pH值升高,冰乙酸使pH值降低。通常只需要加入少量的即可調(diào)節(jié)pH值。在氯化鈉溶液中加入少量冰乙酸,攪拌均勻,并用pH計測量溶液的pH值,直至其為3.0-3.1之間,試驗過程中收集液的PH值應在3.1-3.3之間。配制好乙酸鹽霧溶液后,加入氯化銅,其濃度為0.26g/L±0.02g/L(即0.205g/L±0.015g/L無水氯化銅)。調(diào)節(jié)溶液的pH值,直至其為3.0-3.1之間,試驗過程中收集液的PH值應在3.0-3.1之間。免疫染色封閉液