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采用酶法提取膠原蛋白時(shí),必須嚴(yán)格控制提取條件:首先,酶作用時(shí)間必須適當(dāng)。如果時(shí)間過(guò)短,膠原蛋白就不能充分釋放到提取液中,影響提取率;如果酶作用時(shí)間過(guò)長(zhǎng),膠原蛋白會(huì)水解過(guò)度,產(chǎn)生過(guò)多的苦味小分子低聚肽,不僅會(huì)增加分離純化的難度,也會(huì)影響膠原蛋白的功能特性和生物活性。其次,酶解溫度要適宜。溫度過(guò)低,酶的作用效果不明顯;溫度過(guò)高會(huì)引起酶的失活和膠原蛋白的變性。據(jù)報(bào)道,當(dāng)介質(zhì)pH略低于中性時(shí),膠原蛋白的變性溫度為40~41℃,當(dāng)介質(zhì)pH為酸性時(shí),膠原蛋白的變性溫度為38~39℃,而且魚(yú)皮膠原蛋白的變性溫度要比豬皮膠原蛋白的變性溫度低7~12℃。所以,如果要使提取的膠原蛋白具有良好的生物活性,在提取過(guò)程中應(yīng)使提取溫度低于變性溫度。第三,需選用適當(dāng)?shù)拿?。一般從陸生哺乳?dòng)物組織中提取膠原蛋白時(shí),采用胃蛋白酶在其較適作用溫度下進(jìn)行提取是合理的,但對(duì)于魚(yú)類(lèi)等水生動(dòng)物,由于其膠原蛋白的變性溫度比陸生哺乳動(dòng)物低,因此許多蛋白酶便不適用,如果在這些酶的較適作用溫度下提取可能會(huì)破壞膠原蛋白的某些功能特性和生物活性。采用酶法提取膠原蛋白及其多肽的研究主要是從動(dòng)物皮及其加工副產(chǎn)物中。 皮膚的光澤取決于含水量,膠原三肽良好的保水能力使皮膚水潤(rùn)亮澤,散發(fā)健康的光彩。吉林深海鱈魚(yú)膠原蛋白液體飲品
免疫學(xué)分析和研究結(jié)果表明,使用膠原加完全弗氏佐劑,能對(duì)膠原產(chǎn)生多克隆和單克隆抗體。由T細(xì)胞啟動(dòng)的對(duì)膠原蛋白免疫反應(yīng)的證據(jù)是,位于重要組織相容性(H-2)部位上ⅠA或ⅠB亞區(qū)的免疫反應(yīng)基因已被鑒定。膠原蛋白免疫原性的臨床評(píng)價(jià)通常是皮膚過(guò)敏性測(cè)試(細(xì)胞免疫指數(shù),遲發(fā)性Ⅳ型反應(yīng))和由反應(yīng)型抗體的存在(體液免疫指數(shù))來(lái)確定的。實(shí)踐證明,在患者身上進(jìn)行這兩種評(píng)價(jià)是合理的。在治好前,用過(guò)敏劑量的植入性膠原對(duì)患者進(jìn)行皮試,大約3%有潛在的反應(yīng),反復(fù)多次處理的患者,大約1%~2%會(huì)產(chǎn)生遲發(fā)性過(guò)敏性的臨床病狀。典型的癥狀包括局部水腫和紅斑反應(yīng),有的還伴有硬化和瘙癢,持續(xù)時(shí)間4~6個(gè)月,個(gè)別甚至可達(dá)1年以上。重慶口服膠原蛋白肽原液采用酶法提取膠原蛋白及其多肽的研究主要是從動(dòng)物皮及其加工副產(chǎn)物中。
膠原單獨(dú)使用,物理機(jī)械性能差(這幾乎是天然材料共有的弱點(diǎn)),性能單一,且因有親水性強(qiáng),在體內(nèi)易被膠原酶降解等不可避免的弱點(diǎn)限制了它的應(yīng)用。但如將膠原與其它物理、化學(xué)性質(zhì)不同的合成或天然高分子共混,組成一種多相固體材料,在性能上膠原與其它高分子互相補(bǔ)充,膠原基“復(fù)合材料”的概念由此產(chǎn)生。已見(jiàn)報(bào)道的與膠原共混的合成高分子有不可生物降解的聚甲基烯酸酯及丁烯酸酯、聚氨酯、聚酰胺和可生物降解的聚乙烯醇、聚乳酸、聚谷氨酸、聚乙醇酸等,20世紀(jì)80~90年代初較有代表性的是聚甲基丙烯酸羥乙酯(PHEMA)和聚乙烯醇與膠原共混,其報(bào)道集中于復(fù)合方法、復(fù)合機(jī)理、理化及生物學(xué)性能、材料表面和整體結(jié)構(gòu)、表面修飾的方法和機(jī)理以及水凝膠的溶脹擴(kuò)散等,尤其是水凝膠制備、作軟組織替代、藥物緩釋等。后來(lái)利用可生物降解的聚乳酸、聚乙醇酸、聚酸酐、聚谷氨酸、聚亞乙基四乙酸等與膠原共混改性制備可吸收外科縫線(xiàn)、組織工程支架材料(如組織引導(dǎo)再生材料)的相關(guān)研究相對(duì)增多。不過(guò)合成高分子與膠原蛋白共混復(fù)合一些問(wèn)題,如尼龍等不降解高分子材料不能進(jìn)行生理代謝,與膠原蛋白復(fù)合后只能用做皮膚的外層敷料不能長(zhǎng)久代替皮膚,而聚谷氨酸等可生物降解材料。
IV型膠原蛋白非常細(xì)小而且呈線(xiàn)性分布在組織內(nèi)部,是連接表皮和真皮的主要要素。Ⅴ型膠原的肽鏈由2條α1鏈和1條α2鏈或由3條α1鏈組成,存在3種組裝形式:[α1(Ⅴ)]3、[α1(Ⅴ)]2α2(Ⅴ)和α1(Ⅴ)、α2(Ⅴ)、α3(Ⅴ),其中以[α1(Ⅴ)]2α2(Ⅴ)為主。Ⅴ型膠原分布在細(xì)胞周?chē)约阿裥湍z原的周?chē)赡茉诨ず徒Y(jié)締組織之間起著橋梁作用,已經(jīng)從數(shù)種魚(yú)類(lèi)肌肉中分離出來(lái)。XV型膠原蛋白分布較廣而且多分布在血管、神經(jīng)組織的外面地帶,而且其與角化細(xì)胞**黑素細(xì)胞分子發(fā)生有關(guān)。[33-36]膠原、明膠和水解膠原蛋白的電泳分析[37]Ⅺ型膠原是異三聚體,其組成為α1(Ⅺ)α2(Ⅺ)α3(Ⅺ),Ⅺ型膠原是軟骨的微量成分,在軟骨膠原纖維的形成和軟骨基質(zhì)的組成中起著重要作用,且常與Ⅱ型膠原共存。陸生生物的軟骨組織較水生生物含量高的多,所以Ⅱ型膠原的研究的對(duì)象大多是陸生生物,雖然在1984年已經(jīng)從鯊魚(yú)的軟骨中分離出來(lái)Ⅱ型膠原,但是從水產(chǎn)動(dòng)物提?、蛐湍z原的研究并不多。 作用營(yíng)養(yǎng)性、修復(fù)性、保濕性、親和性。
相對(duì)于較大分子膠原蛋白而言,膠原三肽更能有效的服務(wù)于人類(lèi)的健康與美麗。膠原三肽主要具有以下功能:滋養(yǎng):膠原三肽對(duì)皮膚的滲透性較膠原蛋白更強(qiáng),它可透過(guò)角質(zhì)層與皮膚上皮細(xì)胞結(jié)合,參與和改善皮膚細(xì)胞的代謝,使皮膚中的膠原蛋白活性加強(qiáng),保持角質(zhì)層水分及纖維結(jié)構(gòu)的完整性,改善皮膚細(xì)胞生存環(huán)境和促進(jìn)皮膚組織的新陳代謝,增強(qiáng)血液循環(huán),達(dá)到滋潤(rùn)皮膚的目的。亮膚:皮膚的光澤取決于含水量,膠原三肽良好的保水能力使皮膚水潤(rùn)亮澤,散發(fā)健康的光彩。緊膚:當(dāng)膠原三肽被皮膚吸收后,填充在皮膚真皮之間,增加皮膚緊密度,產(chǎn)生皮膚張力,縮小毛孔,使皮膚緊繃而富有彈性!防皺:真皮中含有豐滿(mǎn)的膠原蛋白層,而補(bǔ)充膠原三肽,能更有效的將皮膚細(xì)胞撐起,結(jié)合保濕和抑制皺紋的作用,共同達(dá)到舒展粗紋,淡化細(xì)紋的功效! 右手螺旋形式纏繞成“草繩狀”三股螺旋結(jié)構(gòu),使膠原具有很高的拉伸強(qiáng)度。黑龍江大豆膠原蛋白肽原液
采用不同濃度的氯化鈉對(duì)提取的膠原蛋白進(jìn)行鹽析處理,可以沉淀出不同類(lèi)型的膠原蛋白。吉林深海鱈魚(yú)膠原蛋白液體飲品
在實(shí)際提取過(guò)程中,不同提取方法之間往往相互結(jié)合,可以得到較好的提取效果。采用超高壓處理系統(tǒng)對(duì)原料給予高壓處理一段時(shí)間,使其組織結(jié)構(gòu)和膠原蛋白的三股螺旋結(jié)構(gòu)發(fā)生松弛、變性,便于分離提取。熱水提取法是將原料經(jīng)過(guò)除雜蛋白等前處理之后,在一定條件下直接用熱水浸提已經(jīng)變性了的膠原蛋白或膠原蛋白水解物,使用的溫度有100℃沸水浴、60-70℃、40-45℃。膠原蛋白的提取一般有三種方法:一是高壓輔助的物理方法;二是用溶劑預(yù)處理結(jié)合低溫或熱水抽提的化學(xué)方法,根據(jù)溶劑的不同,可分為熱水浸提法、酸法、堿法、鹽法;三是用酶的生物化學(xué)法。一般來(lái)說(shuō),高壓輔助和熱水抽提針對(duì)明膠的提取,而低溫抽提和酶法針對(duì)膠原的提取,但其基本原理都是根據(jù)膠原蛋白的特性改變蛋白質(zhì)所在的外界環(huán)境,把膠原蛋白從其他蛋白質(zhì)中分離出來(lái)。 吉林深海鱈魚(yú)膠原蛋白液體飲品
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