化學(xué)方法比物理方法改。聯(lián)度高,且能獲得均勻一致的交聯(lián),對(duì)調(diào)節(jié)、控制膠原的各性質(zhì)均有效。已廣泛應(yīng)用于各種化學(xué)試劑交聯(lián)膠原,以提高其交聯(lián)度、力學(xué)性能及生物相容性?;瘜W(xué)改性法具體又可分為使用化學(xué)試劑交聯(lián)、側(cè)鏈的修飾、生理活性物的固定化三種方法。[130]化學(xué)試劑交聯(lián)法中常用的化學(xué)交聯(lián)劑有戊二醛、己異二氰酸酯、碳化二亞胺、疊氮二苯基磷等,其中戊二醛是應(yīng)用較比較廣的試劑,大量實(shí)驗(yàn)證明:戊二醛能提供有效交聯(lián),但有細(xì)胞毒性,且其用量難以控制。另外,隨著交聯(lián)度的增加,吸水能力和膨脹度卻會(huì)降低。?;B氮化物、聚環(huán)氧化物或京尼平交聯(lián)等,不會(huì)引入明顯的毒性,且可獲得理想的交聯(lián)效果。所見(jiàn)報(bào)道中,多使用單一交聯(lián)劑對(duì)膠原蛋白交聯(lián)改性,但也有使用混合交聯(lián)劑的,如為了解決人工心臟瓣膜晚期鈣化問(wèn)題,篩選出環(huán)氧丙烷化學(xué)改性戊二醛處理生物瓣的方法,可明顯減低瓣膜組織膠原蛋白末端游離羧基含量。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,經(jīng)改性后的瓣膜組織能保持較好的組織穩(wěn)定性和機(jī)械抗張強(qiáng)度、免疫原性測(cè)試為陰性,符合臨床應(yīng)用。 真皮中含有豐滿的膠原蛋白層,而補(bǔ)充膠原三肽,能更有效的將皮膚細(xì)胞撐起。廣東海鯛魚(yú)膠原蛋白
在實(shí)際提取過(guò)程中,不同提取方法之間往往相互結(jié)合,可以得到較好的提取效果。采用超高壓處理系統(tǒng)對(duì)原料給予高壓處理一段時(shí)間,使其組織結(jié)構(gòu)和膠原蛋白的三股螺旋結(jié)構(gòu)發(fā)生松弛、變性,便于分離提取。熱水提取法是將原料經(jīng)過(guò)除雜蛋白等前處理之后,在一定條件下直接用熱水浸提已經(jīng)變性了的膠原蛋白或膠原蛋白水解物,使用的溫度有100℃沸水浴、60-70℃、40-45℃。膠原蛋白的提取一般有三種方法:一是高壓輔助的物理方法;二是用溶劑預(yù)處理結(jié)合低溫或熱水抽提的化學(xué)方法,根據(jù)溶劑的不同,可分為熱水浸提法、酸法、堿法、鹽法;三是用酶的生物化學(xué)法。一般來(lái)說(shuō),高壓輔助和熱水抽提針對(duì)明膠的提取,而低溫抽提和酶法針對(duì)膠原的提取,但其基本原理都是根據(jù)膠原蛋白的特性改變蛋白質(zhì)所在的外界環(huán)境,把膠原蛋白從其他蛋白質(zhì)中分離出來(lái)。 遼寧膠原蛋白肽廠家膠原三肽更能有效的服務(wù)于人類(lèi)的健康與美麗。
有人對(duì)海參膠原研究發(fā)現(xiàn),刺參體壁含蛋白,其中70%為膠原蛋白。氨基酸分析,膠原富含丙氨酸和羥脯氨酸,但羥賴(lài)氨酸含量較少,SDS電泳及SP凝膠柱分析發(fā)現(xiàn)其膠原組成為(α1)2α2。還有人從仿刺參()提取膠原蛋白,利用EDTA和Tris-HCl浸泡溶漲,用氫氧化鈉除去雜質(zhì)和非膠原蛋白,采用胃蛋白酶促溶提取粗制膠原,通過(guò)鹽析和透析獲取精致膠原蛋白,并進(jìn)一步利用SephacrylS-300HR凝膠過(guò)濾和DEAE-52陰離子交換除去多糖,獲取膠原蛋白純品。SDS-PAGE電泳表明膠原分子的組成為(α1)3,且α鏈類(lèi)似于脊椎動(dòng)物Ⅰ型膠原的α1鏈,熱收縮溫度為57℃,低于牛皮膠原5℃。還有人對(duì)采自日本Senzaki海灣的Stomolopusmeleagri水母的外傘組織進(jìn)行了分析。整個(gè)中膠層被分成三部分,利用醋酸首先將凍干的水母中膠層分為酸溶性蛋白和酸不溶性物質(zhì),利用NaCl溶液將酸溶性蛋白分為酸溶性膠原蛋白和酸溶性非膠原蛋白,而不溶入醋酸的中膠層經(jīng)胃蛋白酶處理后大多變?yōu)榭扇苄缘哪z原質(zhì)。然后利用氨基酸分析儀對(duì)分離得到的三部分的組成分別進(jìn)行分析。發(fā)現(xiàn)該水母外傘中膠原蛋白含量很高,大約占干重的。經(jīng)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析其膠原蛋白是由三個(gè)獨(dú)特α鏈組成。
堿法提取即利用一定濃度的堿在一定的外界條件下提取膠原蛋白,堿處理法中常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等,用氫氧化鈉浸提時(shí)效果較好。一般的是把樣品勻漿后,用堿溶液多次溶脹后,再離心提取。但由于易引起蛋白質(zhì)變性,如膠原肽鍵水解,含羥基、疏基的氨基酸全部被破壞;所得產(chǎn)物等電點(diǎn)pH值較低,天冬酞胺和谷氨酞胺分別轉(zhuǎn)變?yōu)樘於彼岷凸劝彼?,得到的水解產(chǎn)物分子量較在酸性溶液中比低等問(wèn)題,若比較嚴(yán)重的話,還會(huì)產(chǎn)生D、L-型氨基酸消旋混合物,若D型氨基酸含量高過(guò)L型氨基酸,則會(huì)抑制L-型氨基酸的吸收,有些D型氨基酸有毒,甚至有致ai、致畸和致突變的作用。而且堿法提取的含量較低,用氫氧化鈉從魷魚(yú)皮中提取堿溶性膠原蛋白,其得率只有3%(以濕基計(jì))。所以,若想提取結(jié)構(gòu)完整、使用安全的膠原蛋白,很少采用此方法。有關(guān)單獨(dú)采用堿法提取膠原蛋白的報(bào)道不多,一般是堿法提取和酸法提法結(jié)合使用。比如在4℃條件下,魚(yú)骨用,再用,用10%的異丙醇溶液去除脂肪,,現(xiàn)在得到無(wú)色無(wú)味的膠原蛋白,提取率為。 所以是各國(guó)女性較為認(rèn)可的魚(yú)類(lèi)膠原蛋白。
膠原蛋白亦可用于食品,早在十二世紀(jì)Bingen的,在相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間里,含膠原的一些產(chǎn)品被人們認(rèn)為對(duì)關(guān)節(jié)是很有益處的。因?yàn)樗哂羞m用于食品的一些屬性:食用級(jí)通常外觀為白色,口感柔和,味道清淡,易消化??梢越档脱视腿ズ湍懝檀迹⒖梢栽龈唧w內(nèi)某些缺乏的必需微量元素使之維持在一個(gè)相對(duì)的正常范圍之內(nèi),它是一種理想的降血脂食品。此外,有研究表明,膠原蛋白可以協(xié)助排除體內(nèi)的鋁,減少鋁在體內(nèi)的聚集,降低鋁質(zhì)對(duì)人體的危害,并一定程度上促進(jìn)指甲和頭發(fā)的生長(zhǎng)。Ⅱ型膠原是關(guān)節(jié)軟骨中的主要蛋白,因而是潛在的自身抗原。口服后能誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生免疫耐受,從而抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病。膠原多肽是膠原或明膠經(jīng)蛋白酶等降解處理后制得的具有較高消化吸收性、分子量約為2000~30000的產(chǎn)物,不具有明膠的凝膠性能,市場(chǎng)上銷(xiāo)售的膠原多為膠原多肽。 膠原三肽的用途化妝品中的作用保濕、滋養(yǎng)、亮膚、緊膚、防皺、修復(fù)。廣東深海鱈魚(yú)膠原蛋白肽原液
需要的膠原蛋白,其實(shí)是一種由3個(gè)氨基酸分子組成的膠原蛋白即“膠原三肽”。廣東海鯛魚(yú)膠原蛋白
酶法提取是指可溶性膠原和酸溶性膠原被提取后,需用一些蛋白酶,如膠原酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶等水解,得到不同的酶促溶性膠原蛋白。所使用的蛋白酶主要分3種:動(dòng)物蛋白酶(如胰蛋白酶,胃蛋白酶),植物蛋白酶(如木瓜蛋白酶,菠蘿蛋白酶),微生物蛋白酶(如堿性蛋白酶,中性蛋白酶)。在對(duì)酶法水解膠原蛋白的研究中,以堿性蛋白酶應(yīng)用較多。將膠原進(jìn)行限制性降解,即將末端肽切割下來(lái),由于膠原肽鏈間的共價(jià)鍵都是通過(guò)分子末端肽里的賴(lài)氨酸或羥賴(lài)氨酸的相互作用形成的,末端肽被切下后,含三螺旋結(jié)構(gòu)的主體部分可溶于稀有機(jī)酸而被提取出來(lái)。用酶處理,可以水解掉膠原纖維蛋白的末端肽,提高膠原蛋白的產(chǎn)率;而且還不會(huì)破壞膠原蛋白的三股螺旋結(jié)構(gòu),保持其特性。影響酶提取的因素有很多,如酶濃度、酶與底物的比例、酶解時(shí)間、酶解溫度、pH值以及料液比等。在實(shí)際操作中,大多數(shù)采用酶復(fù)合法提取膠原蛋白,較多的是使用胃蛋白酶提取,有機(jī)酸多為乙酸。 廣東海鯛魚(yú)膠原蛋白
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