中國藥典ChP2020〈9201〉對NAT法支原體檢測產(chǎn)品有關(guān)性能驗證的要求，包括檢測限（LOD）、專屬性、耐用性、重現(xiàn)性。其中對于檢測限（LOD）的定義及驗證方法如下：在替代方法設(shè)定的檢驗條件下，樣品中能被檢出的微生物的蕞低數(shù)量。由于微生物所具有的特殊性質(zhì)，檢測限是指在稀釋或培養(yǎng)之前初始樣品所含有的微生物數(shù)量，而不是指檢驗過程中某一環(huán)節(jié)的供試液中所含有的微生物數(shù)量。中國藥典要求檢測口腔支原體、肺炎支原體、豬鼻支原體；支原體檢測方法是否正確？蘇州PCR法支原體檢測操作流程
南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒在PCR試劑配制及加樣上機環(huán)節(jié)有哪些注意事項？①實驗時應(yīng)注意防止外源DNA對試劑的污染，先加樣品DNA，然后進(jìn)行陽性質(zhì)控品的操作。在制備反應(yīng)試劑和添加DNA模板時，使用帶濾芯的搶頭，添加不同的試劑和不同的樣本時需更換搶頭，并經(jīng)常更換手套；②PCR實驗室應(yīng)具有3個不同的分區(qū)，分別為試劑準(zhǔn)備間、樣本制備間、擴增間。3個分區(qū)應(yīng)存在壓力差，試劑準(zhǔn)備間>樣本制備間>擴增間；南京豬鼻支原體檢測優(yōu)點支原體檢測試劑盒哪家好。
日本藥典JPXVⅢ〈G3-14-170〉對NAT法支原體檢測產(chǎn)品有關(guān)性能驗證的要求，包括檢測限（LOD）、專屬性、耐用性、可比性。其中對于專屬性的描述及要求如下：專屬性是指在樣本中能夠明確檢測到目標(biāo)核酸存在的能力。核酸擴增法的專屬性依賴于引物/探針的選擇和測試條件的嚴(yán)謹(jǐn)性(包括擴增和檢測步驟)。選擇特異的及對絕大多數(shù)支原體(柔膜體綱，如支原體屬和相關(guān)種屬如解脲支原體，螺原體，無膽甾原體等)保守的序列來設(shè)計引物/探針是相當(dāng)重要的。核酸擴增法檢測支原體種屬的能力應(yīng)該由章節(jié)中所列的參考支原體的實驗結(jié)果來確認(rèn)，而不推薦采用引物/探針與數(shù)據(jù)庫比對的方法，(JPXVⅢ提供了用作檢測的建議支原體種類)專屬性。
我國藥典規(guī)定的支原體檢測方法為培養(yǎng)法和指示細(xì)胞染色法。但這些方法也存在一些不盡人意之處，如所需時間較長，有的操作復(fù)雜等?！吨袊幍?020年版3301支原體檢測法》中指出：除培養(yǎng)法和DNA染色法外，也可采用經(jīng)國家藥品檢定機構(gòu)認(rèn)可的其他方法，對支原體進(jìn)行檢測。由于支原體檢測存在必要性，如何盡可能提高檢測的準(zhǔn)確率以及效率尤為關(guān)鍵。不少業(yè)內(nèi)指導(dǎo)原則指出，支原體的核酸法檢測，通過嚴(yán)格且充分的方法學(xué)驗證，可以替代藥典中對的培養(yǎng)法與DNA染色法。支原體檢測的背景知識與法規(guī)要求。
南京正揚生科科技有限公司自主研發(fā)的支原體檢測試劑盒包括支原體DNA提取試劑盒（磁珠法）和支原體DNA檢測試劑盒（PCR-熒光探針法），支原體DNA提取試劑盒采用特別修飾的氧化硅納米磁性微球，在獨特緩沖體系和外加磁場的作用下，可從復(fù)雜生物樣本中提取微量DNA并純化得到高純度DNA。與本公司自主研發(fā)的支原體DNA檢測試劑盒（熒光探針法）配套使用，定性檢測主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫、病毒種子批以及臨床治 療用細(xì)胞中是否有支原體污染。培養(yǎng)細(xì)胞支原體檢測。蘇州肺炎支原體檢測操作流程
如何選擇正確的方法進(jìn)行細(xì)胞的支原體檢測？蘇州PCR法支原體檢測操作流程
日本藥典JPXVⅢ〈G3-14-170〉對NAT法支原體檢測產(chǎn)品有關(guān)性能驗證的要求，包括檢測限（LOD）、專屬性、耐用性、可比性。其中對于可比性的描述及要求如下：可比性研究主要包括核酸擴增法與方法A和/或方法B的檢測限的對比。此外，專屬性(多種的支原體檢測，假定的假陽性結(jié)果)也應(yīng)該在對比中。檢測限的可接受標(biāo)準(zhǔn)如下：如果用于取代方法A(培養(yǎng)法),核酸擴增系統(tǒng)應(yīng)能檢測到10CFU/ml。如果用于取代方法B(指示細(xì)胞培養(yǎng)法),核酸擴增系統(tǒng)應(yīng)能檢測到100CFU/ml。針對這兩種情況，都應(yīng)使用合適的標(biāo)準(zhǔn)品以校準(zhǔn)CFU數(shù)，以確定能達(dá)到這些標(biāo)準(zhǔn)。蘇州PCR法支原體檢測操作流程