支原體是實(shí)驗(yàn)室中常見(jiàn)的污染細(xì)胞的原核生物,據(jù)統(tǒng)計(jì)約有15%-35%的細(xì)胞被支原體污染。支原體會(huì)改變宿主細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能等一系列特征,造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不正確;干擾細(xì)胞代謝和生長(zhǎng),改變核酸合成,影響細(xì)胞抗原性,導(dǎo)致染色體改變,干擾病毒復(fù)制以及模仿病毒的作用。因此,每一株外來(lái)細(xì)胞在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室之前,都應(yīng)進(jìn)行支原體檢測(cè),并且應(yīng)對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞定期(如每2-3個(gè)月)進(jìn)行支原體檢測(cè)。建立定期的監(jiān)控方案,有助于提高科研效率,在污染發(fā)生在早期時(shí)及時(shí)處理??杀苊庵гw污染造成更大的損失!細(xì)胞的支原體檢測(cè)——qPCR法。蘇州快速支原體檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)做支原體檢測(cè)是至關(guān)重要的。支原體在自然界分布普遍,無(wú)細(xì)胞壁,直徑為0.1-0.3μm,且形態(tài)易變,極易通過(guò)除菌過(guò)濾器。細(xì)胞培養(yǎng)被支原體污染是極普遍的問(wèn)題,在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中如果在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)破碎的細(xì)胞很多,需要頻繁換液才能維持傳代培養(yǎng)的時(shí)候,即應(yīng)懷疑支原體污染。面對(duì)支原體污染給細(xì)胞培養(yǎng)帶來(lái)的巨大難題,世界各國(guó)開(kāi)始重視,并相繼建立了細(xì)胞庫(kù),對(duì)細(xì)胞質(zhì)量進(jìn)展控制,效果明顯,支原體污染的問(wèn)題得以限制。目前已知能污染細(xì)胞的支原體有20多種以上。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中遇到的支原體95%都來(lái)自于以下四種支原體:口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、萊氏無(wú)膽甾支原體,其中萊氏無(wú)膽甾支原體為牛源性。蘇州PCR法支原體檢測(cè)操作流程支原體檢測(cè)方法匯總。
PCR相關(guān)實(shí)驗(yàn)中污染問(wèn)題時(shí)常發(fā)生,常見(jiàn)的有以下幾種污染類型:擴(kuò)增產(chǎn)物的污染、天然基因組DNA污染、試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。擴(kuò)增產(chǎn)物污染是蕞嚴(yán)重、蕞難以處理的的污染類型,由于一旦發(fā)生PCR產(chǎn)物污染,實(shí)驗(yàn)室必須停止實(shí)驗(yàn),直至污染被完全清 除為止,PCR產(chǎn)物污染短時(shí)間內(nèi)很難消除,一般需要2-4周才能消除,而且實(shí)驗(yàn)相關(guān)的試劑、耗材有很大可能會(huì)被污染,需全部更換。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測(cè)試劑盒,試劑盒經(jīng)過(guò)精心開(kāi)發(fā),可以阻止氣溶膠污染物在下一次的檢測(cè)反應(yīng)中產(chǎn)生擴(kuò)增,由此避免污染物帶來(lái)的檢測(cè)誤差, 減少實(shí)驗(yàn)室污染造成檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確的可能性。
中國(guó)藥典ChP2020〈9201〉對(duì)NAT法支原體檢測(cè)產(chǎn)品有關(guān)性能驗(yàn)證的要求,包括檢測(cè)限(LOD)、專屬性、耐用性、重現(xiàn)性。其中對(duì)于耐用性的定義及驗(yàn)證方法如下:當(dāng)方法參數(shù)有小的刻意變化時(shí),檢驗(yàn)結(jié)果不受影響的能力,為方法正常使用時(shí)的可靠性提供依據(jù)。方法使用者應(yīng)優(yōu)先測(cè)定該驗(yàn)證參數(shù)。與藥典方法比較,若替代方法檢驗(yàn)條件較為苛刻,則應(yīng)在方法中加以說(shuō)明。替代方法與藥典方法的耐用性比較不是必須的,但應(yīng)單獨(dú)對(duì)替代方法的耐用性進(jìn)行評(píng)價(jià),以便使用者了解方法的關(guān)鍵操作點(diǎn)。歐洲藥典對(duì)支原體檢測(cè)的要求有哪些?
用qPCR法進(jìn)行支原體檢測(cè)時(shí),出現(xiàn)擴(kuò)增曲線復(fù)孔間熒光信號(hào)值降低及復(fù)孔間擴(kuò)增曲線重復(fù)性差的原因可能是什么?復(fù)孔間部分曲線熒光信號(hào)值降低的現(xiàn)象比較常見(jiàn),通常與反應(yīng)管內(nèi)存在氣泡相關(guān),隨反應(yīng)溫度升高,氣泡破裂導(dǎo)致熒光信號(hào)值降低。上機(jī)前需仔細(xì)檢查反應(yīng)管內(nèi)是否有氣泡殘留。另外,針對(duì)加樣誤差引起的復(fù)孔間重復(fù)性差,實(shí)驗(yàn)人員上崗前需加強(qiáng)培訓(xùn)并考核,移液器務(wù)必定期校準(zhǔn)并正確掌握使用方法。此外,還需注意確保試劑與樣品混勻,離心后再上機(jī)。南京正揚(yáng)的支原體檢測(cè)試劑盒的裝量是多少?鄭州肺炎支原體檢測(cè)特點(diǎn)
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南京正揚(yáng)生科科技有限公司自主研發(fā)的支原體檢測(cè)試劑盒的優(yōu)點(diǎn)有哪些?①高靈敏度:靈敏度蕞低可達(dá)5cfu/ml(針對(duì)某些支原體類型);②質(zhì)控精 準(zhǔn):包含內(nèi)部質(zhì)控品和陰陽(yáng)性質(zhì)控品,避免假陰性和假陽(yáng)性;③覆蓋范圍廣:數(shù)據(jù)庫(kù)覆蓋度超過(guò)100種支原體;④樣本適用性廣:可用于各種樣本類型的檢測(cè)(病毒,細(xì)胞,培養(yǎng)液,細(xì)胞制品等);⑤品質(zhì)保障:標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn),提供質(zhì)檢報(bào)告;⑥服務(wù)一 流:提供售前售后各種培訓(xùn),全程技術(shù)、耗材和自動(dòng)化設(shè)備支持,保障您的實(shí)驗(yàn)順利而高效的進(jìn)行;蘇州快速支原體檢測(cè)試劑盒