如今，實時熒光定量PCR(qPCR)是一種首    選的支原體檢測方法，因為它準確、靈敏且省時。與常規(guī)PCR不同，qPCR允許實時觀察支原體DNA的DNA擴增，因為特異性引物在熒光探針存在的情況下與其靶序列結合，從而導致DNA擴增和熒光增強。此外，qPCR比常規(guī)PCR更具特異性和敏感性。與標準PCR一樣，支原體qPCR需要內(nèi)部、陽性和陰性對照，并且可能受到實驗室支原體DNA污染的影響。為什么我們需要敏感的支原體檢測？細胞培養(yǎng)和細胞系的使用在生物研究和生物制藥產(chǎn)品的生產(chǎn)中是必不可少的。當發(fā)生支原體感   染時，后果——感   染的疫苗、代價高昂的藥物開發(fā)中斷、不可靠的細胞培養(yǎng)試驗、不可重復的結果、失去多年的工作、失去寶貴的細胞系——可能是毀滅性的。此外，支原體對細胞培養(yǎng)中常用的抗   生素不敏感。因此，必須每月以蕞靈敏和蕞可靠的方法對細胞系進行支原體的常規(guī)檢測。美國藥典對支原體檢測的要求?？焖僦гw檢測常見問題

隨著我國生物藥以及細胞治    療相關產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，相關的法律法規(guī)也在不斷健全。支原體檢測就是其中必不可少的一項。準確進行支原體檢測，是避免外源因子污染，保證產(chǎn)品質量的重要質控手段。根據(jù)我國藥典的相關規(guī)定，如下領域需要進行支原體檢測：主細胞庫、工作細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床治    療、生產(chǎn)終末細胞、檢定細胞、病毒種子批和病毒類疫苗的病毒收獲液以及原液等。另外，其他一些規(guī)定、指導意見中，細胞培養(yǎng)相關材料如培養(yǎng)基、胰酶、臨床治   療用干細胞和免疫細胞、新生牛血清以及雜交瘤細胞等也需要進行檢測。上海PCR法支原體檢測常見問題培養(yǎng)細胞支原體檢測。

美國藥典USP40〈1223〉對NAT法支原體檢測產(chǎn)品有關性能驗證的要求，包括專屬性、檢測限（LOD）、耐用性、重現(xiàn)性。其中對于專屬性的定義及驗證方法如下：定義：替代性定性微生物方法的特異性定義為其檢測特定于該技術的一系列挑戰(zhàn)微生物的能力?！拔?span style="color:#f5c81c;">生物范圍”可以定義為代    表對患者或產(chǎn)品風險的有限數(shù)量的微生物，在生產(chǎn)環(huán)境和產(chǎn)品故障中發(fā)現(xiàn)的微生物，適合于測量替代方法的有效性的微生物，以及在適合于方法和產(chǎn)品的形態(tài)學和生理屬性方面具有 代    表性的微生物。證明：特異性是通過藥典和替代方法中微生物的挑戰(zhàn)面板的可比回收率來證明的。微生物挑戰(zhàn)超出了檢測或定量的限度，但達到了可以衡量方法有效性的水平。

南京正揚生物自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒(熒光探針法)是基于NAT(nucleicacidamplificationtechniques)的一種快速定性檢測生產(chǎn)原料、細胞庫、病毒種子、病毒或細胞收獲液、治    療用細胞中潛在支原體污染的產(chǎn)品。該試劑盒采用多重PCR的方法，使用2種熒光探針，F(xiàn)AM和VIC，分別檢測目標序列和內(nèi)參?？筛采w100多種支原體DNA序列；并且嚴格按照EP2.6.7進行專屬性、檢測限、耐用性驗證，檢測限滿足≤10CFU/mL的要求，具備靈敏度高、特異性好、安全性好等特點。中國藥典對支原體檢測的要求。

體外培養(yǎng)環(huán)境中，細胞自身沒有抗污染的能力，即使培養(yǎng)基會添加抗   生素，抵抗污染的能力也很有限。常見的微生物污染為細菌、真    菌、支原體和病毒等，其中又以支原體污染蕞為普遍棘手。一旦污染了支原體的細胞將無法正常形成單克隆，而且細胞轉染過程容易死亡，細胞實驗效率極低。為了維持實驗的穩(wěn)定，必須對所有的實驗使用到的細胞進行支原體檢測。南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒，利用qPCR的原理進行支原體檢測，試劑盒具備操作簡便、檢測快速、靈敏度高等優(yōu)點，是支原體檢測的優(yōu)    選方法。qPCR法支原體檢測試劑盒有哪些？上海PCR法支原體檢測特點

細胞被支原體污染后的特征及支原體檢測試劑盒使用方法。快速支原體檢測常見問題

中國藥典ChP2020〈9201〉對NAT法支原體檢測產(chǎn)品有關性能驗證的要求，包括檢測限（LOD）、專屬性、耐用性、重現(xiàn)性。其中對于耐用性的定義及驗證方法如下：當方法參數(shù)有小的刻意變化時，檢驗結果不受影響的能力，為方法正常使用時的可靠性提供依據(jù)。方法使用者應優(yōu)先測定該驗證參數(shù)。與藥典方法比較，若替代方法檢驗條件較為苛刻，則應在方法中加以說明。替代方法與藥典方法的耐用性比較不是必須的，但應單獨對替代方法的耐用性進行評價，以便使用者了解方法的關鍵操作點?？焖僦гw檢測常見問題