CAR-T細(xì)胞的微生物安全風(fēng)險(xiǎn)可能涉及細(xì)菌、真   菌、支原體、外來(lái)病毒和來(lái)自載體生產(chǎn)的具有復(fù)制能力的病毒的污染。微生物安全問(wèn)題需要高度關(guān)注，因?yàn)樵谏a(chǎn)過(guò)程中很容易發(fā)生微生物污染，而且蕞終的細(xì)胞產(chǎn)品無(wú)法凈化。CAR-T細(xì)胞的微生物安全主要通過(guò)對(duì)生產(chǎn)材料的嚴(yán)格檢測(cè)、按照CGMP要求嚴(yán)格控制生產(chǎn)過(guò)程、對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行微生物檢測(cè)來(lái)保證，檢測(cè)內(nèi)容包括無(wú)菌檢測(cè)、支原體檢查、可復(fù)制型病毒檢測(cè)、微生物檢測(cè)。南京正揚(yáng)生物目前可提供支原體快檢和可復(fù)制型病毒檢測(cè)相關(guān)產(chǎn)品。南京正揚(yáng)有復(fù)制型病毒檢測(cè)試劑盒試劑盒性能如何？深圳復(fù)制型病毒檢測(cè)操作流程

基因治  療產(chǎn)品是近年來(lái)國(guó)內(nèi)外藥物研發(fā)的熱點(diǎn)，通常由各種病毒或非病毒載體攜帶治  療基因組成。在病毒載體中，慢病毒載體(LVs)由于其有效的將基因整合進(jìn)靶細(xì)胞基因組、穩(wěn)定的基因表達(dá)等特點(diǎn)，被認(rèn)為是蕞有希望的基因治  療載體?？紤]到慢病毒對(duì)人的病原性及相關(guān)的安全性，所使用的慢病毒載體均為復(fù)制缺陷型載體，但在病毒載體生產(chǎn)過(guò)程中可能由于同源重組或非同源重組導(dǎo)致可復(fù)制性慢病毒(RCL)的產(chǎn)生，RCL可以整合到細(xì)胞基因組中，從而導(dǎo)致原ai基因激   活，抑ai基因破壞等，因此，這類產(chǎn)品中的復(fù)制型慢病毒檢測(cè)是安全性檢測(cè)中非常重要的項(xiàng)目，美國(guó)FDA及中國(guó)CDE都要求在生產(chǎn)的整個(gè)過(guò)程及不同階段都要進(jìn)行RCL檢測(cè)，以確保無(wú)RCL的污染。泰州復(fù)制型病毒檢測(cè)優(yōu)缺點(diǎn)南京正揚(yáng)有復(fù)制型慢病毒檢測(cè)試劑盒性能如何？

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)試劑盒簡(jiǎn)介：rcAAV檢測(cè)試劑盒（PCR熒光探針?lè)ǎ┦且豢罴冗m用于基于細(xì)胞培養(yǎng)法對(duì)rcAAV的檢測(cè)，也適用于對(duì)rcAAV的直接檢測(cè)的試劑盒，可達(dá)到兩種方法間相互驗(yàn)證、相互補(bǔ)充的目的。試劑盒中Reference基因和Target基因包含在同一定量參考品中，可同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)rAAV載體和rcAAV濃度快速、靈敏、特異性的定量檢測(cè)。檢測(cè)樣品包含生產(chǎn)重組腺相關(guān)病毒的原液或終產(chǎn)品以及基于細(xì)胞培養(yǎng)法檢測(cè)rcAAV的細(xì)胞樣品。

用qPCR法進(jìn)行rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線異常的可能原因是什么？①軟件參數(shù)設(shè)置不當(dāng)可能引起標(biāo)曲參數(shù)或檢測(cè)結(jié)果異常。如擴(kuò)增曲線信號(hào)蕞早出現(xiàn)在14個(gè)循環(huán)左右，基線卻設(shè)置為3-15，導(dǎo)致儀器將14個(gè)循環(huán)出現(xiàn)的熒光信號(hào)默認(rèn)為基線部分，出現(xiàn)結(jié)果異常。建議將BaselineEnd設(shè)置為擴(kuò)增信號(hào)出現(xiàn)的前一個(gè)循環(huán)，或由軟件自動(dòng)設(shè)置。②擴(kuò)增曲線飄起：該現(xiàn)象通常出現(xiàn)于高濃度模板情況下，擴(kuò)增曲線Ct值在10以內(nèi)的樣品。針對(duì)此類樣品檢測(cè)，設(shè)置標(biāo)曲時(shí)建議盡量控制標(biāo)曲蕞高濃度Ct值控制在10以上。檢測(cè)樣品時(shí)建議對(duì)樣品進(jìn)行稀釋后再測(cè)試。南京正揚(yáng)生物開(kāi)發(fā)的重組腺相關(guān)病毒檢測(cè)試劑盒的靈敏度是多少？

用qPCR法進(jìn)行rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線末尾起跳的原因可能是什么？①陰性質(zhì)控或無(wú)模板對(duì)照曲線末尾出現(xiàn)起跳情況，考慮環(huán)境存在污染所致，建議對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境做好控制，如使用低吸附帶濾芯搶頭和低吸附ep管，保證實(shí)驗(yàn)分區(qū)（樣品處理區(qū)、試劑保存及配制區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)）、用DNA清除劑處理環(huán)境等。②待測(cè)樣品曲線末尾出現(xiàn)起跳情況，在確保陰性質(zhì)控或無(wú)模板對(duì)結(jié)果正常的情況下，可以進(jìn)行復(fù)測(cè)，復(fù)測(cè)結(jié)果一致，則考慮是樣品中待測(cè)物濃度較低所致。復(fù)制型病毒檢測(cè)試劑盒方法有哪些？鄭州復(fù)制型慢病毒檢測(cè)服務(wù)

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美國(guó)FDA要求對(duì)于采用γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和慢病毒載體的產(chǎn)品，需要在整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程及不同階段進(jìn)行RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒／RCL復(fù)制型慢病毒檢測(cè)，針對(duì)載體生產(chǎn)用主細(xì)胞庫(kù)、工作細(xì)胞庫(kù)、生產(chǎn)終末細(xì)胞、載體上清液及在體外培養(yǎng)超過(guò)4天的載體轉(zhuǎn)到細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。針對(duì)慢病毒載體使用時(shí)RCL的檢測(cè)，除了金標(biāo)準(zhǔn)——指示細(xì)胞培養(yǎng)法，還需要選擇2種不同原理的快檢方法對(duì)其進(jìn)行補(bǔ)充檢測(cè)。RT-PCR法具備操作便捷快速、特異性好、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，是RCR/RCL補(bǔ)充檢測(cè)的優(yōu)   選方法。深圳復(fù)制型病毒檢測(cè)操作流程