美國FDA2020年發(fā)布的關于RCR/RCL病毒檢測指南提出:對于RCR/RCL的檢測包含指示細胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測定)、PCR/Q-PCR法(通過psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應)、PERT法(產物增強性逆轉錄檢測法)共4種檢測方法。其中,指示細胞培養(yǎng)法和Q-PCR法較常用,但各國監(jiān)管機構推薦并且可以接受的方法還是以指示細胞培養(yǎng)法為準。由于細胞產品一般要新鮮輸注或快速凍存的特殊性,可使用Q-PCR法先進行質控放行,但指示細胞培養(yǎng)法應同時進行確認。為什么要做復制型慢病毒檢測?復制型腺相關病毒檢測服務
rcAAV復制型腺相關病毒檢測過程中,qPCR反應體系配制環(huán)節(jié)有哪些注意事項?①qPCR的整個操作要低溫環(huán)境進行,防止模板的降解,試劑避免反復凍融。②配制反應體系前試劑要充分混勻,除了模板外的反應體系要統(tǒng)一配制,然后再分配至qPCR管中,配制的時候考慮到操作或耗材帶來的損耗需要多配若干個反應所需體系。③添加模板的時候注意搶頭要排盡,不求快,平行加樣。加樣后要進行離心,將液體集中在管底,離心后注意觀察反應體系液面是否平整,氣泡是否排盡。④每個樣品建議做3個復孔,每次除了樣品以外還要加陽性對照和陰性對照。上海RT-PCR法病毒檢測公司為什么要做復制型病毒檢測?
盡管逆轉錄病毒和慢病毒載體被設計為具有復制缺陷,但仍有可能在生產過程中或輸注到患者體內后發(fā)生重組,從而產生新的具有復制能力的逆轉錄病毒/慢病毒(RCR/RCL)。FDA在有關細胞產品和患者中檢測RCR復制型逆轉錄病毒/RCL復制型慢病毒的指南中建議使用適當?shù)?span style="color:#f5c81c;">生物學和/或分子檢測方法進行病毒載體、細胞產品和輸注后患者中的RCR復制型逆轉錄病毒/RCL復制型慢病毒檢測。南京正揚生物自主研發(fā)了可用于基于細胞培養(yǎng)方法的qPCR檢測以及CAR-T終產品qPCR檢測的RCL及RCR檢測專 用試劑盒,幫助研究者進行分析。
南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產的復制型逆轉錄病毒檢測試劑盒簡介:RCR基因拷貝數(shù)檢測試劑盒適用于定量檢測逆轉錄病毒載體生產的細胞醫(yī)治產品和基因醫(yī)治產品中復制型逆轉錄病毒RCR,如生產病毒的細胞庫、終末細胞、病毒載體及CAR-T細胞等。采用熒光探針RT-PCR的方法檢測逆轉錄病毒載體上的特定序列,試劑盒配套有RCR定量參考品,用于精確定量樣品中復制型逆轉錄病毒RCR的拷貝數(shù)。南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產的復制型逆轉錄病毒檢測試劑盒簡介:RCR基因拷貝數(shù)檢測試劑盒適用于定量檢測逆轉錄病毒載體生產的細胞醫(yī)治產品和基因醫(yī)治產品中復制型逆轉錄病毒RCR,如生產病毒的細胞庫、終末細胞、病毒載體及CAR-T細胞等。采用熒光探針RT-PCR的方法檢測逆轉錄病毒載體上的特定序列,試劑盒配套有RCR定量參考品,用于精確定量樣品中復制型逆轉錄病毒RCR的拷貝數(shù)。復制型腺相關病毒檢測要求有哪些?
南京正揚生物科技有限公司 自主研發(fā)生產 的全自動核酸提取儀是針對生物制品核酸提取的技術平臺,內置專業(yè)優(yōu)化的前處理程序,配套本公司的自動化前處理試劑盒和配套耗材,只需一鍵操作即可完成各類生物材料和制品中的宿主細胞、微生物、病毒因子等各類微量DNA/RNA的提取純化。只需26min即可完成樣品微量核酸的提取純化,解放雙手、縮短實驗操作時間、結果穩(wěn)定性得到保證。各相關程序已經過多面驗證,保證前處理結果準確、穩(wěn)定。歡迎聯(lián)系!復制型逆轉錄病毒檢測方法有哪些?上海復制型逆轉錄病毒檢測常見問題
qPCR法復制型慢病毒檢測的工作流程。復制型腺相關病毒檢測服務
用qPCR法進行rcAAV復制型腺相關病毒檢測時,出現(xiàn)擴增曲線異常的可能原因是什么?①如出現(xiàn)非特異性擴增現(xiàn)象:反應管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發(fā)而造成。上機前確保管蓋密閉,反應結束后查看八聯(lián)管或96孔板各管液面是否一致。與設備硬件相關,需咨詢硬件供應商解決。②如出現(xiàn)擴增曲線不平滑現(xiàn)象:可能與ROX加入量不足相關,個別設備有ROX校正功能,不同型號設備對ROX的需求量會有差異,需設置實驗摸索合適的ROX加入量。歡迎了解正揚復制型腺相關病毒檢測服務