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qPCR法支原體檢測(cè)公司

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-01-01

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測(cè)試劑盒利用Taqman熒光探針原理,定性檢測(cè)樣品中是否有支原體污染。本試劑盒涵蓋100多種支原體DNA序列,檢測(cè)快速,專一性強(qiáng),靈敏度高,性能可靠,且能提供國(guó)際第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)出具的性能驗(yàn)證報(bào)告,符合中、日、美國(guó)家的藥典要求。本公司還提供多樣化提取試劑盒,支持手工、自動(dòng)化提取,自動(dòng)化提取試劑盒又包括預(yù)分裝和非預(yù)分裝規(guī)格,客戶可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行訂購(gòu)。qPCR法支原體檢測(cè)程序中,陰性對(duì)照(NCS)和空白對(duì)照(BLK)的區(qū)別:陰性對(duì)照(NCS):為樣品稀釋液經(jīng)核酸提取純化后所得,在提取純化前同待測(cè)樣品一樣需加入IC,NCS用于監(jiān)測(cè)提取環(huán)節(jié)是否存在紕漏,比如:操作問題、試劑性能異常、提取環(huán)節(jié)出現(xiàn)污染等情況;空白對(duì)照(BLK):在PCR檢測(cè)環(huán)節(jié)加入的對(duì)照品,BLK為純水,不含IC/支原體核酸;BLK用于監(jiān)測(cè)檢測(cè)環(huán)節(jié)是否出現(xiàn)污染,如:檢測(cè)試劑盒污染、試劑配制間的環(huán)境污染等;支原體檢測(cè)方法有哪些。qPCR法支原體檢測(cè)公司

南京正揚(yáng)生科科技有限公司自主研發(fā)的支原體檢測(cè)試劑盒優(yōu)點(diǎn)有哪些?①高靈敏度:靈敏度蕞可達(dá)5cfu/ml(針對(duì)某些支原體類型);②質(zhì)控精    準(zhǔn):包含內(nèi)部質(zhì)控品和陰陽(yáng)性質(zhì)控品,避免假陰性和假陽(yáng)性;③覆蓋范圍廣:數(shù)據(jù)庫(kù)覆蓋度超過100種支原體;④樣本適用性廣:可用于各種樣本類型的檢測(cè)(病毒,細(xì)胞,培養(yǎng)液,細(xì)胞制品等);⑤品質(zhì)保障:標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn),提供質(zhì)檢報(bào)告;⑥服務(wù)一    流:提供售前售后各種培訓(xùn),全程技術(shù)、耗材和自動(dòng)化設(shè)備支持,保障您的實(shí)驗(yàn)順利而高效的進(jìn)行;鄭州雞毒支原體檢測(cè)公司支原體檢測(cè)方法匯總。

常用的支原體檢測(cè)方法有傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法、指示細(xì)胞培養(yǎng)法(DNA染色法)、ELISA法、PCR法等。分離培養(yǎng)法基本不會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果,因此被譽(yù)為支原體檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)。不過也存在四個(gè)弊端,一是檢測(cè)時(shí)間太長(zhǎng),支原體要長(zhǎng)出明顯克隆至少需要4周時(shí)間;二是盡管可以檢測(cè)絕大多數(shù)支原體種類,分離培養(yǎng)法也有力所不及的時(shí)候,例如豬鼻支原體(M.hyorhinis);三是易出現(xiàn)假陽(yáng)性,因?yàn)樵谂囵B(yǎng)時(shí)需以陽(yáng)性菌株為對(duì)照,易出現(xiàn)交叉污染;四是對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求比較高。

用qPCR法進(jìn)行支原體檢測(cè)時(shí),出現(xiàn)擴(kuò)增曲線異常的可能原因是什么?①如出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增現(xiàn)象,該問題是由反應(yīng)管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發(fā)而造成。上機(jī)前確保管蓋密閉,反應(yīng)結(jié)束后查看八聯(lián)管或96孔板各管液面是否一致。與設(shè)備硬件相關(guān),需咨詢硬件供應(yīng)商解決。②如出現(xiàn)擴(kuò)增曲線不平滑現(xiàn)象:可能與ROX加入量不足相關(guān),個(gè)別設(shè)備有ROX校正功能,不同型號(hào)設(shè)備對(duì)ROX的需求量會(huì)有差異,需設(shè)置實(shí)驗(yàn)摸索合適的ROX加入量。qPCR法支原體檢測(cè)試劑盒的操作流程包括支原體DNA提取、qPCR試劑配制、qPCR加樣及上機(jī)檢測(cè)、結(jié)果分析四個(gè)環(huán)節(jié)。支原體DNA提取包含樣品前處理(離心分離上清等)、樣品裂解液消化、支原體DNA與磁珠結(jié)合、一次洗滌、二次洗滌、洗脫;qPCR試劑在配制時(shí)需先將試劑放置于室溫,避光放置30min,直至試劑融化,各個(gè)試劑組分混勻后按照說明書進(jìn)行配制并分裝。在實(shí)驗(yàn)室,注意分區(qū)操作,降低實(shí)驗(yàn)發(fā)生污染的風(fēng)險(xiǎn)。細(xì)胞的支原體檢測(cè)——qPCR法。

中國(guó)藥典ChP2020〈9201〉對(duì)NAT法支原體檢測(cè)產(chǎn)品有關(guān)性能驗(yàn)證的要求,包括檢測(cè)限(LOD)、專屬性、耐用性、重現(xiàn)性。其中對(duì)于專屬性的定義及驗(yàn)證方法如下:檢測(cè)樣品中可能存在的特定微生物種類的能力。當(dāng)替代方法以微生物生長(zhǎng)作為判斷微生物是否存在時(shí),其專屬性驗(yàn)證時(shí)應(yīng)確認(rèn)所用培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)試驗(yàn),還應(yīng)考慮樣品的存在對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響。當(dāng)替代方法不是以微生物生長(zhǎng)作為判斷指標(biāo)時(shí),其專屬性驗(yàn)證應(yīng)確認(rèn)檢測(cè)系統(tǒng)中的外來成分不得干擾試驗(yàn)而影響結(jié)果,如確認(rèn)樣品的存在不會(huì)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果造成影響。采用替代方法進(jìn)行控制菌的檢驗(yàn),還應(yīng)選擇與控制菌具有類似特性的菌株作為驗(yàn)證對(duì)象。qPCR法支原體檢測(cè)方法有哪些。廣州qPCR法支原體檢測(cè)優(yōu)點(diǎn)

傳統(tǒng)的支原體檢測(cè)方法好不好?qPCR法支原體檢測(cè)公司

用qPCR進(jìn)行支原體檢測(cè)時(shí),哪些因素會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性和方法靈敏度存在較大影響?①qPCR引物探針的序列特異性:為保證方法高靈敏度和檢出率,用于qPCR檢測(cè)的特異序列必須是存在于高度保守區(qū)域內(nèi)的穩(wěn)定序列,并且需要散布在基因組上,保證不會(huì)因工藝導(dǎo)致的殘留偏好而引起漏檢。②qPCR實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證:為滿足檢測(cè)要求,應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室硬件和軟件能力進(jìn)行確認(rèn)。實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)應(yīng)按實(shí)驗(yàn)流程分區(qū)操作,每個(gè)操作區(qū)域配置相應(yīng)設(shè)施、設(shè)備及耗材,建立實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系,考核實(shí)驗(yàn)人員的操作能力及數(shù)據(jù)分析解讀能力等。qPCR法支原體檢測(cè)公司