常用的支原體檢測(cè)方法有傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法、指示細(xì)胞培養(yǎng)法(DNA染色法)、ELISA法、PCR法等。分離培養(yǎng)法基本不會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果,因此被譽(yù)為支原體檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)。不過(guò)也存在四個(gè)弊端,一是檢測(cè)時(shí)間太長(zhǎng),支原體要長(zhǎng)出明顯克隆至少需要4周時(shí)間;二是盡管可以檢測(cè)絕大多數(shù)支原體種類,分離培養(yǎng)法也有力所不及的時(shí)候,例如豬鼻支原體(M.hyorhinis);三是易出現(xiàn)假陽(yáng)性,因?yàn)樵谂囵B(yǎng)時(shí)需以陽(yáng)性菌株為對(duì)照,易出現(xiàn)交叉污染;四是對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求比較高。細(xì)胞支原體檢測(cè)方法。廣州PCR法支原體檢測(cè)試劑盒
我國(guó)藥典規(guī)定的支原體檢測(cè)方法為培養(yǎng)法和指示細(xì)胞染色法。但這些方法也存在一些不盡人意之處,如所需時(shí)間較長(zhǎng),有的操作復(fù)雜等。《中國(guó)藥典2020年版3301支原體檢測(cè)法》中指出:除培養(yǎng)法和DNA染色法外,也可采用經(jīng)國(guó)家藥品檢定機(jī)構(gòu)認(rèn)可的其他方法,對(duì)支原體進(jìn)行檢測(cè)。由于支原體檢測(cè)存在必要性,如何盡可能提高檢測(cè)的準(zhǔn)確率以及效率尤為關(guān)鍵。不少業(yè)內(nèi)指導(dǎo)原則指出,支原體的核酸法檢測(cè),通過(guò)嚴(yán)格且充分的方法學(xué)驗(yàn)證,可以替代藥典中對(duì)的培養(yǎng)法與DNA染色法。深圳支原體檢測(cè)原理支原體檢測(cè)的好處有哪些?
細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)做支原體檢測(cè)是至關(guān)重要的。支原體在自然界分布普遍,無(wú)細(xì)胞壁,直徑為0.1-0.3μm,且形態(tài)易變,極易通過(guò)除菌過(guò)濾器。細(xì)胞培養(yǎng)被支原體污染是極普遍的問(wèn)題,在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中如果在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)破碎的細(xì)胞很多,需要頻繁換液才能維持傳代培養(yǎng)的時(shí)候,即應(yīng)懷疑支原體污染。面對(duì)支原體污染給細(xì)胞培養(yǎng)帶來(lái)的巨大難題,世界各國(guó)開(kāi)始重視,并相繼建立了細(xì)胞庫(kù),對(duì)細(xì)胞質(zhì)量進(jìn)展控制,效果明顯,支原體污染的問(wèn)題得以限制。目前已知能污染細(xì)胞的支原體有20多種以上。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中遇到的支原體95%都來(lái)自于以下四種支原體:口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、萊氏無(wú)膽甾支原體,其中萊氏無(wú)膽甾支原體為牛源性。
在進(jìn)行支原體檢測(cè)之前,對(duì)支原體DNA進(jìn)行提取的目的是為了從樣品中純化和富集支原體的DNA,以便進(jìn)行后續(xù)的檢測(cè)和分析。以下是進(jìn)行支原體DNA提取的主要原因和目的:去除抑制物質(zhì):某些樣品中可能含有對(duì)PCR或其他分子檢測(cè)方法有抑制作用的物質(zhì),如酶抑制劑、有機(jī)溶劑等。支原體DNA提取過(guò)程可以幫助去除這些抑制物質(zhì),提高后續(xù)PCR或分子檢測(cè)的成功率。保護(hù)DNA完整性:支原體DNA在樣品中容易受到外界環(huán)境的影響和降解。提取過(guò)程中的適當(dāng)處理可以保護(hù)DNA的完整性,防止其在提取過(guò)程中受到損傷。細(xì)胞培養(yǎng)中支原體檢測(cè)的重要性。
在進(jìn)行支原體檢測(cè)之前,對(duì)支原體DNA進(jìn)行提取的目的是為了從樣品中純化和富集支原體的DNA,以便進(jìn)行后續(xù)的檢測(cè)和分析。支原體是一類細(xì)小的細(xì)菌樣微生物,其基因組含有DNA。通過(guò)對(duì)支原體DNA的提取,可以獲得純凈的DNA樣本,有助于準(zhǔn)確、敏感地檢測(cè)支原體的存在和進(jìn)行進(jìn)一步的分子分析。通過(guò)對(duì)支原體DNA進(jìn)行提取,可達(dá)到分離支原體DNA、富集支原體DNA、去除抑制物質(zhì)、保護(hù)DNA完整性。綜上所述,對(duì)支原體DNA進(jìn)行提取是進(jìn)行支原體檢測(cè)的重要步驟,可以獲得純凈、富集的DNA樣本,為后續(xù)的檢測(cè)和分析提供可靠的基礎(chǔ)。支原體檢測(cè)試劑盒的適用樣品類型有哪些?廣州支原體檢測(cè)服務(wù)
支原體檢測(cè)有幾種方法?廣州PCR法支原體檢測(cè)試劑盒
南京正揚(yáng)生物自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測(cè)試劑盒(熒光探針?lè)?是基于NAT(nucleicacidamplificationtechniques)的一種快速定性檢測(cè)生產(chǎn)原料、細(xì)胞庫(kù)、病毒種子、病毒或細(xì)胞收獲液、治 療用細(xì)胞中潛在支原體污染的產(chǎn)品。該試劑盒采用多重PCR的方法,使用2種熒光探針,F(xiàn)AM和VIC,分別檢測(cè)目標(biāo)序列和內(nèi)參??筛采w100多種支原體DNA序列;并且嚴(yán)格按照EP2.6.7進(jìn)行專屬性、檢測(cè)限、耐用性驗(yàn)證,檢測(cè)限滿足≤10CFU/mL的要求,具備靈敏度高、特異性好、安全性好等特點(diǎn)。廣州PCR法支原體檢測(cè)試劑盒