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來源: 發(fā)布時間:2025-05-16

注意事項質(zhì)粒質(zhì)量:請務必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件:使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。歡迎關注曼博生物公眾號:Mine-bio誰知道Polysciences的轉(zhuǎn)染試劑怎樣?天津全球PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理

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細胞轉(zhuǎn)染實驗是生物醫(yī)學實驗室中常規(guī)的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內(nèi)。目前主要有三種主流方法:生物轉(zhuǎn)染,物理轉(zhuǎn)染和化學轉(zhuǎn)染。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用病毒等微生物作為基因?qū)胼d體,以慢病毒、腺病毒和腺相關病毒等常見,其侵染效率可以達到90%以上,但常因安全性等問題,很多實驗室對其敬而遠之。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射、電穿孔和基因,無論哪一種都需要特定的設備,且一分錢一分貨,性能好的價格也都相對較高。如想申請試用裝,請關注公眾號:Mine-bio,回復“申請PEI”,即可參加!

對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。更多關于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關產(chǎn)品技術問題,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-Bio,查看更多技術文章!用PEI轉(zhuǎn)染時,一般和DNA的比例會是多少?

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產(chǎn)品簡介:KyforaBiobyPolysciences轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉(zhuǎn)染效果,已廣泛應用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳原子,即每“第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質(zhì)子海綿”體(protonsponge)。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細胞。有實驗證明,分子量為25000的線性PEI即KyforaBiobyPolysciences23966(PEI25K)轉(zhuǎn)染效率表現(xiàn)優(yōu)良。產(chǎn)品特點:適用于生產(chǎn)mABs、rAbs、bsABs和病毒載體(AVV、LV、BEV);在HEK293、CHO和Sf9細胞系中高度有效;適用于從研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的各個階段;可預測,可大規(guī)模生產(chǎn);兩周內(nèi)即可生成大量目標蛋白或病毒;高轉(zhuǎn)染效率;大量已發(fā)表的文獻支持。無需昂貴設備,PEI試劑實現(xiàn)經(jīng)濟高效率的基因轉(zhuǎn)染方案。天津全球PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理

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材料:質(zhì)粒DNA指數(shù)生長的真核細胞PEI(聚乙烯亞胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI儲存液(100μM):稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,0.2μm濾膜過濾,儲存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS(pH7.4):將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,加入20ml1M的HEPES,調(diào)pH值到7.4,定容至1L,過濾(0.2μm濾膜)后儲存于4℃?zhèn)溆谩7椒ǎ?.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預熱的無血清培養(yǎng)基。歡迎咨詢上海曼博生物。天津全球PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理