逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導下的DNA合成。此過程中，核酸合成與轉(zhuǎn)錄（DNA到RNA）過程與遺傳信息的流動方向（RNA到DNA）相反，故稱為逆轉(zhuǎn)錄。逆轉(zhuǎn)錄與反轉(zhuǎn)錄嚴格意義上來說沒有什么區(qū)別，但是逆轉(zhuǎn)錄是某些病毒的自主行為，如逆轉(zhuǎn)錄病毒，它們在整合到宿主細胞內(nèi)前以RNA為模板形成DNA的過程；反轉(zhuǎn)錄是進行基因工程過程中，人為地提取出所需要的目的基因的信使RNA，并以之為模板人工合成DNA的過程。二者雖同為RNA→DNA的過程，但地點不同，相對性的來說，逆轉(zhuǎn)錄在體內(nèi)，反轉(zhuǎn)錄在體外。逆轉(zhuǎn)錄在病毒學、免疫學等領(lǐng)域有普遍的應用。北京cDNA合成逆轉(zhuǎn)錄酶哪家劃算

RT-PCR就是逆轉(zhuǎn)錄PCR或稱為反轉(zhuǎn)錄PCR（Reversetranscription-PCR，RT-PCR），是以RNA為材料應用于PCR擴增中的一種實驗方法。首先通過逆轉(zhuǎn)錄酶將總RNA或信使RNA（mRNA）轉(zhuǎn)錄成互補DNA（cDNA）。其次TaqDNA聚合酶以cDNA為模板進行qPCR擴增。RT-PCR已被普遍應用于多種分子生物學應用中，包括基因表達分析、基因測試、RNA干擾驗證檢測、微陣列驗證、病原體檢測和疾病研究。RT-PCR的方法之一步法和兩步法：RT-PCR其操作方法分為兩種，即一步法和兩步法。一步法RT-PCR，逆轉(zhuǎn)錄同PCR擴增結(jié)合在一起，即cDNA合成與PCR擴增反應在同一管Buffer及酶中進行，一步完成。兩步法RT-PCR，RNA首先在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下生成cDNA，再以cDNA為模板進行PCR擴增，分成兩步進行。深圳加尾法逆轉(zhuǎn)錄酶多少錢逆轉(zhuǎn)錄經(jīng)常與細胞惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)，艾滋、乙肝等很多疾病也有逆轉(zhuǎn)錄過程。

RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄中模板的選擇：在RT-PCR實驗中，選擇總RNA或純化的mRNA作為模板進行逆轉(zhuǎn)錄十分重要。mRNA雖然能提供略高的靈敏度，但總RNA經(jīng)常使用，具有較mRNA更重要的優(yōu)勢。首先，其過程需要較少的純化流程，這保證了更好的回收模板和更好的把結(jié)果標準化為起始的細胞數(shù)。第二，避免mRNA富集步驟，為了避免不同mRNA的回收率而帶來結(jié)果偏移的可能性?？傊?，在大多數(shù)的應用中，目標基因的相對定量比檢測的非常靈敏度更重要，因此在多數(shù)情況下，總RNA更適用。

反轉(zhuǎn)錄酶的用處：由它催化轉(zhuǎn)錄合成的DNA稱為互補DNA(cDNA)。通常情況下，細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄應由DNA到RNA的，所得RNA為信使RNA（mRNA）供蛋白質(zhì)合成作模板用。而在部分RNA病毒中，要實現(xiàn)自身擴增，必須具有DNA，因此先由RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA再由cDNA轉(zhuǎn)錄出RNA。逆轉(zhuǎn)錄酶可用RT—PCR，將RNA轉(zhuǎn)變?yōu)镈NA后擴增，以獲得RNA的序列。1970年從致死RNA病毒中發(fā)現(xiàn)了反轉(zhuǎn)錄酶，并認為此酶與病毒的致死性質(zhì)有關(guān)。反轉(zhuǎn)錄酶也分布于某些正常細胞和胚胎細胞。反轉(zhuǎn)錄酶的發(fā)現(xiàn)表明不能把生物的遺傳信息由DNA→mRNA→蛋白質(zhì)非常化，遺傳信息也可以從RNA傳遞到DNA。它促進了分子生物學、生物化學和病毒學的研究，已成為研究這些學科的有力工具。逆轉(zhuǎn)錄實驗中引物設計時要注意反向引物特異性和長度，避免循環(huán)擴增和特異性問題。

逆轉(zhuǎn)錄實驗過程中要注意RNA樣品的保存、純化、處理和轉(zhuǎn)錄酶的選擇，逆轉(zhuǎn)錄實驗前要對反應體系進行無RNA和無反轉(zhuǎn)錄酶的對照。多逆轉(zhuǎn)錄酶都具有多種酶活性，主要包括以下幾種活性。①RNA指導的DNA聚合酶活性；以RNA為模板，催化dNTP聚合成DNA的過程。此酶需要RNA為引物，多為色氨酸的tRNA，在引物tRNA3′－末端以5′→3′方向合成DNA。反轉(zhuǎn)錄酶中不具有3′→5′外切酶活性，因此沒有校正功能，所以由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成的DNA出錯率比較高。②RNaseH活性；由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成的cDNA與模板RNA形成的雜交分子，將由RNaseH從RNA5′端水解掉RNA分子。逆轉(zhuǎn)錄是許多病毒復制中必不可少的步驟。北京cDNA合成逆轉(zhuǎn)錄酶哪家劃算

逆轉(zhuǎn)錄酶還有DNA內(nèi)切酶活性，這可能與病毒基因整合到宿主細胞染色體DNA中有關(guān)。北京cDNA合成逆轉(zhuǎn)錄酶哪家劃算

逆轉(zhuǎn)錄試劑的應用：近年來，隨著基因編輯技術(shù)和基因療法的快速發(fā)展，逆轉(zhuǎn)錄試劑的應用范圍也在不斷擴展。例如，在CRISPR-Cas9系統(tǒng)中，逆轉(zhuǎn)錄試劑可以用來進行sgRNA的合成和優(yōu)化，從而提高基因編輯的效率和精度。此外，逆轉(zhuǎn)錄試劑還可以用來合成DNA的反義鏈，從而為基因療法的開發(fā)提供技術(shù)支持。總之，逆轉(zhuǎn)錄試劑是一類重要的生物學試劑，它們可以促進逆轉(zhuǎn)錄反應的進行并在多個領(lǐng)域中發(fā)揮著重要的作用。在未來的研究中，逆轉(zhuǎn)錄試劑的應用范圍將會不斷擴展，并且將為生物醫(yī)學研究和治著提供更多的支持。北京cDNA合成逆轉(zhuǎn)錄酶哪家劃算