外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用：miRNA的靈敏生物標(biāo)志物測定法主要用于檢測早期階段(0-1)疙瘩的存在。除了基于組織活檢的當(dāng)前研究外，循環(huán)miRNA的研究是生物標(biāo)志物研究中一個新的擴展領(lǐng)域，因為它們具有所有特征（miRNA分析、診斷、預(yù)后、治著反應(yīng)和預(yù)測性生物標(biāo)志物），可在液體活檢（生物體液）中檢測到,并且不需要對病人進行健康和疙瘩活檢。血液樣本等體液分析檢測使醫(yī)生和研究人員能夠及早了解病癥的發(fā)展?fàn)顩r。miRNA被稱為基因表達的基本調(diào)節(jié)因子，尤其是在病癥中，并且在疙瘩發(fā)生、轉(zhuǎn)移和對各種療法的耐藥性中發(fā)揮重要作用。據(jù)報道，哺乳動物細(xì)胞每個細(xì)胞含有大約100,000個內(nèi)源性miRNA分子。據(jù)估計，單個外泌體較多可攜帶約500個miRNA拷貝。正常人血液中的外泌體量在病癥患者中約為109個外泌體/ml。外泌體是一種具有細(xì)胞外信息傳遞功能的小囊泡。紹興外泌體RT-qPCR

外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用：外泌體保護miRNA免于降解，使它們比游離miRNA更穩(wěn)定，并能被特定受體細(xì)胞有效整合。因此，在外泌體攜帶的貨物中，miRNA可以提供有關(guān)它們來源的細(xì)胞類型、靶標(biāo)和細(xì)胞狀態(tài)的身份信息。越來越多的證據(jù)表明，疙瘩細(xì)胞來源的外泌體已成為通過傳遞病miRNA促進疙瘩細(xì)胞增殖、侵襲、血管生成、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和疙瘩微環(huán)境重塑的主要候選者。血管生成對于惡性疙瘩的生長和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要，因為新血管可以提供額外的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，還可以清理廢物。比如：病細(xì)胞釋放外泌體exo-miR-21、exo-miR-23；外-miR-29；exo-miR-103和exo-miR-210可以促進增殖、血管生成和疙瘩轉(zhuǎn)移。紹興外泌體RT-qPCR外泌體分離是外泌體研究中的重要步驟。

外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體頭次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體被視為特異性分泌的膜泡，參與細(xì)胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。

外泌體的表征方法之光學(xué)方法：目前，光學(xué)方法是外泌體表征的主要方法，即動態(tài)光散射(DLS)、多角度光散射(MALS)和納米粒子跟蹤分析(NTA)。這些方法允許對尺寸（DLS0.5–200nm；MALS10–500nm；NTA10–1000nm）、尺寸分布和濃度進行高分辨率測量。DLS和MALS的結(jié)合增加了測量范圍(0.5–500nm)和精度。光學(xué)方法比較受歡迎的，但缺點是靈敏度低、試劑消耗高以及需要昂貴的設(shè)備。在使用納米粒子跟蹤分析NTA方法過程中，熒光染料的加入也提高了分辨率，并允許通過使用熒光標(biāo)記來表征表面免疫表型。從而確定標(biāo)記物存在。外泌體分離的方法會影響外泌體樣品的質(zhì)量和數(shù)量。

生物試劑Tetraspanins是常見的外泌體標(biāo)志物。它們包括CD9、CD63和CD81膜蛋白。Tetraspanins參與外泌體的產(chǎn)生。在抗原呈遞細(xì)胞中，MHC-II分子的功能通過它們整合到富含四跨膜蛋白CD9的細(xì)胞質(zhì)膜區(qū)域中來調(diào)節(jié)。CD63外泌體蛋白被認(rèn)為是病癥的蛋白質(zhì)標(biāo)志物。此外，四跨膜蛋白家族的另一成員CD81在丙型肝炎的細(xì)胞進入中起重要作用。慢型丙型肝炎患者血清中的外泌體CD81會升高，表明CD81可能是丙型肝炎染上的標(biāo)志物。膠質(zhì)母細(xì)胞瘤表皮生長因子受體vIII(EGFRvIII)被認(rèn)為是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的標(biāo)志物。關(guān)于中樞的神經(jīng)系統(tǒng)，在腦疙瘩者血清中分離的外泌體中也檢測到了EGFR、EGFRvIII和TGFβ。外泌體受到多種因素的調(diào)控，例如細(xì)胞膜電位、氧化應(yīng)激和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等。蘇州細(xì)胞外泌體分離多少錢

外泌體介導(dǎo)的RNA轉(zhuǎn)移對基因表達水平和遺傳數(shù)據(jù)傳遞具有重要的調(diào)節(jié)作用。紹興外泌體RT-qPCR

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗。二是PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù)，表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。紹興外泌體RT-qPCR