分離外泌體的方法之微流控分離：基于微流體的外泌體分離可以包括用于外泌體捕獲的免疫親和方法，納米多孔膜篩分方法或微柱上的納米線用于外泌體捕獲。所有三個(gè)系統(tǒng)都需要具有粘彈性分析和電操作的芯片才能進(jìn)行外泌體分離過(guò)程。外泌體的特異性很高，采用基于微流控芯片的免疫親和捕獲方法。尺寸范圍在40-100nm之間的外泌體被這種微流體芯片特異性地捕獲，在外泌體分離和定量方面的益處。篩分方法可用于通過(guò)壓力或通過(guò)電泳從全血中過(guò)濾外泌體，壓力的利用使分離時(shí)間更短，電場(chǎng)導(dǎo)致高外泌體純度。特異性、可重復(fù)性、低分離時(shí)間和更低的分離成本是基于微流體的外泌體分離的一些優(yōu)點(diǎn)。的外泌體分離技術(shù)采用了磁珠分離和濾膜分離的方法。濟(jì)南血漿外泌體分離公司

外泌體可以傳遞生物分子，例如蛋白質(zhì)、DNA、mRNA等，影響接收器細(xì)胞的表現(xiàn)型和生理活性。外泌體可通過(guò)特定的組裝和功能修飾，提高其對(duì)宿主細(xì)胞的選擇性靶向性。核酸是在外泌體中發(fā)現(xiàn)的另一組主要顆粒，即DNA和RNA，它們可以在細(xì)胞中發(fā)揮功能作用。在源自小鼠和人類(lèi)肥大細(xì)胞的外泌體中發(fā)現(xiàn)了約1300種mRNA、121種miRNA和>100種小RNA，但未檢測(cè)到DNA和rRNA。在外泌體中發(fā)現(xiàn)的其他miRNA是lin-4和let-7，以及母乳中的miR-181a和miR-155。小鼠外泌體對(duì)人類(lèi)細(xì)胞的刺激可以導(dǎo)致人類(lèi)細(xì)胞中小鼠蛋白質(zhì)的合成。此外，外泌體和受體細(xì)胞的mRNA譜不同，表明mRNA被主動(dòng)分選為MVB。濟(jì)南血漿外泌體分離公司優(yōu)化外泌體分離方法可以用于解決外泌體復(fù)雜性掩蓋的問(wèn)題。

外泌體分離方法之過(guò)濾法：超濾膜也可用于外泌體的分離。根據(jù)微泡的大小，使用超濾膜過(guò)濾的方法可以將外泌體與蛋白質(zhì)和其他大分子分離。外泌體也可以通過(guò)多孔結(jié)構(gòu)捕獲它們來(lái)分離。常見(jiàn)的過(guò)濾膜孔徑為0.8m、0.45m或0.22m，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體。比如微柱多孔硅纖毛結(jié)構(gòu)一般用于分離40-100nm外泌體。在初始步驟中，去除較大的囊泡。在接下來(lái)的步驟中，外泌體會(huì)群集中在過(guò)濾膜上。隔離步驟相對(duì)較短，但該方法需要用PBS緩沖液對(duì)硅結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)孵育。除標(biāo)準(zhǔn)過(guò)濾技術(shù)外，切向流過(guò)濾在有效分離外泌體方面也有著嘗試應(yīng)用，通過(guò)切向流過(guò)濾技術(shù)去除游離肽和其他小化合物從而分離具有確定大小的外泌體。此外，在體外研究和脂肪組織中，也會(huì)采用超濾與SEC的結(jié)合的方式來(lái)分離外泌體。通過(guò)(a)對(duì)片上過(guò)濾器施加壓力或(b)產(chǎn)生電場(chǎng)，迫使外泌體穿過(guò)多孔膜，結(jié)合錯(cuò)流和電泳分選來(lái)完成篩分。

外泌體分離方法之親和層析分離法：在親和層析分離法方面，主要使用凝集素和合成Vn(venceremin)肽。凝集素將結(jié)合存在于外泌體表面的糖基化蛋白質(zhì)，從而使外泌體沉淀。Vn肽分離技術(shù)基于其對(duì)含有HSP的細(xì)胞外顆粒的高親和力。然而，這種方法比較容易使提取物被膜表面上含有上述標(biāo)記物的細(xì)胞和其他顆粒污染。外泌體分離方法之介電泳分離法：介電泳分離法主要利用不同大小的粒子在不均勻電場(chǎng)中的位置差異。外泌體被吸引到高電區(qū)域，而較大的顆粒將位于低電區(qū)域。該方法速度快，適合用于高通量篩選，但缺點(diǎn)是需要加熱。外泌體在疙瘩微環(huán)境中的參與，反映了其具有的高度的異質(zhì)性和復(fù)雜性。

外泌體的物理表征方法：常用的外泌體物理表征方法是基于顯微鏡的方法，例如透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡、低溫電子顯微鏡和原子力顯微鏡；動(dòng)態(tài)光散射；納米粒子跟蹤分析；可調(diào)電阻脈沖傳感；和單個(gè)EV分析等。用于分析外泌體濃度、定量和概況的分子生物方法主要包括：實(shí)時(shí)定量PCR、數(shù)字PCR技術(shù)（基于芯片的dPCR、液滴數(shù)字PCR、ddPCR）、蛋白質(zhì)免疫印跡、全基因組測(cè)序（next-generationsequencing）、exome-targetedsequencing（下一代測(cè)序）、微陣列圖譜技術(shù)和ELISA技術(shù)等。外泌體的定量檢測(cè)和分析可作為疾病診斷和治著中的新型指標(biāo)。濟(jì)南血漿外泌體分離公司

手動(dòng)超高速離心和自動(dòng)化離心儀器的分離效果可能存在差異。濟(jì)南血漿外泌體分離公司

在生物流體中發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞外囊泡包括來(lái)自?xún)?nèi)體，多泡體的細(xì)胞外泌體（30nm至150nm）和來(lái)自質(zhì)膜的微泡（150nm至1000nm）。目前已知有多種從生物體液中分離外泌體的方法除了使用高速離心機(jī)的離心分離法以外，還有色譜法、超濾過(guò)濾法、基于聚合物的沉淀和免疫分離法等。#外泌體干細(xì)胞#這些細(xì)胞外泌體分離方法提取的外泌體要警惕非外泌體顆粒污染，如凋亡小體、凋亡小囊泡、外泌體和脂蛋白，均會(huì)對(duì)獲得的外泌體生物活性產(chǎn)生影響。另外，分離方法也會(huì)影響細(xì)胞外泌體的純度和產(chǎn)量。如果要從培養(yǎng)基中分離外泌體，就要使用無(wú)血清培養(yǎng)基或無(wú)外泌體胎牛血清。濟(jì)南血漿外泌體分離公司