DNA提取試劑盒是根據(jù)氯化芐法構(gòu)建的，能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。氯化芐具有能將含有纖維素等的細(xì)胞壁中的羥基芐基化，從而破壞細(xì)胞壁的特性。本制品利用了氯化芐的這一特性，將植物樣品凍結(jié)融解后，再使用PipetTip的前面將植物樣品在Microtube壁上數(shù)次按壓即可破壞細(xì)胞壁。本法與傳統(tǒng)方法相比，省去了液氮研磨等煩瑣步驟，有利于一次性處理大量樣品。而且，本制品經(jīng)過了改良，熱處理時(shí)間只需15分鐘，使用本制品從實(shí)驗(yàn)開始至水相回收只需30分鐘時(shí)間。得到的基因組DNA可以進(jìn)行PCR擴(kuò)增及限制酶處理等。RNA提取可以用于分析RNA的序列和結(jié)構(gòu)。長(zhǎng)沙外泌體RNA提取

DNA提取的一些問題，提取的細(xì)菌基因組DNA有降解，為什么？確認(rèn)選用的培養(yǎng)菌體是否新鮮，如果菌體需要保存時(shí)，請(qǐng)于-80℃保存。起始菌液量過多，導(dǎo)致菌液裂解不充分，部分DNA降解。菌體本身富含DNA酶活性，加入Digestionsolution后再加20uL0.5MEDTA溶液來抑制內(nèi)源性核酸酶。提取的基因組DNA生物活性差，為什么？提取的基因組DNA中鹽分濃度過高，請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書操作。提取的基因組DNA中含有乙醇。離心的速度和時(shí)間應(yīng)該嚴(yán)格遵循說明書要求進(jìn)行。長(zhǎng)沙外泌體RNA提取RNA提取可以使用不同的組織或細(xì)胞類型來比較RNA的表達(dá)。

骨組織RNA提取之其它骨組織破碎方法：a.取100mg骨組織加入1ml預(yù)熱的裂解液CLB（已加有P的LANTaid）高速均質(zhì)儀粉碎勻漿。或者取100mg液氮冷凍包埋切片粉碎的骨頭加入裂解液CLB（已加有P的LANTaid）粉碎勻漿。b.立刻接操作步驟的步驟。c.短時(shí)放回65°C水浴中（10min），中間偶爾顛倒1-2次幫助裂解。將裂解物4°C13,000rpm離心10分鐘，沉淀不能裂解的碎片。取裂解物上清（在不超過基因組DNA清理柱能力的情況下可以取更多的上清，這樣可以提高產(chǎn)量）轉(zhuǎn)到一個(gè)新離心管。加入上清體積一半的無(wú)水乙醇(0.5體積)，此時(shí)可能出現(xiàn)沉淀，但是不影響提取過程，立即吹打混勻，不要離心。若上清表面有漂浮物，用吸頭挑開吸取下面液體即可。將混合物(每次小于720μl，多可以分兩次加入)加入一個(gè)基因組清理柱中，（清理柱放入收集管中）13,000rpm離心2分鐘，棄掉廢液。

骨組織RNA提取之其它骨組織破碎方法：立刻將混合物(每次小于720μl，多可以分兩次加入)加入一個(gè)吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心2分鐘，棄掉廢液。確保離心后液體全部濾過去，膜上沒有殘留，如有必要，可以加大離心力和離心時(shí)間。加700μl去蛋白液RW1，室溫放置1分鐘，13,000rpm離心30秒，棄掉廢液。加入500μl漂洗液RW（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!），13,000rpm離心30秒，棄掉廢液。加入500μl漂洗液RW，重復(fù)一遍。將吸附柱RA放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液,以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。DNA提取的步驟包括細(xì)胞破碎、DNA分離、純化和洗滌等。

DNA提取的幾種方法介紹，濃鹽法：利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M氯納提取化鈉抽提，得到的DNP黏液與含有少量辛醇的氯仿一起搖蕩，使乳化，再離心除去蛋白質(zhì)，此時(shí)蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中，用2倍體積95%乙醇可將DNA鈉鹽沉淀出來。也可用0.15MNaCL液反復(fù)洗滌細(xì)胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿---異醇法除去蛋白。兩種方法比較，后種方法使核酸降解可能少一些。DNA提取的樣品準(zhǔn)備之生物組織：液氮?jiǎng)驖{法。長(zhǎng)沙外泌體RNA提取

DNA提取的原則，核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子。長(zhǎng)沙外泌體RNA提取

RNA提取一般在pH值低于7時(shí)進(jìn)行。在堿性pH值下，由于核糖的2'位置存在OH基團(tuán)，RNA更容易被堿性水解降解。此外，RNA在酸性pH值下傾向于保留在水相中。外泌體DNA提取注意事項(xiàng)：1.實(shí)驗(yàn)過程中較好戴一次性干凈手套、口罩，使用超純水。2.如樣本量不足200μL，請(qǐng)用0.85%生理鹽水補(bǔ)至200μL。RNA提取中常見的問題之RNA中有基因組DNA污染：材料中核酸含量高：脾臟、胸腺等組織中的核酸含量較高，可進(jìn)行多次酚/氯仿抽。提以去除多余的DNA。也可以在提取后加入DNaseI處理，降解DNA。材料過量：增加試劑用量。長(zhǎng)沙外泌體RNA提取