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外泌體分離方法之免疫學(xué)分離方法:免疫學(xué)分離法是利用受位于外泌體膜中的選定蛋白質(zhì)標(biāo)記物影響的抗體對外泌體進行標(biāo)記。這些標(biāo)記的外泌體可以進一步輕松處理和純化,例如,使用微芯片或磁珠。磁分離后,外泌體被純化,磁珠被溶解和去除。通過這種簡單快速的方法,就可以獲得較高純度提取物,但不會分離出缺乏磁性標(biāo)記抗體識別的表面標(biāo)記的外泌體,這可能導(dǎo)致外泌體池表現(xiàn)效果不佳。這種方法雖然既省時又直接,輸出純度較高,但也需要較為昂貴的試劑。外泌體可通過血液或其他體液傳播,從而在遠(yuǎn)離原發(fā)灶的部位誘導(dǎo)細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移。長沙外泌體分離報價表
分離外泌體的方法之免疫親和相互作用:免疫親和法是利用外泌體表面蛋白(抗原)與其靶抗體或分離配體分子之間的免疫親和相互作用原理分離純外泌體的理想方法。它有助于根據(jù)其表面標(biāo)志物分離特定類型的外泌體?;谖⒖装宓拿嘎?lián)免疫吸附測定(ELISA)是免疫親和分離試劑盒的一個例子,用于根據(jù)外泌體表面標(biāo)志物分離外泌體。Tetraspanin蛋白是這種分離方法的決定因素。抗CD9、抗CD63和抗CD81是免疫親和外泌體分離中使用的抗體的常見示例。免疫親和法可用于從結(jié)腸病細(xì)胞中分離外泌體,其效率高于超速離心和密度梯度分離。另外還有一種外泌體分離方法,該方法采用抗體包被的基于磁性顆粒的技術(shù)來分離外泌體。長沙外泌體分離報價表外泌體在很多生理和病理情況下都發(fā)揮著不可或缺的作用。
外泌體分離方法之沉淀分離方法::基于聚合物的沉淀分離方法是利用超親水聚合物來增強小尺寸顆粒(如外泌體)的沉淀。聚乙二醇的常用濃度在8%到15%之間變化。使用這種方法,將含有外泌體的溶液與聚合物一起孵育過夜,并在約10,000×g下進一步離心。外泌體分離方法之FFF分離法:FFF目前是一種很少使用但前景不錯的一種外泌體分離方法。分離由橫流力驅(qū)動,并基于顆粒的分子量或流體動力學(xué)直徑。它包括高純度、高效率和短時間處理,但迄今為止,F(xiàn)FF在外泌體分離中的使用案例較少,還有待進一步開發(fā)。
差速離心法分離外泌體的實驗原理:與等密度和梯度離心相反,差速離心從離心管內(nèi)顆粒的均勻初始分布開始。在開始一輪離心過程中,位于管底部附近的一部分目標(biāo)小顆粒不可避免地與較大顆粒共同沉淀。這種共沉淀導(dǎo)致較小顆粒的產(chǎn)量降低。然而,選擇大顆粒,起初位于管半月板附近,在開始一輪離心過程中可能沒有足夠的時間到達(dá)管底,從而污染較后一個離心步驟產(chǎn)生的小顆粒顆粒。顯然,交叉污染的程度取決于不同粒子群的相對沉降速度和離心條件。在被分離的粒子的沉降速度之間存在顯著(數(shù)量級)差異的情況下,可以有效地優(yōu)化差速離心協(xié)議以獲得目標(biāo)粒子群的高產(chǎn)量和足夠純度。此外,當(dāng)不同顆粒部分之間的沉降速率只存在微小差異時,優(yōu)化過程不太成功。在這些情況下,取決于離心條件。外泌體分離是外泌體研究中的重要步驟。
外泌體的表征方法:根據(jù)藥物遞送系統(tǒng)(DDS)表征外泌體結(jié)構(gòu)至關(guān)重要,因為它決定了DDS的特性,例如細(xì)胞或組織親和力、應(yīng)激反應(yīng)、吸收途徑和藥物釋放。2014年和2018年國際細(xì)胞外囊泡學(xué)會(MISEV2018)提出了外泌體(包括研究和外泌體制備)應(yīng)滿足的基本要求指南。在開發(fā)基于外泌體的DDS時,必須考慮數(shù)量、大小、形態(tài)、膜組成和蛋白質(zhì)(包括受體)等參數(shù)。這些參數(shù)表征所用的技術(shù)主要為光學(xué)、非光學(xué)和微流體技術(shù)。外泌體的表征方法之非光學(xué)方法:FTIR光譜和衰減全反射FTIR(ATR-FTIR)常用于外泌體質(zhì)量量化和脂質(zhì)和蛋白質(zhì)含量的總體估計。使用TRPS,可以同時測量大小、濃度和zeta電位。由于掃描電子顯微鏡(SEM)、透射電子顯微鏡的成本較高,近些年來,一種新型的納米粒度分析儀器在外泌體研究領(lǐng)域迅速發(fā)展,比如:粒度分析儀可以不只可以進行單顆粒檢測,顆粒粒徑檢測還可以檢測細(xì)胞外泌體的濃度、zeta電位、形態(tài)等進行多維度檢測。外泌體可作為一種疙瘩標(biāo)志物進行檢測,通過其生物學(xué)特征進行診斷和治著。長沙外泌體分離報價表
外泌體介導(dǎo)的RNA轉(zhuǎn)移對基因表達(dá)水平和遺傳數(shù)據(jù)傳遞具有重要的調(diào)節(jié)作用。長沙外泌體分離報價表
外泌體的分離方法:目前,有許多可用的外泌體分離方法。比較傳統(tǒng)的外泌體分離方法是超速離心,許多人將其視為金標(biāo)準(zhǔn)。其他技術(shù)主要基于大小排阻或抗體介導(dǎo)的標(biāo)記外泌體分離。每種分離方法在純度、數(shù)量、效率和通量方面都不同。超速離心法分離法的缺點是外泌體結(jié)構(gòu)容易發(fā)生改變,造成外泌體的結(jié)構(gòu)不一致性甚至?xí)?dǎo)致外泌體受損。超濾法:超濾法使用的是微孔過濾器;因此,較大的顆粒將從濾液中排除。它可以與離心結(jié)合使用,通過初步去除細(xì)胞碎片等大顆粒來加速外泌體的純化。不過使用此方法需要防止孔隙堵,不適合大規(guī)模的樣本處理。長沙外泌體分離報價表