外泌體（細(xì)胞外囊泡）目前被認(rèn)為是通過生物活性脂質(zhì)、蛋白質(zhì)以及RNA來進行細(xì)胞之間的通訊，同樣外泌體也是目前研究較深入的細(xì)胞外囊泡，外泌體的直徑只有我們頭發(fā)直徑的百萬分之一（30~150nm），當(dāng)多泡體與細(xì)胞膜融合時釋放到細(xì)胞外的時候，富含許多生物活性分子，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、轉(zhuǎn)移RNA以及微小RNA等就會被外泌體被釋放到細(xì)胞外，這樣一來就可以被微環(huán)境中的靶細(xì)胞吸收并且通過通過生物體液運送到遠(yuǎn)處。而外泌體與“目標(biāo)”進行交流方式主要有兩種途徑，一是通過胞吞作用被攝入到細(xì)胞內(nèi)；二是通過膜融合的方式來與靶細(xì)胞膜進行融合，接著就會直接釋放其中含有的物質(zhì)以及信息至靶標(biāo)細(xì)胞，其實外泌體的作用形式是相互的靶細(xì)胞分泌含有細(xì)胞特異性RNA的外泌體作用于周圍細(xì)胞后可誘導(dǎo)其表型重組而獲得組織特異性的表型，而周圍細(xì)胞分泌的外泌體則可以通過調(diào)控蛋白表達(dá)來調(diào)控細(xì)胞的生理過程。外泌體與肺的關(guān)系密切，通過氣道和肺泡微環(huán)境的打開和修飾，參與肺疾病如肺結(jié)核、肺病等的發(fā)生和發(fā)展。廣州腦脊液外泌體哪家好

外泌體的表征方法之非光學(xué)方法：非光學(xué)方法主要包括掃描電子顯微鏡（SEM）、透射電子顯微鏡（TEM）、冷凍電子顯微鏡（Cryo-EM）、原子力顯微鏡（AFM）、免疫檢測方法（ELISA）、傅立葉變換紅外光譜（FTIR）、可調(diào)諧電阻脈沖傳感(TRPS)和單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)。SEM、TEM和AFM方法通常用于直接膜結(jié)構(gòu)和形態(tài)測定，而ELISA檢測提供各種結(jié)構(gòu)顆粒（主要是蛋白質(zhì)和受體）的檢測和量化，例如，用于外泌體形態(tài)的確認(rèn)。單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)也用于外泌體定量，但也可用于檢測特定標(biāo)記物和確定外泌體亞群。青島肺泡外泌體穩(wěn)定性好外泌體分離和分析的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化將有助于外泌體研究領(lǐng)域的進一步發(fā)展。

外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用：miRNA是一類主要的小分子、單鏈、非編碼RNA分子，其成熟形式的長度在20到22個核苷酸(NT)之間，在幾乎所有生物途徑中發(fā)揮重要作用，包括細(xì)胞生長、增殖、分化、免疫反應(yīng)，細(xì)胞凋亡，代謝和疙瘩發(fā)生。外泌體在體液中的主要作用是可以保護miRNA，防止其生物分子在非生理條件下（多次凍融循環(huán)、長期儲存和極端pH）降解。據(jù)報道，外泌體來源的miRNA在-20°C下可保持穩(wěn)定長達(dá)5年，并且對凍融循環(huán)具有抵抗力.這也使外泌體成為病癥和其他疾病的潛在生物標(biāo)志物。miRNA與包括病癥在內(nèi)的許多疾病的發(fā)病機制有關(guān)，并且還被證明被遠(yuǎn)端或附近的受體細(xì)胞吸收作為外泌體中的貨物，作為細(xì)胞間通訊的一種方法，可能會影響發(fā)病機制。所以，外泌體可以被看作是miRNA轉(zhuǎn)移至目標(biāo)受體細(xì)胞的載體。

外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用：miRNA的靈敏生物標(biāo)志物測定法主要用于檢測早期階段(0-1)疙瘩的存在。除了基于組織活檢的當(dāng)前研究外，循環(huán)miRNA的研究是生物標(biāo)志物研究中一個新的擴展領(lǐng)域，因為它們具有所有特征（miRNA分析、診斷、預(yù)后、治著反應(yīng)和預(yù)測性生物標(biāo)志物），可在液體活檢（生物體液）中檢測到,并且不需要對病人進行健康和疙瘩活檢。血液樣本等體液分析檢測使醫(yī)生和研究人員能夠及早了解病癥的發(fā)展?fàn)顩r。miRNA被稱為基因表達(dá)的基本調(diào)節(jié)因子，尤其是在病癥中，并且在疙瘩發(fā)生、轉(zhuǎn)移和對各種療法的耐藥性中發(fā)揮重要作用。據(jù)報道，哺乳動物細(xì)胞每個細(xì)胞含有大約100,000個內(nèi)源性miRNA分子。據(jù)估計，單個外泌體較多可攜帶約500個miRNA拷貝。正常人血液中的外泌體量在病癥患者中約為109個外泌體/ml。外泌體的定量檢測和分析可作為疾病診斷和治著中的新型指標(biāo)。

分離外泌體的方法之降水：它是一種基于生物體液中外泌體的電荷沉淀的方法。帶負(fù)電荷的外泌體可以與PEG35,000Da基質(zhì)中帶正電荷的魚精蛋白相互作用并形成沉淀。外泌體的回收和重懸比基于超速離心的分離更有效。聚合物沉淀法以更少的勞動力和昂貴的設(shè)備分離尿外泌體的潛在益處。該方法首先利用DL-二硫蘇糖醇溶液還原或去除Tamm-Horsfall蛋白的聚合網(wǎng)絡(luò)，然后在25°C和30min下只用10,000×g的向心力即可實現(xiàn)外泌體的沉淀。還有利用聚合物沉淀方法并消除超速離心的商業(yè)試劑盒。ExoQuick?、Exo-spin?是來自Invitrogen?和miRCURY?的市售總外泌體分離試劑。外泌體在心血管系統(tǒng)中扮演著重要的調(diào)節(jié)作用，與各種疾病如心肌梗死、心衰等相關(guān)聯(lián)。廣州腦脊液外泌體哪家好

不同來源的外泌體可能需要采用不同的離心參數(shù)和分離方法。廣州腦脊液外泌體哪家好

外泌體分離方法之密度梯度離心法：這種方法將超速離心機的超速離心與蔗糖密度梯度相結(jié)合。具體地說，密度梯度離心用于將外泌體與非囊泡顆粒（例如蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)/RNA聚集體）分離。因此，該方法將囊泡與不同密度的顆粒分離。足夠的離心時間比較重要，否則如果外泌體部分具有相似的密度，則仍可能在外泌體部分中發(fā)現(xiàn)污染顆粒。該結(jié)構(gòu)不會讓大于1μm的細(xì)胞和其他顆粒進入布線區(qū)域。一些較小的顆粒和細(xì)胞碎片可以進入微柱區(qū)域，但被納米纖毛排除，形成直徑為30-200nm的孔。纖毛結(jié)構(gòu)選擇性地捕獲外泌體和小細(xì)胞外囊泡。廣州腦脊液外泌體哪家好