外泌體是直徑為30-150nm的小細(xì)胞外囊泡。在生理和病理?xiàng)l件下，幾乎所有類型的細(xì)胞都可以釋放外泌體，在細(xì)胞通訊和表觀遺傳調(diào)控中發(fā)揮重要作用。外泌體天然存在于體液中，包括血液，唾液，尿液和腦脊液等，內(nèi)部含有其來源細(xì)胞的核酸，蛋白等物質(zhì)，因此基于外泌體的疾病診斷和治著方法得到了深入的研究。但是如何拿到純凈的外泌體一直是外泌體研究所面臨的難題之一，因此研究人員也開發(fā)了許多外泌體分離的方法，來一起看一下吧。差速離心法：離心力從300×g到100,000×g的下進(jìn)行多次循環(huán)離心，較后收集外泌體顆粒。密度梯度離心法：等密度梯度超速離心法是通過從下到上逐步降低密度分層。動(dòng)區(qū)梯度超速離心法由兩個(gè)梯度介質(zhì)部分組成，樣品根據(jù)密度/質(zhì)量/大小被依次分離。外泌體被發(fā)現(xiàn)在各種生物體中，包括哺乳動(dòng)物、植物和微生物。成都上清外泌體報(bào)價(jià)

在生物流體中發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞外囊泡包括來自內(nèi)體，多泡體的細(xì)胞外泌體（30nm至150nm）和來自質(zhì)膜的微泡（150nm至1000nm）。目前已知有多種從生物體液中分離外泌體的方法除了使用高速離心機(jī)的離心分離法以外，還有色譜法、超濾過濾法、基于聚合物的沉淀和免疫分離法等。#外泌體干細(xì)胞#這些細(xì)胞外泌體分離方法提取的外泌體要警惕非外泌體顆粒污染，如凋亡小體、凋亡小囊泡、外泌體和脂蛋白，均會(huì)對獲得的外泌體生物活性產(chǎn)生影響。另外，分離方法也會(huì)影響細(xì)胞外泌體的純度和產(chǎn)量。如果要從培養(yǎng)基中分離外泌體，就要使用無血清培養(yǎng)基或無外泌體胎牛血清。合肥快速提取外泌體分離制造商外泌體與肺的關(guān)系密切，通過氣道和肺泡微環(huán)境的打開和修飾，參與肺疾病如肺結(jié)核、肺病等的發(fā)生和發(fā)展。

人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí)，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合，進(jìn)而靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而打開細(xì)胞內(nèi)的信號通路。有報(bào)道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細(xì)胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。

差速離心法分離外泌體的實(shí)驗(yàn)原理：與等密度和梯度離心相反，差速離心從離心管內(nèi)顆粒的均勻初始分布開始。在開始一輪離心過程中，位于管底部附近的一部分目標(biāo)小顆粒不可避免地與較大顆粒共同沉淀。這種共沉淀導(dǎo)致較小顆粒的產(chǎn)量降低。然而，選擇大顆粒，起初位于管半月板附近，在開始一輪離心過程中可能沒有足夠的時(shí)間到達(dá)管底，從而污染較后一個(gè)離心步驟產(chǎn)生的小顆粒顆粒。顯然，交叉污染的程度取決于不同粒子群的相對沉降速度和離心條件。在被分離的粒子的沉降速度之間存在顯著（數(shù)量級）差異的情況下，可以有效地優(yōu)化差速離心協(xié)議以獲得目標(biāo)粒子群的高產(chǎn)量和足夠純度。此外，當(dāng)不同顆粒部分之間的沉降速率只存在微小差異時(shí)，優(yōu)化過程不太成功。在這些情況下，取決于離心條件。超高速離心是常用的外泌體分離方法之一。

外泌體的表征方法之光學(xué)方法：目前，光學(xué)方法是外泌體表征的主要方法，即動(dòng)態(tài)光散射(DLS)、多角度光散射(MALS)和納米粒子跟蹤分析(NTA)。這些方法允許對尺寸（DLS0.5–200nm；MALS10–500nm；NTA10–1000nm）、尺寸分布和濃度進(jìn)行高分辨率測量。DLS和MALS的結(jié)合增加了測量范圍(0.5–500nm)和精度。光學(xué)方法比較受歡迎的，但缺點(diǎn)是靈敏度低、試劑消耗高以及需要昂貴的設(shè)備。在使用納米粒子跟蹤分析NTA方法過程中，熒光染料的加入也提高了分辨率，并允許通過使用熒光標(biāo)記來表征表面免疫表型。從而確定標(biāo)記物存在。外泌體來源于細(xì)胞內(nèi)各種類型的囊泡，包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和細(xì)胞膜等。佛山尿液外泌體分離報(bào)價(jià)

外泌體在很多生理和病理情況下都發(fā)揮著不可或缺的作用。成都上清外泌體報(bào)價(jià)

外泌體的表征分析：Zeta電位：通過電泳光散射(ELS)測量的Zeta電位測量粒子在電泳場中的速度。Zeta電位是膠體分散體穩(wěn)定性的指標(biāo)（非常值）和囊泡表面電荷的量度（+或-符號）。電子顯微鏡分析：對于電子顯微鏡分析，外泌體制劑在PBS緩沖液中按1:10稀釋，隨后在等體積的4%(w/v)多聚甲醛和1%(v/v)戊二醛中固定5分鐘。然后將樣品置于formvar-carbon涂層的600目銅網(wǎng)格上，并在室溫下干燥5分鐘。隨后將樣品在乙酸雙氧鈾溶液（2%水溶液）中進(jìn)行對比，并在電子顯微鏡（Jeol1230TEM）下觀察，加速電壓為80kV，并連接到數(shù)碼相機(jī)進(jìn)行觀察。成都上清外泌體報(bào)價(jià)

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