外泌體的物理表征方法：常用的外泌體物理表征方法是基于顯微鏡的方法，例如透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡、低溫電子顯微鏡和原子力顯微鏡；動態(tài)光散射；納米粒子跟蹤分析；可調(diào)電阻脈沖傳感；和單個EV分析等。用于分析外泌體濃度、定量和概況的分子生物方法主要包括：實時定量PCR、數(shù)字PCR技術(shù)（基于芯片的dPCR、液滴數(shù)字PCR、ddPCR）、蛋白質(zhì)免疫印跡、全基因組測序（next-generationsequencing）、exome-targetedsequencing（下一代測序）、微陣列圖譜技術(shù)和ELISA技術(shù)等。外泌體分離和分析的標(biāo)準化和規(guī)范化將有助于外泌體研究領(lǐng)域的進一步發(fā)展。佛山快速提取外泌體分離制造商

外泌體來源及其釋放途徑：外泌體在人體的主要作用是充當(dāng)局部和全身信號和調(diào)節(jié)系統(tǒng)。外泌體（直徑30-150nm）是較小的血管外囊泡亞群，它的還包括微泡（50nm-1μm）和凋亡小體（50nm-5μm）。外泌體的來源是內(nèi)體系統(tǒng)。由內(nèi)膜出芽形成早期核內(nèi)體，早期內(nèi)體可以與內(nèi)吞小泡融合，從而引導(dǎo)它們的貨物進行回收、降解或分泌。當(dāng)早期內(nèi)體成熟為晚期內(nèi)體時，在它們成熟為晚期核內(nèi)體的過程中，囊泡膜向內(nèi)出芽，導(dǎo)致多泡體(MVB)的產(chǎn)生，其中包含許多腔內(nèi)囊泡(ILV).在此階段，MVB可以與溶酶體融合（ILV繼續(xù)降解）或與質(zhì)膜融合，導(dǎo)致ILV釋放到細胞外空間。這些釋放的ILV稱為外泌體，包含著許多源自細胞內(nèi)部的蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)和多糖。另一種釋放機制就是由于質(zhì)膜向外出芽，從而導(dǎo)致形成所謂的脫落微泡或外泌體。無錫外泌體公司外泌體的分析需要根據(jù)不同來源的細胞選擇適宜的分離方法。

外泌體還參與神經(jīng)退行型癥。在神經(jīng)退行型癥個體的腦脊液和外周血中已檢測到幾種特定于阿爾茨海默氏癥、帕金森氏癥和Creutzfeldt-Jakob的聚集蛋白。特別是，在從阿爾茨海默者的腦脊液樣本中獲得的外泌體中檢測到Thr-181磷酸化的tau。在Thr-181磷酸化的Tau是阿爾茨海默的既定生物標(biāo)志物。此外，α-突觸核的蛋白也常在阿爾茨海默者的群體中檢出。此外，在尿液中發(fā)現(xiàn)的外泌體標(biāo)志物也可以是膀胱和前列腺疙瘩的標(biāo)志物。比如：視黃酸誘導(dǎo)蛋白3(GPRC5A)、抵抗素、外泌體蛋白PCA-3、TMPRSS2:ERG、α1-抗胰蛋白酶、組蛋白H2B1等。除了腦和泌尿道疙瘩外，外泌體蛋白也可以是胰腺病的標(biāo)志物。比如：結(jié)直腸病的外泌體蛋白標(biāo)志物包括EpCAM、cadherin-17、粘蛋白13(MUC-13)、角蛋白18、claudins和ephrinB1。

外泌體蛋白質(zhì)特征是:膜結(jié)合四跨膜蛋白（CD9、CD63、CD81和CD82），以及常規(guī)用于分離的EpCAM和Rab5。其他公認的蛋白質(zhì)是受體（CD46和CD55）、熱休克蛋白（HSP；Hsc70、Hsp70和Hsp90）、參與外泌體形成的蛋白質(zhì)（Alix、TSG101）和負責(zé)融合和轉(zhuǎn)運的膜蛋白（GTP酶、膜聯(lián)蛋白和flotillin；ATP7A、ATP7B、MRP2、SLC1A4、SLC16A1和CLIC1)等。使用ELISA法檢測這些標(biāo)記蛋白可以用于確認外泌體的存在。也有相關(guān)研究稱外泌體含有其他顆粒，如膽固醇（B淋巴細胞來源）、鞘脂、磷酸甘油酯和神經(jīng)酰胺等。外泌體還運輸形態(tài)發(fā)生素（Hedgehog、Wingless和Wingless-like），參與黑腹果蠅所描述的組織模式發(fā)育。外泌體分離是外泌體研究中的重要步驟。

人體內(nèi)多種細胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當(dāng)其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結(jié)合，進而靶細胞細胞內(nèi)的信號通路。二是在細胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結(jié)合，從而打開細胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。外泌體可以通過非典型途徑進行排毒，參與細胞解掉毒和化學(xué)治著的作用。佛山快速提取外泌體分離制造商

外泌體介導(dǎo)的RNA轉(zhuǎn)移對基因表達水平和遺傳數(shù)據(jù)傳遞具有重要的調(diào)節(jié)作用。佛山快速提取外泌體分離制造商

CHO細胞外泌體的分離和表征：CHO細胞是一種普遍用于生物制藥蛋白質(zhì)生產(chǎn)的宿主。CHO細胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術(shù)從分批培養(yǎng)中分離和富集細胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過多種方法來檢測和表征分離的囊泡，這些分析包括動態(tài)光散射(DLS)和Zeta電位測量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標(biāo)記物分析、RNA和脂質(zhì)分析等。根據(jù)制造商的指南，使用TEI總外泌體分離試劑盒（Invitrogen）從培養(yǎng)基中分離外泌體。將細胞培養(yǎng)基以2000×g離心30分鐘以去除細胞和任何碎片；隨后將上清液小心移至離心管管中，加入0.5倍體積的TEI試劑，充分混合并在4°C下孵育過夜。然后將樣品在4°C下以10,000×g離心1小時，然后在棄去上清液后，將富含外泌體的顆粒重新懸浮在75μlPBS緩沖液中。然后將樣品儲存在-20°C下，直到需要進行后續(xù)分析。佛山快速提取外泌體分離制造商

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