人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí)，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合，進(jìn)而靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而打開細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。有報(bào)道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細(xì)胞膜上未能檢測(cè)出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。蛋白質(zhì)分離方法可以用于外泌體的分離和純化。細(xì)胞外泌體分離供貨商

外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用：miRNA是一類主要的小分子、單鏈、非編碼RNA分子，其成熟形式的長(zhǎng)度在20到22個(gè)核苷酸(NT)之間，在幾乎所有生物途徑中發(fā)揮重要作用，包括細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化、免疫反應(yīng)，細(xì)胞凋亡，代謝和疙瘩發(fā)生。外泌體在體液中的主要作用是可以保護(hù)miRNA，防止其生物分子在非生理?xiàng)l件下（多次凍融循環(huán)、長(zhǎng)期儲(chǔ)存和極端pH）降解。據(jù)報(bào)道，外泌體來源的miRNA在-20°C下可保持穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)5年，并且對(duì)凍融循環(huán)具有抵抗力.這也使外泌體成為病癥和其他疾病的潛在生物標(biāo)志物。miRNA與包括病癥在內(nèi)的許多疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，并且還被證明被遠(yuǎn)端或附近的受體細(xì)胞吸收作為外泌體中的貨物，作為細(xì)胞間通訊的一種方法，可能會(huì)影響發(fā)病機(jī)制。所以，外泌體可以被看作是miRNA轉(zhuǎn)移至目標(biāo)受體細(xì)胞的載體。昆明血液外泌體現(xiàn)有的外泌體分離方法可能存在樣品丟失和樣品污染的問題。

分離外泌體的方法之超濾：它使用孔徑為50-450nm的膜過濾器從細(xì)胞碎片和較大的EV中分離外泌體。通過使用納米尺寸的濾膜，可以分離出目標(biāo)尺寸的外泌體。超濾法通常用作超速離心的后續(xù)步驟，以及凝膠過濾和色譜的較后一步。超濾可以通過切向流過濾（TFF）或直流過濾（DFF）方法進(jìn)行處理。DFF方法也稱為死端過濾，存在膜污染和顆粒分離受損的問題。此外，DFF只適用于小體積樣品，例如高達(dá)30mL的樣品。TFF也稱為錯(cuò)流過濾是一種更快速、高效和方便的分離大規(guī)模外泌體體積的過程，TFF是樣品流體切向流過濾膜并避免形成濾餅或堵塞的過程。

外泌體分離方法之過濾法：超濾膜也可用于外泌體的分離。根據(jù)微泡的大小，使用超濾膜過濾的方法可以將外泌體與蛋白質(zhì)和其他大分子分離。外泌體也可以通過多孔結(jié)構(gòu)捕獲它們來分離。常見的過濾膜孔徑為0.8m、0.45m或0.22m，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體。比如微柱多孔硅纖毛結(jié)構(gòu)一般用于分離40-100nm外泌體。在初始步驟中，去除較大的囊泡。在接下來的步驟中，外泌體會(huì)群集中在過濾膜上。隔離步驟相對(duì)較短，但該方法需要用PBS緩沖液對(duì)硅結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)孵育。除標(biāo)準(zhǔn)過濾技術(shù)外，切向流過濾在有效分離外泌體方面也有著嘗試應(yīng)用，通過切向流過濾技術(shù)去除游離肽和其他小化合物從而分離具有確定大小的外泌體。此外，在體外研究和脂肪組織中，也會(huì)采用超濾與SEC的結(jié)合的方式來分離外泌體。通過(a)對(duì)片上過濾器施加壓力或(b)產(chǎn)生電場(chǎng)，迫使外泌體穿過多孔膜，結(jié)合錯(cuò)流和電泳分選來完成篩分。不同來源的外泌體可能需要采用不同的離心參數(shù)和分離方法。

外泌體的表征方法之光學(xué)方法：目前，光學(xué)方法是外泌體表征的主要方法，即動(dòng)態(tài)光散射(DLS)、多角度光散射(MALS)和納米粒子跟蹤分析(NTA)。這些方法允許對(duì)尺寸（DLS0.5–200nm；MALS10–500nm；NTA10–1000nm）、尺寸分布和濃度進(jìn)行高分辨率測(cè)量。DLS和MALS的結(jié)合增加了測(cè)量范圍(0.5–500nm)和精度。光學(xué)方法比較受歡迎的，但缺點(diǎn)是靈敏度低、試劑消耗高以及需要昂貴的設(shè)備。在使用納米粒子跟蹤分析NTA方法過程中，熒光染料的加入也提高了分辨率，并允許通過使用熒光標(biāo)記來表征表面免疫表型。從而確定標(biāo)記物存在。外泌體來源于細(xì)胞內(nèi)各種類型的囊泡，包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和細(xì)胞膜等。細(xì)胞外泌體分離供貨商

外泌體的轉(zhuǎn)移涉及細(xì)胞因子、基質(zhì)降解酶和細(xì)胞外基質(zhì)重塑等多種調(diào)節(jié)步驟。細(xì)胞外泌體分離供貨商

分離外泌體的方法之過濾：過濾方法只取決于分子量或組分的大小，并有助于獲得較佳的外泌體產(chǎn)量。超濾、凝膠過濾和靜水透析包含在外泌體分離的過濾原理下。外泌體可以根據(jù)其定義的分子量或體積排阻限，使用標(biāo)準(zhǔn)膜過濾器從其他EV組分和細(xì)胞碎片中分離出來。市售的聚偏二乙烯碳酸酯膜過濾器具有各種孔徑范圍，用于滲透、納濾和微濾應(yīng)用。分離外泌體的方法之體積排阻色譜（SEC）：該方法主要有助于從分離的外泌體中去除蛋白質(zhì)和脂蛋白雜質(zhì)，它已被用于從尿液和血漿蛋白中分離外泌體。它被用作超速離心和超濾的后續(xù)分離方法。瓊脂糖2B/CL4B、qEV和瓊脂丙烯酸S-400是通常用于凝膠過濾色譜分離外泌體的色譜柱。SEC可以在低壓下進(jìn)行，這有助于分離具有完整完整性的外泌體。細(xì)胞外泌體分離供貨商

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