血漿DNA與血漿游離DNA提取試劑的選擇方法：血漿DNA，又稱血液循環(huán)DNA、游離DNA，是指血液中游離于細胞外的DNA，其來源主要有三：白細胞崩解釋放的DNA、壞死組織特別是腫組織釋放入血液的DNA和染上病毒、細菌的DNA。近幾年來，隨著基因診斷技術(shù)的發(fā)展，游離DNA的應(yīng)用價值越來越大，如優(yōu)生篩查、腫早期診斷、遺傳病檢測和病原體染上基因檢測等。但血液中游離DNA含量一般較低，片段較小，不易提取，這很大程度影響了游離核酸的基因檢測和各種研究的開展。DNA提取的成功與否對于后續(xù)實驗的結(jié)果有著重要的影響。佛山骨膜RNA提取

microRNA富集方法（只提取microRNA，不包含>200nt其它總RNA成份。）1.按照前面標準操作步驟1－5操作，直到得到上清。2.較精確估計上清體積（約600μl），加入等體積70％乙醇（請先檢查是否已加入無水乙醇!）（必須是室溫的），渦旋或者吹打充分混勻，不要離心。3.將混合物加入一個吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm離心30-60秒，收集濾過物。將濾過物從收集管轉(zhuǎn)移到一個新的離心管后，把吸附柱子放回空的收集管內(nèi)，再加入剩下的混合物，離心，收集濾過物。合并兩次濾過物，計算體積。此時，濾過物含有microRNA,吸附柱子上面是除去了microRNA的總RNA（不包含microRNA），如果需要，可以按照前面標準操作步驟8－11操作漂洗，洗脫回收得到去除了microRNA的總RNA。佛山骨膜RNA提取RNA提取需要使用酶或化學(xué)試劑來裂解細胞膜和核膜。

DNA提取方法：一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速離心后取上清，所得DNA大小為100-150kb二.甲酰胺解聚法：破碎細胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。三.玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細胞，將裂解物鋪于乙醇上，然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。四.異丙醇沉淀法：基本同1法，只用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在異丙醇中可溶狀態(tài)）五.表面活性劑快速制備法：用TritonX-100A或NP40表面活性劑破碎細胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。六.加熱法快速制備：加熱96℃-100℃，五分鐘，然后離心后取上清，可用于PCR反應(yīng)。七.堿變性快速制備：先用NaOH作用20分鐘，再加HCI中和，離心后取上清，含少量DNA。

DNA提取的幾種方法介紹，以稀鹽酸溶液提取DNA時，加入適量去污劑，如SDS可有助于蛋白質(zhì)與DNA的分離.在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA的降解作用，在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉，并稱SSC溶液，提取DNA。陰離子去污劑法：用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質(zhì)變性，可以直接從生物材料中提取DNA.由于細胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵結(jié)合，因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵，所以常用陰離子去污劑提取DNA。DNA提取需要通過添加RNase消化RNA。

DNA提取鑒定方法：分光光度法：在260nm和280nm處測定DNA溶液的光吸收，A260與A280之比應(yīng)在1.75-1.80之間。低于此值表明制備物中殘留蛋白質(zhì)成分較高或含有酚，高于此值表明有RNA的殘留。凝膠電泳分析：影響瓊脂糖凝膠電泳DNA遷移率的因素：①DNA分子大小，DNA分子越大遷移速度越慢。②遷移率與瓊脂糖濃度成反比。③DNA構(gòu)象：a.相同分子量的超螺旋環(huán)狀（Ⅰ型），切口環(huán)狀（Ⅱ型），線狀（Ⅲ型）DNA，以不同速率通過凝膠。b.一般情況下，遷移率Ⅰ型>Ⅲ型>Ⅱ型。④電壓：遷移率與所加電壓成正比，但是電壓過大有效分離范圍減小。⑤電場方向：單一方向速率均等，改變方向，極大分子DNA遷移更慢。通過脈沖電場凝膠電泳分離極大DNA。DNA提取的過程中需要注意消毒和安全措施，以避免污染和傷害。深圳血漿DNA提取純度高

RNA提取后，可以使用凝膠電泳或分光光度法檢查RNA的質(zhì)量和濃度。佛山骨膜RNA提取

骨組織RNA提取之其它骨組織破碎方法：a.取100mg骨組織加入1ml預(yù)熱的裂解液CLB（已加有P的LANTaid）高速均質(zhì)儀粉碎勻漿?；蛘呷?00mg液氮冷凍包埋切片粉碎的骨頭加入裂解液CLB（已加有P的LANTaid）粉碎勻漿。b.立刻接操作步驟的步驟。c.短時放回65°C水浴中（10min），中間偶爾顛倒1-2次幫助裂解。將裂解物4°C13,000rpm離心10分鐘，沉淀不能裂解的碎片。取裂解物上清（在不超過基因組DNA清理柱能力的情況下可以取更多的上清，這樣可以提高產(chǎn)量）轉(zhuǎn)到一個新離心管。加入上清體積一半的無水乙醇(0.5體積)，此時可能出現(xiàn)沉淀，但是不影響提取過程，立即吹打混勻，不要離心。若上清表面有漂浮物，用吸頭挑開吸取下面液體即可。將混合物(每次小于720μl，多可以分兩次加入)加入一個基因組清理柱中，（清理柱放入收集管中）13,000rpm離心2分鐘，棄掉廢液。佛山骨膜RNA提取

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