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溫始·未來(lái)生活新定義 —— 智能調(diào)濕新風(fēng)機(jī)
秋季舒適室內(nèi)感,五恒系統(tǒng)如何做到?
大眾對(duì)五恒系統(tǒng)的常見(jiàn)問(wèn)題解答?
五恒空調(diào)系統(tǒng)基本概要
如何締造一個(gè)舒適的室內(nèi)生態(tài)氣候系統(tǒng)
舒適室內(nèi)環(huán)境除濕的意義
暖通發(fā)展至今,怎樣選擇當(dāng)下產(chǎn)品
怎樣的空調(diào)系統(tǒng)ZUi值得你的選擇?
五恒系統(tǒng)下的門(mén)窗藝術(shù):打造高效節(jié)能與舒適并存的居住空間
外泌體的表征分析:Zeta電位:通過(guò)電泳光散射(ELS)測(cè)量的Zeta電位測(cè)量粒子在電泳場(chǎng)中的速度。Zeta電位是膠體分散體穩(wěn)定性的指標(biāo)(非常值)和囊泡表面電荷的量度(+或-符號(hào))。電子顯微鏡分析:對(duì)于電子顯微鏡分析,外泌體制劑在PBS緩沖液中按1:10稀釋,隨后在等體積的4%(w/v)多聚甲醛和1%(v/v)戊二醛中固定5分鐘。然后將樣品置于formvar-carbon涂層的600目銅網(wǎng)格上,并在室溫下干燥5分鐘。隨后將樣品在乙酸雙氧鈾溶液(2%水溶液)中進(jìn)行對(duì)比,并在電子顯微鏡(Jeol1230TEM)下觀察,加速電壓為80kV,并連接到數(shù)碼相機(jī)進(jìn)行觀察。外泌體的純化可以通過(guò)單顆粒色譜等技術(shù)實(shí)現(xiàn)。石家莊外泌體測(cè)序
外泌體分離方法之尺寸排阻色譜分離法:尺寸排阻色譜(SEC)用于根據(jù)尺寸而非分子量分離大分子。該技術(shù)應(yīng)用了一種填充有多孔聚合物珠子的柱子,該珠子含有多個(gè)孔和隧道。分子根據(jù)它們的直徑穿過(guò)珠子。小半徑分子通過(guò)色譜柱的孔遷移需要更長(zhǎng)的時(shí)間,而大分子從色譜柱中洗脫得較早。尺寸排阻色譜可以精確分離大分子和小分子。此外,該方法可以應(yīng)用不同的洗脫溶液。與離心機(jī)離心方法相比,色譜分離具有較多的優(yōu)勢(shì),因?yàn)橥ㄟ^(guò)色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,避免了因剪切力所造成的囊泡結(jié)構(gòu)改變。目前,SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中存在的外泌體的技術(shù)。此外,SEC方法與超濾相結(jié)合已用于分離和分析尿源性外泌體。此外,流場(chǎng)-流分餾結(jié)合紫外分析儀和光散射檢測(cè)器已被應(yīng)用于分析外泌體的大小和純度。流場(chǎng)-流分餾結(jié)合拋物線和交叉流來(lái)分離外泌體。獲得的外泌體已通過(guò)電子顯微鏡和質(zhì)譜檢測(cè)。上海組織提取外泌體分離供貨商外泌體的高純度分離是外泌體研究的基礎(chǔ)。
外泌體是由正常或病理?xiàng)l件下的細(xì)胞所分泌,含有各種膜蛋白和胞質(zhì)蛋白。因此,外泌體蛋白也可以作為生物試劑潛在地用于蛋白診斷。外泌體中發(fā)現(xiàn)的十種蛋白質(zhì)主要包括熱休克蛋白8(HSPA8)、CD63抗原(CD63)、β肌動(dòng)蛋白(ACTB)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、烯醇化酶1α、細(xì)胞溶質(zhì)熱休克蛋白90α(HSP90AA1)、CD9、CD81、酪氨酸3-單加氧酶/色氨酸5-單加氧酶打開(kāi)蛋白、zeta多肽(YWHAZ)、肌肉酸激酶(PKM2)。外泌體蛋白屬于各種功能組,例如四跨膜蛋白(CD9、CD63和CD81)、熱休克蛋白(HSC70和HSC90)、膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(GTPases)和脂質(zhì)結(jié)合蛋白。外泌體標(biāo)記物及其在免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)和ELISA等抗體應(yīng)用中的常用的單克隆抗體。
差速離心法分離外泌體的實(shí)驗(yàn)原理:離心管內(nèi)粒子的速度,由三種力(離心力、阿基米德浮力和斯托克斯粘性阻力)的平衡決定,如:其中g(shù)eff為離心力(加速度),R為旋轉(zhuǎn)半徑,即粒子距旋轉(zhuǎn)軸的距離,ω為旋轉(zhuǎn)角頻率,d為粒子直徑,ρ為質(zhì)量粒子的密度和ρsolv和η分別是介質(zhì)的密度和粘度。在固定的離心條件(轉(zhuǎn)速和介質(zhì)成分)下,粒子速度完全由粒子的形態(tài)和密度決定。密度高于介質(zhì)密度的粒子沿離心力“向下”運(yùn)動(dòng),而比介質(zhì)輕的粒子沿與離心力相反的方向“上浮”。對(duì)于相似的密度,較大的粒子遷移得更快。因此,在生物學(xué)中,離心主要用于按大?。ú钏俸退俾蕝^(qū)帶離心)或按密度(等密度離心)分離不同的物體。在這項(xiàng)研究中,我們專注于使用差速離心按大小進(jìn)行顆粒分級(jí)。外泌體分離和分析的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化將有助于外泌體研究領(lǐng)域的進(jìn)一步發(fā)展。
分離外泌體的方法之微流控分離:基于微流體的外泌體分離可以包括用于外泌體捕獲的免疫親和方法,納米多孔膜篩分方法或微柱上的納米線用于外泌體捕獲。所有三個(gè)系統(tǒng)都需要具有粘彈性分析和電操作的芯片才能進(jìn)行外泌體分離過(guò)程。外泌體的特異性很高,采用基于微流控芯片的免疫親和捕獲方法。尺寸范圍在40-100nm之間的外泌體被這種微流體芯片特異性地捕獲,在外泌體分離和定量方面的益處。篩分方法可用于通過(guò)壓力或通過(guò)電泳從全血中過(guò)濾外泌體,壓力的利用使分離時(shí)間更短,電場(chǎng)導(dǎo)致高外泌體純度。特異性、可重復(fù)性、低分離時(shí)間和更低的分離成本是基于微流體的外泌體分離的一些優(yōu)點(diǎn)。外泌體膜表面富含糖基化蛋白和糖基化脂質(zhì),這種糖基化在外泌體相互作用和定位中具有重要作用。石家莊外泌體測(cè)序
外泌體與生物體的免疫應(yīng)答密切相關(guān),通過(guò)它們攜帶的抗原和免疫調(diào)節(jié)分子對(duì)免疫系統(tǒng)起到調(diào)節(jié)作用。石家莊外泌體測(cè)序
外泌體分離方法之親和層析分離法:在親和層析分離法方面,主要使用凝集素和合成Vn(venceremin)肽。凝集素將結(jié)合存在于外泌體表面的糖基化蛋白質(zhì),從而使外泌體沉淀。Vn肽分離技術(shù)基于其對(duì)含有HSP的細(xì)胞外顆粒的高親和力。然而,這種方法比較容易使提取物被膜表面上含有上述標(biāo)記物的細(xì)胞和其他顆粒污染。外泌體分離方法之介電泳分離法:介電泳分離法主要利用不同大小的粒子在不均勻電場(chǎng)中的位置差異。外泌體被吸引到高電區(qū)域,而較大的顆粒將位于低電區(qū)域。該方法速度快,適合用于高通量篩選,但缺點(diǎn)是需要加熱。石家莊外泌體測(cè)序
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