microRNA提取方法及步驟：近年來(lái)對(duì)RNA干擾和調(diào)節(jié)性小RNA的普遍研究迫切需要一種能有效提取15--30核苷酸左右大小RNA（包括siRNA和miRNA）的方法。但是傳統(tǒng)的RNA提取方法如硅膠膜不能有效吸附回收，酚/胍抽提和乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA。本方法采用獨(dú)特的裂解液/β-巰基乙醇迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶，強(qiáng)烈有機(jī)抽提去除蛋白和DNA，RNA包括微小分子RNA吸附于離心柱內(nèi)特殊硅基質(zhì)膜，再通過(guò)一系列快速的漂洗－離心的步驟,漂洗液將細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)進(jìn)一步去除，較后低鹽的洗脫液將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。DNA提取的技術(shù)不斷發(fā)展，新的方法和設(shè)備不斷涌現(xiàn)。長(zhǎng)沙快速DNA提取

RNA提取和DNA提取實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)問(wèn)題及過(guò)程中的注意事項(xiàng)：低純度：如果提取的DNA被蛋白質(zhì)污染（低260/280），那么您可能開(kāi)始時(shí)樣品過(guò)多，而蛋白質(zhì)沒(méi)有完全去除或溶解。如果DNA的260/230比率不佳，則問(wèn)題通常是結(jié)合或洗滌緩沖液中的鹽分。確保使用較高質(zhì)量的乙醇來(lái)制備洗滌緩沖液，如果問(wèn)題仍然存在，請(qǐng)?jiān)俅蜗礈焐V柱。與其他樣品相比，一些樣品含有更多的抑制劑。環(huán)境樣品特別容易出現(xiàn)純度問(wèn)題，因?yàn)楦迟|(zhì)在提取過(guò)程中會(huì)被溶解。腐殖質(zhì)的行為與DNA相似，很難從硅膠柱中去除。成都無(wú)需液氮研磨RNA提取RNA提取的關(guān)鍵是避免RNA的降解和污染。

DNA提取的幾種方法介紹，以稀鹽酸溶液提取DNA時(shí)，加入適量去污劑，如SDS可有助于蛋白質(zhì)與DNA的分離.在提取過(guò)程中為抑制組織中的DNase對(duì)DNA的降解作用，在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉，并稱(chēng)SSC溶液，提取DNA。陰離子去污劑法：用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質(zhì)變性，可以直接從生物材料中提取DNA.由于細(xì)胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵結(jié)合，因?yàn)殛庪x子去污劑能夠破壞這種價(jià)鍵，所以常用陰離子去污劑提取DNA。

什么是RNA提??？RNA提取是指從樣品中純化RNA的過(guò)程。RNA提取的常規(guī)方法稱(chēng)為硫氰酸胍-苯酚-氯仿提取。Guanidiniumthiocyanate使蛋白質(zhì)變性。此外，它破壞水分子的氫鍵并用作離液劑。RNA提取中使用一種特殊試劑，稱(chēng)為三試劑。它含有硫氰酸胍、苯酚和乙酸鈉。RNA提取的基本步驟的目的與DNA提取的目的相似。1.用冰冷的PBS洗滌細(xì)胞以維持細(xì)胞的滲透壓。2.吸出細(xì)胞并用Tri-reagent勻漿樣品。3.加入氯仿并搖勻。4.離心可能會(huì)出現(xiàn)三層。頂層是透明的水層。中間層或界面包含沉淀的DNA。底層是有機(jī)層，呈粉紅色。5.除去水層并加入異丙醇。離心可能會(huì)產(chǎn)生沉淀。6.用75%乙醇清洗沉淀?？諝飧稍镱w粒。7.用TE緩沖液或水溶解沉淀。DNA提取是生物學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域中常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一。

DNA提取鑒定方法：分光光度法：在260nm和280nm處測(cè)定DNA溶液的光吸收，A260與A280之比應(yīng)在1.75-1.80之間。低于此值表明制備物中殘留蛋白質(zhì)成分較高或含有酚，高于此值表明有RNA的殘留。凝膠電泳分析：影響瓊脂糖凝膠電泳DNA遷移率的因素：①DNA分子大小，DNA分子越大遷移速度越慢。②遷移率與瓊脂糖濃度成反比。③DNA構(gòu)象：a.相同分子量的超螺旋環(huán)狀（Ⅰ型），切口環(huán)狀（Ⅱ型），線(xiàn)狀（Ⅲ型）DNA，以不同速率通過(guò)凝膠。b.一般情況下，遷移率Ⅰ型>Ⅲ型>Ⅱ型。④電壓：遷移率與所加電壓成正比，但是電壓過(guò)大有效分離范圍減小。⑤電場(chǎng)方向：?jiǎn)我环较蛩俾示?，改變方向，極大分子DNA遷移更慢。通過(guò)脈沖電場(chǎng)凝膠電泳分離極大DNA。DNA提取的步驟包括細(xì)胞破碎、DNA分離、純化和洗滌等。長(zhǎng)沙快速DNA提取

DNA提取的原則，核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過(guò)高濃度的金屬離子。長(zhǎng)沙快速DNA提取

核酸提取，是分子生物學(xué)中較常見(jiàn)的基本操作，一般分為DNA提取與RNA提取，提取核酸的質(zhì)量直接影響后續(xù)的檢測(cè)工作，暫對(duì)常見(jiàn)的問(wèn)題進(jìn)行了一個(gè)總結(jié)。DNA提?。?.A260/280比值較低？或者A260/280比值較高？用水作為洗脫液比較偏低，或者蛋白質(zhì)殘留，但如果操作過(guò)程中使用了苯酚，則更可能是苯酚殘留。而比較高可能是大量RNA殘留，沒(méi)有使用RNaseA，或RNaseA活性下降。A260值提示的含量與電泳檢測(cè)時(shí)提示的含量有可見(jiàn)的誤差則為苯酚殘留。長(zhǎng)沙快速DNA提取

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