外泌體分離方法之基于聚合物的沉淀法：基于聚合物的沉淀技術(shù)通常包括將生物流體與含聚合物的沉淀溶液混合、4℃孵育和低速離心。用于基于聚合物的沉淀的較常見(jiàn)聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。這種聚合物的沉淀可以對(duì)分離的外泌體產(chǎn)生溫和影響而且可以產(chǎn)生中性的pH值。由此，出現(xiàn)了幾種常見(jiàn)的外泌體試劑盒：比如：SystemBiosciences,MountainView,CA,ExoQuick等。研究表明，使用ExoQuick方法可以快速執(zhí)行，無(wú)需額外設(shè)備，只需用高速離心機(jī)進(jìn)行超速離心可以獲得高產(chǎn)量的外泌體。但是此方法的缺點(diǎn)是：非外泌體材料對(duì)外泌體分離物的污染仍然是基于聚合物的分離方法的一個(gè)問(wèn)題。此外，分離物中的聚合物可能會(huì)干擾下游分析。外泌體攜帶的小分子物質(zhì)（如ATP、GTP等）參與細(xì)胞生命活動(dòng)、代謝、細(xì)胞生長(zhǎng)和分化等生物學(xué)進(jìn)程。濟(jì)南上清外泌體供貨商

外泌體分離方法之尺寸排阻色譜分離法：尺寸排阻色譜(SEC)用于根據(jù)尺寸而非分子量分離大分子。該技術(shù)應(yīng)用了一種填充有多孔聚合物珠子的柱子，該珠子含有多個(gè)孔和隧道。分子根據(jù)它們的直徑穿過(guò)珠子。小半徑分子通過(guò)色譜柱的孔遷移需要更長(zhǎng)的時(shí)間，而大分子從色譜柱中洗脫得較早。尺寸排阻色譜可以精確分離大分子和小分子。此外，該方法可以應(yīng)用不同的洗脫溶液。與離心機(jī)離心方法相比，色譜分離具有較多的優(yōu)勢(shì)，因?yàn)橥ㄟ^(guò)色譜分離的外泌體不受剪切力的影響，避免了因剪切力所造成的囊泡結(jié)構(gòu)改變。目前，SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中存在的外泌體的技術(shù)。此外，SEC方法與超濾相結(jié)合已用于分離和分析尿源性外泌體。此外，流場(chǎng)-流分餾結(jié)合紫外分析儀和光散射檢測(cè)器已被應(yīng)用于分析外泌體的大小和純度。流場(chǎng)-流分餾結(jié)合拋物線和交叉流來(lái)分離外泌體。獲得的外泌體已通過(guò)電子顯微鏡和質(zhì)譜檢測(cè)。天津血液外泌體分離生產(chǎn)商外泌體不是干細(xì)胞，是干細(xì)胞較精華的部分。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過(guò)濾離心，這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí)，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問(wèn)題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時(shí)，量少。

CHO細(xì)胞外泌體的分離和表征：CHO細(xì)胞是一種普遍用于生物制藥蛋白質(zhì)生產(chǎn)的宿主。CHO細(xì)胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術(shù)從分批培養(yǎng)中分離和富集細(xì)胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過(guò)多種方法來(lái)檢測(cè)和表征分離的囊泡，這些分析包括動(dòng)態(tài)光散射(DLS)和Zeta電位測(cè)量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標(biāo)記物分析、RNA和脂質(zhì)分析等。根據(jù)制造商的指南，使用TEI總外泌體分離試劑盒（Invitrogen）從培養(yǎng)基中分離外泌體。將細(xì)胞培養(yǎng)基以2000×g離心30分鐘以去除細(xì)胞和任何碎片；隨后將上清液小心移至離心管管中，加入0.5倍體積的TEI試劑，充分混合并在4°C下孵育過(guò)夜。然后將樣品在4°C下以10,000×g離心1小時(shí)，然后在棄去上清液后，將富含外泌體的顆粒重新懸浮在75μlPBS緩沖液中。然后將樣品儲(chǔ)存在-20°C下，直到需要進(jìn)行后續(xù)分析。發(fā)現(xiàn)外泌體轉(zhuǎn)移可能為疾病治著和預(yù)后提供新的治著策略。

當(dāng)外泌體在1983年頭次被發(fā)現(xiàn)后，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對(duì)其生物來(lái)源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號(hào)的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來(lái)源的細(xì)胞類型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、疙瘩侵襲等方方面面。有研究表明疙瘩來(lái)源的外泌體參與到疙瘩細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進(jìn)了疙瘩的生長(zhǎng)與侵襲。優(yōu)化外泌體分離方法可以提高分離效率和分離精度。濟(jì)南上清外泌體供貨商

外泌體的組成成分包括脂肪、糖、蛋白質(zhì)等，對(duì)其組成成分的分析有助于了解其生物學(xué)功能和生理調(diào)節(jié)作用。濟(jì)南上清外泌體供貨商

通過(guò)對(duì)外泌體以及外泌體提取相關(guān)生物試劑的研究發(fā)現(xiàn)：外泌體除了蛋白質(zhì)，外泌體還含有RNA。外泌體miRNA可用于各種疙瘩的判斷。目前有八種miRNA被確定為卵巢病的標(biāo)志物。此外，據(jù)報(bào)道，肺腺病者的血清和疙瘩樣本中的miRNA會(huì)增加。前列腺病的血清中外泌體miRNAmiR-141和miR-375水平會(huì)升高。研究表明，外泌體miRNA-21的血清水平升高和miRNA-1246在ESCC群體中凸現(xiàn)。有趣的是，外泌體miRNA可能是腎纖維化和心血管癥的潛在判斷標(biāo)志物。對(duì)于進(jìn)行型退行型疾病，在阿爾茨海默者的生物體液中發(fā)現(xiàn)了幾種miRNA，如：miR-9、miR-107、miRNA-128、miRNA134和miRNA-137miRNA124的高表達(dá)水平。濟(jì)南上清外泌體供貨商

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