外泌體的構成:除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白(包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9)、熱休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33(結腸上皮細胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素(不成熟的樹突狀細胞)。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶(烯醇化酶1,醛縮酶1,PKM2,PGK1,PDIA3,GSTP1,DPP4,AHCY,TPL1,抗氧化蛋白,P4HB,LDH,親環(huán)素A,FASN,MDH1和CNP)、核糖體蛋白(RPS3)、信號轉導因子(黑色素瘤分化相關因子,ARF1,CDC42,人類紅細胞膜整合蛋白,SLC9A3R1)、粘附因子(MFGE8、整合素)、細胞骨架蛋白以及泛素等。外泌體與胚胎學密切相關,參與人類胚胎發(fā)育和胚胎起始過程中的各種調(diào)節(jié)作用。南京血液RNA外泌體價格
為了正確使用外泌體作為DDS,我們必須考慮外泌體的成分和它們的形成途徑。然后,還應描述外泌體親和力和細胞攝取的特征。外泌體載體表現(xiàn)出不同的目的和功能,這要歸功于外泌體作為基本的轉運體本身就具有出色的特性。這可以用于細胞靶向,也可以作為藥物的額外增強。迄今為止,ExoCarta在外泌體中發(fā)現(xiàn)了大約10,000種蛋白質(zhì)、3500種mRNA和超過1100種不同的脂質(zhì)。對于系統(tǒng)審查,出現(xiàn)了許多很棒的數(shù)據(jù)庫,例如Vesiclepedia和ExoCarta,其中描述了外泌體分離程序和來源以及已識別的載體。煙臺組織提取外泌體分離企業(yè)外泌體可以作為一種新型的藥物輸送系統(tǒng),利用其高度選擇性的靶向性,有效地提高藥物的生物利用度。
分離外泌體的方法之微流控分離:基于微流體的外泌體分離可以包括用于外泌體捕獲的免疫親和方法,納米多孔膜篩分方法或微柱上的納米線用于外泌體捕獲。所有三個系統(tǒng)都需要具有粘彈性分析和電操作的芯片才能進行外泌體分離過程。外泌體的特異性很高,采用基于微流控芯片的免疫親和捕獲方法。尺寸范圍在40-100nm之間的外泌體被這種微流體芯片特異性地捕獲,在外泌體分離和定量方面的益處。篩分方法可用于通過壓力或通過電泳從全血中過濾外泌體,壓力的利用使分離時間更短,電場導致高外泌體純度。特異性、可重復性、低分離時間和更低的分離成本是基于微流體的外泌體分離的一些優(yōu)點。
當外泌體在1983年頭次被發(fā)現(xiàn)后,其被認為是細胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構成及運輸、細胞間信號的傳導以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、疙瘩侵襲等方方面面。有研究表明疙瘩來源的外泌體參與到疙瘩細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導致大量新生血管的生成,促進了疙瘩的生長與侵襲?,F(xiàn)有的外泌體分離方法可能存在樣品丟失和樣品污染的問題。
差速離心法分離外泌體的實驗原理:與等密度和梯度離心相反,差速離心從離心管內(nèi)顆粒的均勻初始分布開始。在開始一輪離心過程中,位于管底部附近的一部分目標小顆粒不可避免地與較大顆粒共同沉淀。這種共沉淀導致較小顆粒的產(chǎn)量降低。然而,選擇大顆粒,起初位于管半月板附近,在開始一輪離心過程中可能沒有足夠的時間到達管底,從而污染較后一個離心步驟產(chǎn)生的小顆粒顆粒。顯然,交叉污染的程度取決于不同粒子群的相對沉降速度和離心條件。在被分離的粒子的沉降速度之間存在顯著(數(shù)量級)差異的情況下,可以有效地優(yōu)化差速離心協(xié)議以獲得目標粒子群的高產(chǎn)量和足夠純度。此外,當不同顆粒部分之間的沉降速率只存在微小差異時,優(yōu)化過程不太成功。在這些情況下,取決于離心條件。分離前的細胞培養(yǎng)和收集條件也能對外泌體分離結果產(chǎn)生重要影響。西安腦脊液外泌體分離報價
優(yōu)化外泌體分離方法可以提高分離效率和分離精度。南京血液RNA外泌體價格
外泌體衍生物miRNA的重要應用:miRNA的靈敏生物標志物測定法主要用于檢測早期階段(0-1)疙瘩的存在。除了基于組織活檢的當前研究外,循環(huán)miRNA的研究是生物標志物研究中一個新的擴展領域,因為它們具有所有特征(miRNA分析、診斷、預后、治著反應和預測性生物標志物),可在液體活檢(生物體液)中檢測到,并且不需要對病人進行健康和疙瘩活檢。血液樣本等體液分析檢測使醫(yī)生和研究人員能夠及早了解病癥的發(fā)展狀況。miRNA被稱為基因表達的基本調(diào)節(jié)因子,尤其是在病癥中,并且在疙瘩發(fā)生、轉移和對各種療法的耐藥性中發(fā)揮重要作用。據(jù)報道,哺乳動物細胞每個細胞含有大約100,000個內(nèi)源性miRNA分子。據(jù)估計,單個外泌體較多可攜帶約500個miRNA拷貝。正常人血液中的外泌體量在病癥患者中約為109個外泌體/ml。南京血液RNA外泌體價格
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