當(dāng)外泌體在1983年頭次被發(fā)現(xiàn)后，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對(duì)其生物來(lái)源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號(hào)的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來(lái)源的細(xì)胞類型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、疙瘩侵襲等方方面面。有研究表明疙瘩來(lái)源的外泌體參與到疙瘩細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進(jìn)了疙瘩的生長(zhǎng)與侵襲。外泌體分離的方法會(huì)影響外泌體樣品的質(zhì)量和數(shù)量。上清外泌體生產(chǎn)商

外泌體的表征方法之微流體分析技術(shù)：微流體技術(shù)在外泌體研究方面也起著推動(dòng)作用。微流體技術(shù)不只提供了高質(zhì)量、高特異性的數(shù)據(jù)，并且試劑消耗量低，通量高.基于微流體技術(shù)的研究方法需要結(jié)合使用微流控芯片，微流控芯片通常由玻璃基和聚二甲基硅氧烷(PDMS)膜制成，包含許多尺寸適合所分析樣品的微通道。主要區(qū)別在于芯片的內(nèi)表面，可以通過(guò)多種方式對(duì)其進(jìn)行功能化，例如通過(guò)涂層、多層沉積、電沉積和蝕刻.目前研究中針對(duì)不同的微流控表征方法，也制造了不同類型的微芯片，包括免疫芯片、磁性芯片和電化學(xué)芯片。外泌體及其蛋白質(zhì)也可以通過(guò)比色法（標(biāo)記抗體/ELISA）、直接熒光染色（DiO染料）、電化學(xué)性質(zhì)變化和光學(xué)特別方法進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于結(jié)果評(píng)估，還需要額外的設(shè)備，例如讀板器或熒光顯微鏡等。成都外泌體分離測(cè)序外泌體的定量檢測(cè)和分析可作為疾病診斷和治著中的新型指標(biāo)。

差速離心法分離外泌體的實(shí)驗(yàn)原理：任何外泌體分離方案旨在獲得產(chǎn)量合理且不受細(xì)胞碎片、細(xì)胞器和凋亡小體污染的外泌體群體，理想情況下，不含其他類型的細(xì)胞外囊泡、蛋白質(zhì)及其聚集體。由于大小差異很大，將外泌體與細(xì)胞、細(xì)胞碎片和大囊泡分離相對(duì)容易。巨大的挑戰(zhàn)是從小的脫落囊泡中純化外泌體，因?yàn)樗鼈兊拇笮》浅Ｏ嗨?。通過(guò)差速離心分離這些細(xì)胞外囊泡既困難又低效。所以需要根據(jù)轉(zhuǎn)子的特性和要分離的顆粒的特性，來(lái)對(duì)離心參數(shù)應(yīng)進(jìn)行調(diào)整。因?yàn)殡x心速度與粒子的旋轉(zhuǎn)半徑成正比，所以離心運(yùn)動(dòng)加速。粒子的徑向坐標(biāo)隨時(shí)間t呈指數(shù)增長(zhǎng)。

外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用：miRNA是一類主要的小分子、單鏈、非編碼RNA分子，其成熟形式的長(zhǎng)度在20到22個(gè)核苷酸(NT)之間，在幾乎所有生物途徑中發(fā)揮重要作用，包括細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化、免疫反應(yīng)，細(xì)胞凋亡，代謝和疙瘩發(fā)生。外泌體在體液中的主要作用是可以保護(hù)miRNA，防止其生物分子在非生理?xiàng)l件下（多次凍融循環(huán)、長(zhǎng)期儲(chǔ)存和極端pH）降解。據(jù)報(bào)道，外泌體來(lái)源的miRNA在-20°C下可保持穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)5年，并且對(duì)凍融循環(huán)具有抵抗力.這也使外泌體成為病癥和其他疾病的潛在生物標(biāo)志物。miRNA與包括病癥在內(nèi)的許多疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，并且還被證明被遠(yuǎn)端或附近的受體細(xì)胞吸收作為外泌體中的貨物，作為細(xì)胞間通訊的一種方法，可能會(huì)影響發(fā)病機(jī)制。所以，外泌體可以被看作是miRNA轉(zhuǎn)移至目標(biāo)受體細(xì)胞的載體。外泌體與生物體的免疫應(yīng)答密切相關(guān)，通過(guò)它們攜帶的抗原和免疫調(diào)節(jié)分子對(duì)免疫系統(tǒng)起到調(diào)節(jié)作用。

分離外泌體的方法之超速離心：離心是一種利用不同的離心力根據(jù)顆粒成分的密度、大小和形狀沉淀顆粒成分的過(guò)程。超速離心是一種離心過(guò)程，較多使用6×106g離心力，有助于隔離更小的組件，例如，核糖體、蛋白質(zhì)、病毒、外泌體和其他EV。加速度（g）、旋轉(zhuǎn)半徑、樣品粘度和沉降路徑長(zhǎng)度是有效分離外泌體的決定因素。20至250nm之間的粒徑分?jǐn)?shù)可以通過(guò)超速離心分離，隨后的離心或尺寸排阻過(guò)程產(chǎn)生所需的外泌體。超速離心法被認(rèn)為是外泌體分離的金標(biāo)準(zhǔn)方法，外泌體需要1×105至2×105g離心1小時(shí)。在順序離心過(guò)程中，MVs、凋亡小體、細(xì)胞碎片、細(xì)胞和其他具有較高浮力密度的顆粒在外泌體之前沉淀。然而，必須注意的是，由于密度和大小重疊，大多數(shù)當(dāng)前方法只能富集小EV（即外泌體）。外泌體分離方法的優(yōu)化需要對(duì)比不同方法的純度和收率。西安外泌體分離穩(wěn)定性好

外泌體與神經(jīng)系統(tǒng)的關(guān)系復(fù)雜，通過(guò)在神經(jīng)元間的轉(zhuǎn)移，參與多種神經(jīng)疾病的發(fā)生和病理機(jī)制的形成。上清外泌體生產(chǎn)商

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：一是色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不普遍。二是微流控分離法，該方法通過(guò)負(fù)壓及震蕩等機(jī)械原理分離外泌體，產(chǎn)量純度均具有較大幅度提高，但需要特定設(shè)備配合。外泌體分離方法之納米粒徑分析法：確定性橫向位移依賴于顆粒流動(dòng)路徑的變化，而顆粒流動(dòng)路徑取決于顆粒尺寸。這種方法雖然比較簡(jiǎn)單，但是需要使用掃描電鏡技術(shù)、動(dòng)態(tài)光散射技術(shù)、納米粒子跟蹤分析技術(shù)、單粒子干涉反射成像傳感器（SP-IRIS）技術(shù)等。對(duì)于外泌體大小、形態(tài)、外泌體的濃度、zeta電位等分析也可以使用粒度分析儀。上清外泌體生產(chǎn)商

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