對(duì)于外泌體的標(biāo)記和鑒定，獲得外泌體之后，如何對(duì)其進(jìn)行鑒定又是一個(gè)困擾研究者的問(wèn)題。國(guó)際細(xì)胞外囊泡學(xué)會(huì)(ISEV)在2014年提議，對(duì)于分離獲得的外泌體需要從三個(gè)層面進(jìn)行鑒定：WB檢測(cè)外泌體標(biāo)志蛋白表達(dá)情況：外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)目缒さ鞍准易?CD63/CD81/CD9)、熱休克蛋白家族(HSP60/HSP70/HSPA5/CCT2/HSP90)和一些細(xì)胞特異性蛋白。其中CD63/TSG101是較常用到的外泌體標(biāo)志物。TEM鑒定外泌體形態(tài)：電鏡具有較高的分辨率，可以直接觀察到樣品中外泌體的形態(tài)。NTA檢測(cè)外泌體粒徑及濃度：TEM可以觀察外泌體的形態(tài)學(xué)特征，但無(wú)法體現(xiàn)樣本中所有外泌體的粒徑分布情況及整體濃度。NTA(NanoparticleTrackingAnalysis)技術(shù)可快速準(zhǔn)確地分析外泌體的粒徑分布及濃度，為外泌體鑒定提供有力證據(jù)。外泌體可以作為一種新型的藥物輸送系統(tǒng)，利用其高度選擇性的靶向性，有效地提高藥物的生物利用度。青島腦脊液外泌體蛋白檢測(cè)

外泌體的表征方法之光學(xué)方法：目前，光學(xué)方法是外泌體表征的主要方法，即動(dòng)態(tài)光散射(DLS)、多角度光散射(MALS)和納米粒子跟蹤分析(NTA)。這些方法允許對(duì)尺寸（DLS0.5–200nm；MALS10–500nm；NTA10–1000nm）、尺寸分布和濃度進(jìn)行高分辨率測(cè)量。DLS和MALS的結(jié)合增加了測(cè)量范圍(0.5–500nm)和精度。光學(xué)方法比較受歡迎的，但缺點(diǎn)是靈敏度低、試劑消耗高以及需要昂貴的設(shè)備。在使用納米粒子跟蹤分析NTA方法過(guò)程中，熒光染料的加入也提高了分辨率，并允許通過(guò)使用熒光標(biāo)記來(lái)表征表面免疫表型。從而確定標(biāo)記物存在。青島腦脊液外泌體蛋白檢測(cè)外泌體可通過(guò)特定的組裝和功能修飾，提高其對(duì)宿主細(xì)胞的選擇性靶向性。

使用差速離心法分離外泌體主要需要注意的是轉(zhuǎn)子的選擇。“擺動(dòng)桶”(SW)轉(zhuǎn)子和“定角”(FA)轉(zhuǎn)子，這些轉(zhuǎn)子的幾何形狀根本不同，因此沉降特性也不同。這些轉(zhuǎn)子之間的主要區(qū)別在于：FA轉(zhuǎn)子，與旋轉(zhuǎn)半徑相比，沉積顆粒的較大路徑長(zhǎng)度通常較小，允許近似恒定遷移率并簡(jiǎn)化描述。然而，第二個(gè)區(qū)別是圓形FA管的水平橫截面是橢圓形的，不同粒子的路徑長(zhǎng)度根據(jù)軌跡與橢圓長(zhǎng)軸的距離而不同。由于較短的路徑長(zhǎng)度，外面顆?？赡艹两档酶?，需要根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇。

分離外泌體的方法之靜水過(guò)濾透析：它主要有助于將整個(gè)EV從高度稀釋的溶液中分離出來(lái)，而無(wú)需超速離心過(guò)程。280Musante等人展示了用于從尿液樣本中分離EV的HFD方案。在HFD的初始步驟中，用2000×g離心樣品以去除細(xì)胞，細(xì)菌和碎片作為沉淀。然后，將上清液保存在透析膜（1000kPa）中，1000kPa或更小的顆粒相應(yīng)地以靜水壓差通過(guò)膜。較后，通過(guò)離心將外泌體囊泡沉降40,000×g。在HFD分離過(guò)程中，外泌體級(jí)分在早期階段恢復(fù)，與多步離心相比，這被認(rèn)為是一個(gè)優(yōu)勢(shì)。與超速離心相比，HFD也被認(rèn)為是一種有效的方法。外泌體的分析需要根據(jù)不同來(lái)源的細(xì)胞選擇適宜的分離方法。

外泌體分離方法之親和層析分離法：在親和層析分離法方面，主要使用凝集素和合成Vn(venceremin)肽。凝集素將結(jié)合存在于外泌體表面的糖基化蛋白質(zhì)，從而使外泌體沉淀。Vn肽分離技術(shù)基于其對(duì)含有HSP的細(xì)胞外顆粒的高親和力。然而，這種方法比較容易使提取物被膜表面上含有上述標(biāo)記物的細(xì)胞和其他顆粒污染。外泌體分離方法之介電泳分離法：介電泳分離法主要利用不同大小的粒子在不均勻電場(chǎng)中的位置差異。外泌體被吸引到高電區(qū)域，而較大的顆粒將位于低電區(qū)域。該方法速度快，適合用于高通量篩選，但缺點(diǎn)是需要加熱。外泌體可通過(guò)細(xì)胞間物質(zhì)轉(zhuǎn)移影響細(xì)胞的增殖、分化和生物學(xué)行為。青島腦脊液外泌體蛋白檢測(cè)

外泌體的轉(zhuǎn)移涉及細(xì)胞因子、基質(zhì)降解酶和細(xì)胞外基質(zhì)重塑等多種調(diào)節(jié)步驟。青島腦脊液外泌體蛋白檢測(cè)

外泌體分離方法之免疫學(xué)分離方法：免疫學(xué)分離法是利用受位于外泌體膜中的選定蛋白質(zhì)標(biāo)記物影響的抗體對(duì)外泌體進(jìn)行標(biāo)記。這些標(biāo)記的外泌體可以進(jìn)一步輕松處理和純化，例如，使用微芯片或磁珠。磁分離后，外泌體被純化，磁珠被溶解和去除。通過(guò)這種簡(jiǎn)單快速的方法，就可以獲得較高純度提取物，但不會(huì)分離出缺乏磁性標(biāo)記抗體識(shí)別的表面標(biāo)記的外泌體，這可能導(dǎo)致外泌體池表現(xiàn)效果不佳。這種方法雖然既省時(shí)又直接，輸出純度較高，但也需要較為昂貴的試劑。青島腦脊液外泌體蛋白檢測(cè)

蘇州英澤生物醫(yī)藥科技有限公司位于張家港經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)(市高新技術(shù)創(chuàng)業(yè)服務(wù)中心)F幢3樓，擁有一支專(zhuān)業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)。在英澤生物近多年發(fā)展歷史，公司旗下現(xiàn)有品牌EZB,EZBioscience,EZMED等。公司不僅*提供專(zhuān)業(yè)的生物醫(yī)藥和醫(yī)療領(lǐng)城內(nèi)的技術(shù)開(kāi)發(fā)、技術(shù)咨詢(xún)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓及相 關(guān)的技術(shù)服務(wù);化工原料及產(chǎn)品、生物儀器試劑(不含危化 品)、儀器儀表、電子產(chǎn)品的購(gòu)銷(xiāo);生物技 術(shù)推廣服務(wù);貨物或技術(shù)進(jìn)出口(國(guó)家禁止或涉及行政審批的 貨物和技術(shù)進(jìn)出口除外) (依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目， 經(jīng)相關(guān)部門(mén)批準(zhǔn)后方可開(kāi)展經(jīng)營(yíng)活 動(dòng)) 一般項(xiàng)目:醫(yī)學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;工業(yè)酶制劑研發(fā)(除依法須 能分準(zhǔn)機(jī)項(xiàng)目外，同時(shí)還建立了完善的售后服務(wù)體系，為客戶(hù)提供良好的產(chǎn)品和服務(wù)。自公司成立以來(lái)，一直秉承“以質(zhì)量求生存，以信譽(yù)求發(fā)展”的經(jīng)營(yíng)理念，始終堅(jiān)持以客戶(hù)的需求和滿意為重點(diǎn)，為客戶(hù)提供良好的RNA\DNA試劑盒，外泌體提取試劑盒，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，熒光定量PCR，從而使公司不斷發(fā)展壯大。