過柱法DNA提取的工作原理：獨特的結(jié)合液/蛋白酶K迅速裂解細胞和滅活細胞內(nèi)核酸酶，然后基因組DNA在高鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,抑制物去除液和漂洗液將細胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除，較后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。1、采用離心吸附柱和緩沖液系統(tǒng)。樣品裂解后，DNA在高鹽條件下與硅膠膜結(jié)合，在低鹽、高PH值時從硅膠膜上洗脫下來。2、破壞紅細胞，通常利用紅細胞與白細胞膜結(jié)構(gòu)的差異，先使紅細胞裂解，經(jīng)離心后收集白細胞。3、白細胞裂使膜蛋白和核的蛋白變性，游離DNA，通常是采用離子型表面活性劑使蛋白質(zhì)變性。4、除去變性蛋白質(zhì)：通常采用蛋白沉淀劑沉淀變性蛋白質(zhì)，使DNA留在上清液中。5、在高鹽環(huán)境下使DNA從有機溶劑（如無水乙醇）中析出。DNA提取的原則，保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性。天津血清RNA提取試劑研發(fā)

DNA提取方法：核酸（nucleicacid）在生物界中堪稱主宰，是一類非常重要的生物大分子，它在生物的繁衍、發(fā)育、維持、衰老和死亡等一切生命活動中扮演著重要的角色，目前，核酸已成為生物化學(xué)、遺傳學(xué)以及其他有關(guān)生命學(xué)科的熱門研究課題，其覆蓋面之廣、進展之速為其他學(xué)科所望塵莫及。而進行核酸研究的首先個前提就是能夠?qū)⒑怂釓谋姸嗉姺睆?fù)雜的生物大分子中提取出來，并純化到一定程度，以便進行相應(yīng)的科學(xué)研究和實際應(yīng)用。DNA提取原則：保證DNA一級結(jié)構(gòu)的完整性；提取的DNA樣品中不應(yīng)存在對酶存在抑制作用的有機溶劑及過高濃度的金屬離子；其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到較低程度；排除其它核酸分子（RNA）的污染。成都無需氯仿RNA提取可測序若DNA分子量小或一片模糊，表明DNA有降解。

DNA提取方法：一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速離心后取上清，所得DNA大小為100-150kb二.甲酰胺解聚法：破碎細胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。三.玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細胞，將裂解物鋪于乙醇上，然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。四.異丙醇沉淀法：基本同1法，只用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在異丙醇中可溶狀態(tài)）五.表面活性劑快速制備法：用TritonX-100A或NP40表面活性劑破碎細胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。六.加熱法快速制備：加熱96℃-100℃，五分鐘，然后離心后取上清，可用于PCR反應(yīng)。七.堿變性快速制備：先用NaOH作用20分鐘，再加HCI中和，離心后取上清，含少量DNA。

什么是RNA提?。縍NA提取是指從樣品中純化RNA的過程。RNA提取的常規(guī)方法稱為硫氰酸胍-苯酚-氯仿提取。Guanidiniumthiocyanate使蛋白質(zhì)變性。此外，它破壞水分子的氫鍵并用作離液劑。RNA提取中使用一種特殊試劑，稱為三試劑。它含有硫氰酸胍、苯酚和乙酸鈉。RNA提取的基本步驟的目的與DNA提取的目的相似。1.用冰冷的PBS洗滌細胞以維持細胞的滲透壓。2.吸出細胞并用Tri-reagent勻漿樣品。3.加入氯仿并搖勻。4.離心可能會出現(xiàn)三層。頂層是透明的水層。中間層或界面包含沉淀的DNA。底層是有機層，呈粉紅色。5.除去水層并加入異丙醇。離心可能會產(chǎn)生沉淀。6.用75%乙醇清洗沉淀?？諝飧稍镱w粒。7.用TE緩沖液或水溶解沉淀。DNA提取的原則，核酸樣品中不應(yīng)存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子。

DNA提取的基本步驟：1.細胞裂解與細胞裂解緩沖液裂解細胞膜；2.脂質(zhì)被洗滌劑和表面活性劑分解；3.通過添加蛋白酶消化蛋白質(zhì)；4.通過添加RNase消化RNA；5.通過加入濃鹽然后離心分離細胞碎片、消化蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和RNA；6.用冰冷的乙醇或異丙醇乙醇沉淀DNA。醋酸鈉的離子強度可用于改善沉淀。沉淀的DNA在較終溶液中呈線狀。酚-氯仿萃取也可用于從蛋白質(zhì)中分離DNA。在這里，苯酚使樣品中的蛋白質(zhì)變性，DNA在提取結(jié)束時保留在水相中。而且，在有機相中，您可以找到變性的蛋白質(zhì)。另一種提取DNA的方法是微柱純化。在這里，DNA與柱子的結(jié)合取決于緩沖液的pH值和鹽濃度。DNA提取的原則，其他核酸分子，如RNA，也應(yīng)盡量去除。上海核酸RNA提取

RNA提取是從細胞或組織中分離RNA的過程。天津血清RNA提取試劑研發(fā)

骨組織RNA提取之其它骨組織破碎方法：取出吸附柱RA，放入一個RNasefree離心管中，根據(jù)預(yù)期RNA產(chǎn)量在吸附膜的中間部位加30-50μlRNasefreewater（事先在70-90℃水浴中加熱可提高產(chǎn)量），室溫放置1分鐘，12,000rpm離心1分鐘。如果預(yù)期RNA產(chǎn)量>30μg，加30-50μlRNasefreewater重復(fù)步驟12，合并兩次洗液，或者使用首先次的洗脫液加回到吸附柱重復(fù)步驟一遍(如果需要RNA濃度高)。洗脫兩遍的RNA洗脫液濃度高,分兩次洗脫合并洗脫液的RNA產(chǎn)量比前者高15–30%，但是濃度要低，用戶根據(jù)需要選擇。天津血清RNA提取試劑研發(fā)

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