外泌體分離方法之密度梯度離心法：這種方法將超速離心機(jī)的超速離心與蔗糖密度梯度相結(jié)合。具體地說(shuō)，密度梯度離心用于將外泌體與非囊泡顆粒（例如蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)/RNA聚集體）分離。因此，該方法將囊泡與不同密度的顆粒分離。足夠的離心時(shí)間比較重要，否則如果外泌體部分具有相似的密度，則仍可能在外泌體部分中發(fā)現(xiàn)污染顆粒。該結(jié)構(gòu)不會(huì)讓大于1μm的細(xì)胞和其他顆粒進(jìn)入布線區(qū)域。一些較小的顆粒和細(xì)胞碎片可以進(jìn)入微柱區(qū)域，但被納米纖毛排除，形成直徑為30-200nm的孔。纖毛結(jié)構(gòu)選擇性地捕獲外泌體和小細(xì)胞外囊泡。超高速離心是常用的外泌體分離方法之一。廣州上清外泌體哪家好

外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用：miRNA是一類主要的小分子、單鏈、非編碼RNA分子，其成熟形式的長(zhǎng)度在20到22個(gè)核苷酸(NT)之間，在幾乎所有生物途徑中發(fā)揮重要作用，包括細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化、免疫反應(yīng)，細(xì)胞凋亡，代謝和疙瘩發(fā)生。外泌體在體液中的主要作用是可以保護(hù)miRNA，防止其生物分子在非生理?xiàng)l件下（多次凍融循環(huán)、長(zhǎng)期儲(chǔ)存和極端pH）降解。據(jù)報(bào)道，外泌體來(lái)源的miRNA在-20°C下可保持穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)5年，并且對(duì)凍融循環(huán)具有抵抗力.這也使外泌體成為病癥和其他疾病的潛在生物標(biāo)志物。miRNA與包括病癥在內(nèi)的許多疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，并且還被證明被遠(yuǎn)端或附近的受體細(xì)胞吸收作為外泌體中的貨物，作為細(xì)胞間通訊的一種方法，可能會(huì)影響發(fā)病機(jī)制。所以，外泌體可以被看作是miRNA轉(zhuǎn)移至目標(biāo)受體細(xì)胞的載體。東莞血液外泌體分離生產(chǎn)商外泌體可通過(guò)細(xì)胞間物質(zhì)轉(zhuǎn)移影響細(xì)胞的增殖、分化和生物學(xué)行為。

分離外泌體的方法之超濾：它使用孔徑為50-450nm的膜過(guò)濾器從細(xì)胞碎片和較大的EV中分離外泌體。通過(guò)使用納米尺寸的濾膜，可以分離出目標(biāo)尺寸的外泌體。超濾法通常用作超速離心的后續(xù)步驟，以及凝膠過(guò)濾和色譜的較后一步。超濾可以通過(guò)切向流過(guò)濾（TFF）或直流過(guò)濾（DFF）方法進(jìn)行處理。DFF方法也稱為死端過(guò)濾，存在膜污染和顆粒分離受損的問(wèn)題。此外，DFF只適用于小體積樣品，例如高達(dá)30mL的樣品。TFF也稱為錯(cuò)流過(guò)濾是一種更快速、高效和方便的分離大規(guī)模外泌體體積的過(guò)程，TFF是樣品流體切向流過(guò)濾膜并避免形成濾餅或堵塞的過(guò)程。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過(guò)濾離心，這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí)，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問(wèn)題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時(shí)，量少。外泌體的分離方法可能還存在一定的局限性和偏差。

外泌體分離方法之沉淀分離方法：：基于聚合物的沉淀分離方法是利用超親水聚合物來(lái)增強(qiáng)小尺寸顆粒（如外泌體）的沉淀。聚乙二醇的常用濃度在8%到15%之間變化。使用這種方法，將含有外泌體的溶液與聚合物一起孵育過(guò)夜，并在約10,000×g下進(jìn)一步離心。外泌體分離方法之FFF分離法：FFF目前是一種很少使用但前景不錯(cuò)的一種外泌體分離方法。分離由橫流力驅(qū)動(dòng)，并基于顆粒的分子量或流體動(dòng)力學(xué)直徑。它包括高純度、高效率和短時(shí)間處理，但迄今為止，F(xiàn)FF在外泌體分離中的使用案例較少，還有待進(jìn)一步開發(fā)。手動(dòng)超高速離心和自動(dòng)化離心儀器的分離效果可能存在差異?？焖偬崛⊥饷隗w純度高

不同來(lái)源的外泌體可能需要采用不同的離心參數(shù)和分離方法。廣州上清外泌體哪家好

外泌體的表征方法之非光學(xué)方法：非光學(xué)方法主要包括掃描電子顯微鏡（SEM）、透射電子顯微鏡（TEM）、冷凍電子顯微鏡（Cryo-EM）、原子力顯微鏡（AFM）、免疫檢測(cè)方法（ELISA）、傅立葉變換紅外光譜（FTIR）、可調(diào)諧電阻脈沖傳感(TRPS)和單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)。SEM、TEM和AFM方法通常用于直接膜結(jié)構(gòu)和形態(tài)測(cè)定，而ELISA檢測(cè)提供各種結(jié)構(gòu)顆粒（主要是蛋白質(zhì)和受體）的檢測(cè)和量化，例如，用于外泌體形態(tài)的確認(rèn)。單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)也用于外泌體定量，但也可用于檢測(cè)特定標(biāo)記物和確定外泌體亞群。廣州上清外泌體哪家好

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