定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR）廣用于特異性核酸的第三方檢測，RNA轉(zhuǎn)錄物豐度的測量和高通量實(shí)驗(yàn)結(jié)果的驗(yàn)證。qPCR通常在標(biāo)準(zhǔn)的96孔板上進(jìn)行，現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室里的qPCR就像移液器和燒杯那樣常見。在引物設(shè)計(jì)和功能分析方面，NCBI里的數(shù)據(jù)已經(jīng)很多了。但這些數(shù)據(jù)只是理論上的，在具體實(shí)驗(yàn)操作中還要經(jīng)過各種復(fù)雜的計(jì)算和實(shí)驗(yàn)。在以前的qPCR中，為了使測定正常進(jìn)行，通常需要進(jìn)行大量耗時(shí)的反復(fù)試驗(yàn)。而現(xiàn)在，這些步驟都可以通過數(shù)據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)來完成。更方便的是，已經(jīng)有人把qPCR實(shí)驗(yàn)中所用到的各種工具都整合到了一個(gè)工具箱里。比如，Biosearch這個(gè)網(wǎng)站里，就有一個(gè)成套的qPCR工具箱OligoToolbox，其中包含的工具能做很多實(shí)驗(yàn)計(jì)算工作。瑞普信提供專業(yè)QPCR第三方基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)檢測。甘肅人ELISA第三方檢測中心

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磷酸化蛋白的WB第三方檢測在實(shí)操過程中有哪些注意事項(xiàng)？研究完某一蛋白的磷酸化情況后比較好也要研究一下該蛋白總的表達(dá)量。如壓完 phospho-p38 抗體后，我會(huì)把相同的 membrane 做 strip 后再壓 p38, 然后再 strip 一次，再壓內(nèi)標(biāo) actin 。做磷酸化蛋白 WB 時(shí)，除了目標(biāo)蛋白的 band 以外，往往會(huì)出現(xiàn)非特異性的 band. 磷酸化抗體不好的話，甚至?xí)撼龇翘禺愋缘?band, 而沒有你想要的 band, 所以壓片以后，一定要根據(jù) markers 比對(duì)一下，壓出的 band 分子量是否正確。 磷酸化蛋白 WB 時(shí) backgroud 也往往較深，所以壓片時(shí)間要適當(dāng)，不能太長或過短，太長則 backgroud 太深蓋住想要的那條 band, 時(shí)間過短則可能沒有 band 或者 band 太淺。磷酸化蛋白 WB 時(shí)，要用TBST，不能用PBST。用 TBST 洗時(shí)也要注意一下，搖床的轉(zhuǎn)速不要太快，洗的時(shí)間不要太長，孵育一抗和二抗之后分別洗 5min 3 次即可，寧愿 background 深一些，總比做不出來強(qiáng)得多 . 另外，洗的時(shí)候，比較好不要把幾張 membrane 疊在一起洗。

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