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重慶細(xì)胞遷移第三方檢測中心

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-09-07

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    3充分裂解后。12000rpm離心5min,取上清。4取部分上清蛋白用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度,按如下步驟①按試劑盒說明書將A液和B液以501的比例配制成工作液;②取2000μg/mL的BSA標(biāo)準(zhǔn)品,用PBSpH2000μg/mL、1500μg/mL、1000μg/mL、750μg/mL、500μg/mL、250μg/mL、125μg/mL、25μg/mL、0μg/mL共9時(shí)間就是金錢,效率就是生命唯有惜時(shí)才能成功,唯有努力方可成就個(gè)濃度梯度;③取上清液10μL,用PBS稀釋20倍;④每管中加20μL蛋白標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋后的上清液,再加上述工作液,37℃孵育30min,562nm處測吸光度,記錄OD值;⑤根據(jù)蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及相應(yīng)OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲曲線線yy00..00000077xx00..11553322RR2200..0..4400..8811..2211..000000濃濃度度uugg//mmLLOODD值值各各濃濃度度標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)品品線線性性各各濃濃度度標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)品品根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方程計(jì)算樣品總蛋白濃度(mg/mL)樣品.OD值mg/、Western-Blot檢測總蛋白中目的蛋白表達(dá)。1灌膠①蒸餾水清洗灌膠玻璃板,豎直晾干。②配制13%分離膠10mL,加TEMED10μL、10%過硫酸銨100μL,混勻后立即灌膠,灌至齒梳下緣2~3mm(事先做好標(biāo)記),用異丙醇封閉液面以去除氣泡并隔絕空氣,室溫靜置45min待膠完全聚合。

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