高活力原代小鼠肝細(xì)胞的分離與純化，目的建立一種穩(wěn)定的能獲得高活力和高純度原代小鼠肝細(xì)胞的分離和純化方法.方法對(duì)傳統(tǒng)的兩步原位膠原酶灌注法進(jìn)行4個(gè)方面的優(yōu)化,主要包括選擇逆向灌流,將持續(xù)灌注法改為間斷灌注后夾閉門靜脈法,嚴(yán)格控制膠原酶消化時(shí)間和將分離的肝細(xì)胞懸液進(jìn)行低速Percoll單密度離心純化.分離后的肝細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng).肝細(xì)胞活力和得率用臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè).結(jié)果新鮮分離的小鼠原代肝細(xì)胞活力能穩(wěn)定達(dá)到87%±3%,平均活細(xì)胞總數(shù)為8×10^5每克小鼠體重,絕大部分細(xì)胞在體外培養(yǎng)2h后貼壁生長(zhǎng).結(jié)論優(yōu)化后的肝細(xì)胞分離方法更為穩(wěn)定,有效,分離到的肝細(xì)胞具有高活力的優(yōu)點(diǎn). 原代肝細(xì)胞的應(yīng)用范圍十分廣闊。歡迎來(lái)電咨詢上海中喬新舟！吉林大西洋鮭魚(yú)原代肝細(xì)胞系

細(xì)胞培養(yǎng)方法：1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 吉林大西洋鮭魚(yú)原代肝細(xì)胞系上海中喬新舟 原代肝細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)。歡迎來(lái)電咨詢上海中喬新舟！

原代培養(yǎng)就是提取的細(xì)胞體外次培養(yǎng)。，當(dāng)原代培養(yǎng)成功以后，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)和細(xì)胞不斷分裂，一則細(xì)胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制，生長(zhǎng)速度減慢甚至停止；另一方面也會(huì)因營(yíng)養(yǎng)物不足和代謝物積累而不利于生長(zhǎng)或發(fā)生中毒。此時(shí)就需要將培養(yǎng)物分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)器皿（瓶）內(nèi)，再進(jìn)行培養(yǎng)。這個(gè)過(guò)程就稱為傳代，網(wǎng)上有很多解釋，一般的實(shí)驗(yàn)用的到細(xì)胞的都是直接傳代培養(yǎng)，別的地方買過(guò)來(lái)細(xì)胞株細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束直接進(jìn)行。

原代肝細(xì)胞屬于高度分化的細(xì)胞，對(duì)體外培養(yǎng)條件的要求比傳代細(xì)胞高，其在體外存活時(shí)間也比傳代細(xì)胞短，采用單層膠原培養(yǎng)法進(jìn)行體外培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞存活時(shí)間為1周左右[25]。本實(shí)驗(yàn)是在Seglen兩步灌流法的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，結(jié)合逆向灌流、多次低速離心等方法成功分離獲取活率高、純度高的原代肝細(xì)胞，且體外存活時(shí)間可達(dá)1周，與文獻(xiàn)[25]報(bào)道一致。體外培養(yǎng)48h后給予不同濃度的FFA混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)進(jìn)行誘導(dǎo)，誘導(dǎo)24h后油紅O染色顯示肝細(xì)胞內(nèi)有脂滴沉積，肝細(xì)胞內(nèi)TG含量增加，且隨著FFA濃度升高而增加，成功構(gòu)建了肝脂肪變性細(xì)胞模型。本方法操作簡(jiǎn)單、時(shí)間短、成功率高，因此具有廣泛應(yīng)用價(jià)值。原代肝細(xì)胞的租賃行情，貴不貴？歡迎來(lái)電咨詢上海中喬新舟！

新的化合物可能引起各類組織的毒性損傷，這些毒性可以在相應(yīng)的2D或3D培養(yǎng)的細(xì)胞模型中進(jìn)行早期檢測(cè)，為藥物研發(fā)提供重要參考資料。藥物代謝與過(guò)程主要發(fā)生在肝臟，因此肝臟是易受到毒物影響的受累，肝臟毒性也是藥物安全性檢測(cè)時(shí)必須要測(cè)試的項(xiàng)目之一。原代肝細(xì)胞作為一種體外模型，在藥學(xué)研究方面具有極大優(yōu)勢(shì)——能獲得大量性狀較為統(tǒng)一的樣本，很好的保留了與體內(nèi)一致的細(xì)胞色素P450酶的水平，基本維持了肝臟在體內(nèi)時(shí)的代謝功能。無(wú)論是機(jī)理性研究還是肝毒性研究都非常合適。因此在藥物研發(fā)的臨床前階段和臨床階段，在毒代動(dòng)力學(xué)中，使用包括人類在內(nèi)的哺乳動(dòng)物的原代肝細(xì)胞，建立體外肝模型，是優(yōu)先的研究方式。上海中喬新舟 原代肝細(xì)胞安心售后。歡迎來(lái)電咨詢上海中喬新舟！吉林大西洋鮭魚(yú)原代肝細(xì)胞系

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    原代培養(yǎng)：1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺(tái)內(nèi)，固定在泡沫板上。2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開(kāi)皮膚一個(gè)橫切口，將皮膚向上撕開(kāi)，然后剪開(kāi)肌肉等，暴露出腹腔，在左側(cè)找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中。3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無(wú)用的組織。4.將篩網(wǎng)置于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網(wǎng)上進(jìn)行碾磨，同時(shí)不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。5.將碾磨好的細(xì)胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。6.加入10ml培養(yǎng)液，吹打混勻，取樣計(jì)數(shù)。7.將稀釋好的細(xì)胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養(yǎng)瓶上。面做好標(biāo)志，注明細(xì)胞、組別及日期。然后將培養(yǎng)瓶置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 吉林大西洋鮭魚(yú)原代肝細(xì)胞系

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1、原代細(xì)胞：ScienCell（中國(guó)區(qū)正規(guī)一級(jí)代理）人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞。

2、培養(yǎng)基：原代細(xì)胞**低血清、無(wú)血清、無(wú)異源蛋白無(wú)動(dòng)物成分培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑：胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。

4、細(xì)胞系（株）：種類豐富（1000余種），已通過(guò)STR鑒定；提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。

5、自研產(chǎn)品：支原體檢測(cè)/qing除試劑盒、端粒酶檢測(cè)試劑盒、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。

6、技術(shù)服務(wù)：綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過(guò)表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建，細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。